實驗一微生物培養(yǎng)基配制和滅菌

1、1微生物學實驗2課堂紀律課堂紀律n嚴格遵守實驗室規(guī)章制度嚴格遵守實驗室規(guī)章制度n嚴肅課堂紀律嚴肅課堂紀律 不允許無故曠課、早退不允許無故曠課、早退 遲到遲到 工作服工作服3進入微生物實驗室的注意事項進入微生物實驗室的注意事項n1.1.進入實驗室必須穿白大褂進入實驗室必須穿白大褂n2.2.實驗室內(nèi)不準吃東西實驗室內(nèi)不準吃東西n3.3.在實驗室內(nèi)不要趴在桌子上在實驗室內(nèi)不要趴在桌子上n4.4.實驗完成后值日生留下做好清潔工作實驗完成后值日生留下做好清潔工作（值日工作實行組值日工作實行組長負責制，納入實驗成績）長負責制，納入實驗成績）n5.5.離開實驗室前洗手離開實驗室前洗手n6.6.實驗現(xiàn)象要隔天

2、觀察的實驗，必須要按時到實驗室記錄實驗現(xiàn)象要隔天觀察的實驗，必須要按時到實驗室記錄實驗現(xiàn)象實驗現(xiàn)象4實驗安排n實驗一 微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌n實驗二 微生物的純培養(yǎng)技術n實驗三 顯微鏡油鏡的使用及細胞形態(tài)的觀察n實驗四 土壤、水的細菌學檢查n實驗五 放線菌、霉菌及酵母菌的形態(tài)觀察n實驗六 環(huán)境因素對微生物的影響n實驗七 微生物生理生化反應觀察n實驗八 微生物遺傳實驗5實驗報告要求實驗報告要求n一個實驗，一份實驗報告，有連續(xù)性的實驗等到做一個實驗，一份實驗報告，有連續(xù)性的實驗等到做完后再寫實驗報告。完后再寫實驗報告。n實驗報告內(nèi)容：實驗報告內(nèi)容：1.1.實驗項目名稱實驗項目名稱2.2.實驗目的

3、實驗目的3.3.實驗原理實驗原理4. 4. 實驗步驟實驗步驟5.5.實驗結果與分析（即使實驗失敗也要寫好分析）實驗結果與分析（即使實驗失敗也要寫好分析）6.6.思考題思考題實實 驗驗 一一微生物培養(yǎng)基的配制和微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌滅菌一、實一、實 驗驗 目目 的的n了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。程。n掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。（一）培養(yǎng)基的配制（一）培養(yǎng)基的配制8二二. .實實 驗驗 原原 理理1. 培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。不同微生物對營養(yǎng)物質的要求各不相同，加之實驗和

4、研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。 9n培養(yǎng)基按成分可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基；按物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基（0.2%0.5%的瓊脂）和液體培養(yǎng)基；按用途可分為基礎培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基等。n培養(yǎng)基培養(yǎng)基n 是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基簡介培養(yǎng)基

5、簡介碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水碳源、氮源、無機鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質的濃度要適宜營養(yǎng)物質的濃度要適宜營養(yǎng)物質之間的配比要適宜營養(yǎng)物質之間的配比要適宜培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等水活度和氧化還原電勢等物理化學條件要適宜。物理化學條件要適宜。細菌：細菌： pH 7.08.0放線菌：放線菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻類：藻類： pH 6.07.0原生動物：原生動物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培養(yǎng)條件：通常培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為按照培

6、養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 n1.1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 n2.2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%2%左右的凝固劑的左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。 n3.3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%0.20.5%凝固凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。 瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自18801880年開始用于配制微年開始用于配制微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。實驗室的常用培養(yǎng)基：實驗室

7、的常用培養(yǎng)基：細菌：細菌： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏放線菌：高氏1 1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：霉菌： 查氏合成培養(yǎng)基；查氏合成培養(yǎng)基；15稱量稱量-配置配置-調節(jié)調節(jié)pHpH值值-過濾過濾-分裝分裝-滅菌滅菌1.1.稱量稱量 按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不按照培養(yǎng)基配方，準確稱量各成份放于燒杯中。對于不是粉狀（如肉膏），應用燒杯稱量。是粉狀（如肉膏），應用燒杯稱量。培養(yǎng)基配制的基本步驟培養(yǎng)基配制的基本步驟162.2.配調配調 向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。向燒杯中加入

8、適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。 如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補足所失水分。水分。 如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調成糊狀并在如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補足火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補足所失水分。所失水分。173.3.調節(jié)調節(jié)pHpH值值 培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時用pHpH試紙測

9、試紙測pHpH，然后根，然后根據(jù)要求加酸或堿（一般用據(jù)要求加酸或堿（一般用1molHcl1molHcl和和1molNaOH1molNaOH），要緩慢少量），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pHpH時，不用調節(jié)。時，不用調節(jié)。 4.4.過濾過濾 用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。185.5.分裝分裝 將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝?？谌厦奕９腆w培養(yǎng)基要趁熱裝。 分裝時要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分分裝時要

10、避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：裝量可分為下面幾方面：（1 1）斜面：裝量為管長的）斜面：裝量為管長的1/4-1/51/4-1/5。（2 2）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不超過管長的超過管長的1/31/3。（3 3）三角瓶：裝量不超過容積）三角瓶：裝量不超過容積1/21/2。196.6.滅菌滅菌 塞棉塞，包扎，滅菌。塞棉塞，包扎，滅菌。 高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進行，加熱高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進行，加熱使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密閉，增加了器內(nèi)的壓力，使使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密

11、閉，增加了器內(nèi)的壓力，使水的沸點升高，從而獲得高于水的沸點升高，從而獲得高于100100度的蒸汽溫度。度的蒸汽溫度。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固體固體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方：牛肉膏牛肉膏 0.3g 0.3g 蛋白胨蛋白胨 1g 1g 氯化鈉氯化鈉 0.5g 0.5g 瓊脂瓊脂 1.5g1.5g 水水 100mL 100mL pH 7.27.4 pH 7.27.4 滅菌滅菌 121121，20min20min牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨半固體半固體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0.3g牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨液體液體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0g21牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨

12、培養(yǎng)基的配制1 1、固體培養(yǎng)基（平板制作）、固體培養(yǎng)基（平板制作）2 2、固體培養(yǎng)基（斜面制作）、固體培養(yǎng)基（斜面制作）2 2、半固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基3 3、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基三三. .操作步驟及本次實驗具體安排操作步驟及本次實驗具體安排22（一）平板固體培養(yǎng)基制作（一）平板固體培養(yǎng)基制作（由第由第1,2,3,41,2,3,4組同學各做組同學各做2X100ml2X100ml） 1.1.稱取一定量的稱取一定量的營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂到到250ml250ml的三角瓶中的三角瓶中. . 2. 2. 加入加入100mL100mL水水. . 3. 3.塞上硅膠塞塞上硅膠塞, ,用牛皮紙包扎好用牛皮紙包

13、扎好; ; 4. 4.高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 5.5.滅菌后滅菌后, ,當培養(yǎng)基冷卻至當培養(yǎng)基冷卻至5050左右時左右時,傾注平皿傾注平皿( (每每100ml100ml可可制備制備5-65-6個平皿個平皿) ) 6. 6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用 23（二）斜面培養(yǎng)基制作（二）斜面培養(yǎng)基制作（由第由第5,65,6組同學各做組同學各做2525支斜面培養(yǎng)基支斜面培養(yǎng)基）1.1.稱取一定量的稱取一定量的營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂到到100ml100ml的三角瓶中的三角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 放入水浴鍋內(nèi)溶解放入水浴鍋內(nèi)溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒

14、入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6.6.擺斜面擺斜面, ,凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .24用于活化菌種，或培養(yǎng)菌種的斜面用于保存菌種的斜面25擱置斜面擱置斜面 當培養(yǎng)基冷卻至當培養(yǎng)基冷卻至5050左右時，將試管帶棉塞的一左右時，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養(yǎng)基形成的端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養(yǎng)基形成的斜面的長度不超過試管總長的一半。斜面的長度不超過試

15、管總長的一半。26（三）半固體培養(yǎng)基制作（三）半固體培養(yǎng)基制作（由第由第7,87,8組同學各做組同學各做2525支半固體培養(yǎng)基支半固體培養(yǎng)基）1.1.按牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到按牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到250ml250ml的的三角瓶中三角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 放入水浴鍋內(nèi)溶解放入水浴鍋內(nèi)溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中

16、, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6.6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .27按下列配方及方法配制按下列配方及方法配制 28（四）液體培養(yǎng)基制作（四）液體培養(yǎng)基制作（由第由第9,109,10組同學各做組同學各做2525支液體培養(yǎng)基支液體培養(yǎng)基）1.1.按牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到按牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方稱取相應成分到250ml250ml的三的三角瓶中角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 充分溶解充分溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量注意盡量不要讓培養(yǎng)

17、基沾到試管口不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6. 6. 冷卻后放冰箱備用冷卻后放冰箱備用. .29按下列配方及方法配制按下列配方及方法配制 各組任務：各組任務：第第1-41-4組配制固體培養(yǎng)基，制平板；組配制固體培養(yǎng)基，制平板；第第5.65.6組配制固體培養(yǎng)基，制斜面；組配制固體培養(yǎng)基，制斜面；第第7,87,8組配制半固體培養(yǎng)基；組配制半固體培養(yǎng)基；第第9,109,10組配制液體培養(yǎng)基。組配制液體培養(yǎng)基。31注：試管加棉塞注：試管加棉塞( (最好最好) ) 培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加

18、一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。上加一個棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時，應使棉塞長度的加棉塞時，應使棉塞長度的2/32/3在試管口內(nèi)，如下圖所示在試管口內(nèi)，如下圖所示。n任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應及時徹底滅菌，以備任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。n常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學藥品滅菌等方法。除菌、輻射滅菌、化學藥品滅菌等方法。n本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質凝固變性而達到是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質凝固變性而達到滅菌的。滅菌的。（二）培養(yǎng)基的滅菌（二）培養(yǎng)基的滅菌高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌 一般培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基: : 1.05 Kg/cm 1.05 Kg/cm2 2, 121.3, 15-30 min, 121.3, 15-30 min 含糖培養(yǎng)