無菌室無菌操作及風(fēng)險評估

1、無菌試驗及無菌操作對滅活前樣品無菌試驗不合格的分析目錄滅活前樣品無菌試驗不合格的分析滅活前樣品無菌試驗不合格的分析（一）無菌試驗無菌試驗：是無菌的制劑、原料、無菌試驗：是無菌的制劑、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種輔料及其他品種是否無菌的一種檢查方法，同時指出檢查方法，同時指出“若供試品若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)了供試品在該檢驗條件下未發(fā)現(xiàn)微生物的污染微生物的污染”。（一）無菌試驗培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件 培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存

2、在 2 25 、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在一年內(nèi)使用。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基常用培養(yǎng)基營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（一）無菌試驗改良馬丁培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基v酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0gv葡萄糖 5.0g 氯化鈉 2.5gvL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0 mlv硫乙醇酸鈉 0.5g 瓊脂 0.75gv(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 水 1000 ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后為 7.1

3、 0.2 。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的 1/2 。滅菌。在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的 1/5 ，否則，須經(jīng) 100 水浴加熱至粉紅色消失（不超過 20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置 30 35 培養(yǎng)。返回改良馬丁培養(yǎng)基v2.改良馬丁培養(yǎng)基v胨 5.0g 磷酸氫二鉀 1.0gv酵母浸出粉 2.0g 硫酸鎂 0.5gv葡萄糖 20.0g 水 1000 ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 值約為 6.8 ，煮沸，加入葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)

4、 pH 值使滅菌后為 6.4 0.2 ，分裝，滅菌。改良馬丁培養(yǎng)基置 23 28 培養(yǎng)。返回返回營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基v胨 10.0g 氯化鈉 5.0gv牛肉浸出粉 3.0g 水 1000 ml取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入 14.0g 瓊脂，調(diào)節(jié) pH 值使滅菌后為 7.2 0.2 ，分裝，滅菌。返回返回 （二）無菌操作概念人員操作物品無菌操作原則無菌操作原則環(huán)境概念明確基本概念明確基本概念 進行無菌操作時，應(yīng)首先明確無菌區(qū)、非無菌區(qū)、進行無菌操作時，應(yīng)首先明確無菌區(qū)、非無菌區(qū)、無菌物品的概念。無菌物品的概念。v無菌區(qū)：指經(jīng)滅菌處理且未被污染的區(qū)域。無菌區(qū)：指經(jīng)滅菌

5、處理且未被污染的區(qū)域。v非無菌區(qū)：指未經(jīng)滅菌處理，或雖滅菌處理但又非無菌區(qū)：指未經(jīng)滅菌處理，或雖滅菌處理但又被污染的區(qū)域。被污染的區(qū)域。v無菌物品：指通過物理或化學(xué)的方法滅菌后保持無菌物品：指通過物理或化學(xué)的方法滅菌后保持無菌狀態(tài)的物品。無菌狀態(tài)的物品。 環(huán)境操作環(huán)境清潔、寬敞操作環(huán)境清潔、寬敞操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬敞、定期消毒；操作環(huán)境應(yīng)清潔、寬敞、定期消毒；操作臺清潔、干燥、平坦、物品布局合理；操作臺清潔、干燥、平坦、物品布局合理；無菌操作前半小時應(yīng)減少走動、避免塵埃飛揚。無菌操作前半小時應(yīng)減少走動、避免塵埃飛揚。人員工作人員儀表符合規(guī)范工作人員儀表符合規(guī)范 無菌操作前，工作人員應(yīng)戴好帽子和口

6、罩，修剪無菌操作前，工作人員應(yīng)戴好帽子和口罩，修剪指甲并洗手，穿好無菌衣、戴無菌手套。指甲并洗手，穿好無菌衣、戴無菌手套。人員物品物品放置有序，標志明顯物品放置有序，標志明顯無菌物品必須與非無菌物品分開放置，并且有明無菌物品必須與非無菌物品分開放置，并且有明顯標志。顯標志。無菌物品不可暴露于空氣中，應(yīng)存放于無菌包或無菌物品不可暴露于空氣中，應(yīng)存放于無菌包或無菌容器內(nèi)。無菌容器內(nèi)。無菌包外需標明物品名稱、滅菌日期，并按失效無菌包外需標明物品名稱、滅菌日期，并按失效期先后順序擺放。期先后順序擺放。 操作無菌操作無菌操作v進行無菌操作時，操作者身體應(yīng)于無菌區(qū)保持進行無菌操作時，操作者身體應(yīng)于無菌區(qū)保

7、持一定距離。一定距離。v取放無菌物品時，應(yīng)面向無菌區(qū)。取放無菌物品時，應(yīng)面向無菌區(qū)。v取用無菌物品時應(yīng)使用無菌持物鉗。取用無菌物品時應(yīng)使用無菌持物鉗。v手臂應(yīng)保持在腰部以上，手不可直接接觸無菌手臂應(yīng)保持在腰部以上，手不可直接接觸無菌物品。物品。 操作v非無菌物品應(yīng)遠離無菌區(qū)；無菌物品一經(jīng)取出，非無菌物品應(yīng)遠離無菌區(qū)；無菌物品一經(jīng)取出，即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)。即使未用，也不可放回?zé)o菌容器內(nèi)。v避免面對無菌區(qū)談笑、咳嗽、打噴嚏。避免面對無菌區(qū)談笑、咳嗽、打噴嚏。v如無菌物品疑有污染或已被污染，應(yīng)予更換并如無菌物品疑有污染或已被污染，應(yīng)予更換并重新滅菌。重新滅菌。（三）滅活前樣品無菌試驗不合

8、格的分析取樣物品前準備取樣環(huán)節(jié)除菌過程操作前準備a）在對滅活罐進行整體）在對滅活罐進行整體CIP前，零部件是否拆卸前，零部件是否拆卸并進行沖洗。（如溫度探頭、取樣閥）并進行沖洗。（如溫度探頭、取樣閥）b）滅活罐）滅活罐SIP的過程是否按照的過程是否按照SOP執(zhí)行，滅菌時執(zhí)行，滅菌時間是否滿足間是否滿足SOP的規(guī)定。的規(guī)定。C）除菌管道是否按照）除菌管道是否按照SOP進行滅菌，滅菌結(jié)束應(yīng)進行滅菌，滅菌結(jié)束應(yīng)立即與外界隔斷，并保證管道內(nèi)正壓。立即與外界隔斷，并保證管道內(nèi)正壓。d）除菌濾材是否按照）除菌濾材是否按照SOP進行檢測、沖洗、滅菌，進行檢測、沖洗、滅菌，滅菌結(jié)束后是否放置于無菌區(qū)域，并關(guān)閉

9、所有手動滅菌結(jié)束后是否放置于無菌區(qū)域，并關(guān)閉所有手動隔膜閥和氣嘴，包口不是否完整無破損。隔膜閥和氣嘴，包口不是否完整無破損。 e）除菌濾器連接過程是否按照）除菌濾器連接過程是否按照SOP進行操作，連進行操作，連接過程中，人員、環(huán)境是否達到無菌操作的要求。接過程中，人員、環(huán)境是否達到無菌操作的要求。取樣物品a）取樣瓶是否按照）取樣瓶是否按照SOP要求進行清潔滅菌，瓶口要求進行清潔滅菌，瓶口有無破損現(xiàn)象，錫箔紙封口是否完好。有無破損現(xiàn)象，錫箔紙封口是否完好。b）塞子鋁帽是否按照）塞子鋁帽是否按照SOP要求進行清潔滅菌。要求進行清潔滅菌。c）持物鉗是否完好可用并進行消毒。）持物鉗是否完好可用并進行消

10、毒。d）取樣物品滅菌后是否擺放在無菌區(qū)域。）取樣物品滅菌后是否擺放在無菌區(qū)域。除菌過程操作a）除菌過程開始前房間環(huán)境的清潔消毒措施是否）除菌過程開始前房間環(huán)境的清潔消毒措施是否到位，能否滿足潔凈室等級要求。到位，能否滿足潔凈室等級要求。b）除菌過程人員是否按照）除菌過程人員是否按照SOP進行操作，人員進行操作，人員進行無菌操作時是否滿足無菌操作的要求。進行無菌操作時是否滿足無菌操作的要求。c）在層流罩下進行操作的人員是否按照）在層流罩下進行操作的人員是否按照SOP進進行局部消毒。行局部消毒。d）操作過程所使用的設(shè)備設(shè)施是否異常。）操作過程所使用的設(shè)備設(shè)施是否異常。e）操作人員是否定期進行局部消毒。）操作人員是否定期進行局部消毒。取樣環(huán)節(jié)a）取樣物品是否按照）取樣物品是否按照SOP進行清洗滅菌，滅菌后進行清洗滅菌，滅菌后的物品是否按照規(guī)定存放于無菌區(qū)域。的物品是否按照規(guī)定存放于無菌區(qū)域。b）取樣操作前，取樣閥是否進行）取樣操作前，取樣閥是否進行SIP，并在使用，并在使用周期內(nèi)；操作人員是否進局部消毒，局部的取樣環(huán)周期內(nèi)；操作人員是否進局