實(shí)驗(yàn)一微生物培養(yǎng)基配制和滅菌

1、1微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)2課堂紀(jì)律課堂紀(jì)律n嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度n嚴(yán)肅課堂紀(jì)律嚴(yán)肅課堂紀(jì)律 不允許無故曠課、早退不允許無故曠課、早退 遲到遲到 工作服工作服3進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室的注意事項(xiàng)n1.1.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿白大褂n2.2.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不準(zhǔn)吃東西實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不準(zhǔn)吃東西n3.3.在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不要趴在桌子上在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不要趴在桌子上n4.4.實(shí)驗(yàn)完成后值日生留下做好清潔工作實(shí)驗(yàn)完成后值日生留下做好清潔工作（值日工作實(shí)行組值日工作實(shí)行組長負(fù)責(zé)制，納入實(shí)驗(yàn)成績）長負(fù)責(zé)制，納入實(shí)驗(yàn)成績）n5.5.離開實(shí)驗(yàn)室前洗手離開實(shí)驗(yàn)室前洗手n6.6.實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象要隔天

2、觀察的實(shí)驗(yàn)，必須要按時(shí)到實(shí)驗(yàn)室記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象要隔天觀察的實(shí)驗(yàn)，必須要按時(shí)到實(shí)驗(yàn)室記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象4實(shí)驗(yàn)安排n實(shí)驗(yàn)一 微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌n實(shí)驗(yàn)二 微生物的純培養(yǎng)技術(shù)n實(shí)驗(yàn)三 顯微鏡油鏡的使用及細(xì)胞形態(tài)的觀察n實(shí)驗(yàn)四 土壤、水的細(xì)菌學(xué)檢查n實(shí)驗(yàn)五 放線菌、霉菌及酵母菌的形態(tài)觀察n實(shí)驗(yàn)六 環(huán)境因素對(duì)微生物的影響n實(shí)驗(yàn)七 微生物生理生化反應(yīng)觀察n實(shí)驗(yàn)八 微生物遺傳實(shí)驗(yàn)5實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求n一個(gè)實(shí)驗(yàn)，一份實(shí)驗(yàn)報(bào)告，有連續(xù)性的實(shí)驗(yàn)等到做一個(gè)實(shí)驗(yàn)，一份實(shí)驗(yàn)報(bào)告，有連續(xù)性的實(shí)驗(yàn)等到做完后再寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。完后再寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告。n實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)報(bào)告內(nèi)容：1.1.實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目名稱2.2.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

3、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.3.實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理4. 4. 實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟5.5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（即使實(shí)驗(yàn)失敗也要寫好分析）實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（即使實(shí)驗(yàn)失敗也要寫好分析）6.6.思考題思考題實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 一一微生物培養(yǎng)基的配制和微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌滅菌一、實(shí)一、實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 目目 的的n了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。程。n掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。掌握加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。（一）培養(yǎng)基的配制（一）培養(yǎng)基的配制8二二. .實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 原原 理理1. 培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。不同微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的要求各不相同，加之實(shí)驗(yàn)和

4、研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。 9n培養(yǎng)基按成分可分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基；按物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基（0.2%0.5%的瓊脂）和液體培養(yǎng)基；按用途可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基等。n培養(yǎng)基培養(yǎng)基n 是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基簡介培養(yǎng)基

5、簡介碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等水活度和氧化還原電勢等物理化學(xué)條件要適宜。物理化學(xué)條件要適宜。細(xì)菌：細(xì)菌： pH 7.08.0放線菌：放線菌：pH 7.58.5酵母菌：酵母菌： pH 3.86.0霉菌：霉菌：pH 4.05.8藻類：藻類： pH 6.07.0原生動(dòng)物：原生動(dòng)物： pH 6.08.0初始初始pHpH通常培養(yǎng)條件：通常培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類按照培養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為按照培

6、養(yǎng)基的物理狀態(tài)可分為 n1.1.液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液體狀態(tài)培養(yǎng)基。 n2.2.固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2%2%左右的凝固劑的左右的凝固劑的固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。 n3.3.半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.20.5%0.20.5%凝固凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。 瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自18801880年開始用于配制微年開始用于配制微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。實(shí)驗(yàn)室的常用培養(yǎng)基：實(shí)驗(yàn)室

7、的常用培養(yǎng)基：細(xì)菌：細(xì)菌： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏放線菌：高氏1 1號(hào)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；號(hào)合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：霉菌： 查氏合成培養(yǎng)基；查氏合成培養(yǎng)基；15稱量稱量-配置配置-調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH值值-過濾過濾-分裝分裝-滅菌滅菌1.1.稱量稱量 按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。對(duì)于不按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱量各成份放于燒杯中。對(duì)于不是粉狀（如肉膏），應(yīng)用燒杯稱量。是粉狀（如肉膏），應(yīng)用燒杯稱量。培養(yǎng)基配制的基本步驟培養(yǎng)基配制的基本步驟162.2.配調(diào)配調(diào) 向燒杯中加入適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。向燒杯中加入

8、適量的水，攪拌，使其溶解（可加熱助溶）。 如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時(shí)，需不斷攪拌，并如是配制固體培養(yǎng)基，在瓊脂的熔化時(shí)，需不斷攪拌，并控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待完全熔化后，補(bǔ)足所失水分。水分。 如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀并在如果配方中含有淀粉，先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀并在火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補(bǔ)足火上加熱攪拌，然后加足水分及其他藥品，待完全熔化后補(bǔ)足所失水分。所失水分。173.3.調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH值值 培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時(shí)用培養(yǎng)基溶解均勻并冷卻至室溫時(shí)用pHpH試紙測

9、試紙測pHpH，然后根，然后根據(jù)要求加酸或堿（一般用據(jù)要求加酸或堿（一般用1molHcl1molHcl和和1molNaOH1molNaOH），要緩慢少量），要緩慢少量且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然且多加攪拌。培養(yǎng)基配方為自然pHpH時(shí)，不用調(diào)節(jié)。時(shí)，不用調(diào)節(jié)。 4.4.過濾過濾 用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。用濾紙或多層紗布過濾，一般無特殊要求可省去。185.5.分裝分裝 將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）將制好的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角瓶內(nèi)，管（瓶）口塞上棉塞。固體培養(yǎng)基要趁熱裝?？谌厦奕?。固體培養(yǎng)基要趁熱裝。 分裝時(shí)要避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分分裝時(shí)要

10、避免培養(yǎng)基粘染管（瓶）口，引起污染。分裝量可分為下面幾方面：裝量可分為下面幾方面：（1 1）斜面：裝量為管長的）斜面：裝量為管長的1/4-1/51/4-1/5。（2 2）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不）液體培養(yǎng)基、高層培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基：裝載量不超過管長的超過管長的1/31/3。（3 3）三角瓶：裝量不超過容積）三角瓶：裝量不超過容積1/21/2。196.6.滅菌滅菌 塞棉塞，包扎，滅菌。塞棉塞，包扎，滅菌。 高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進(jìn)行，加熱高壓蒸汽滅菌法：是在密閉的加壓容器內(nèi)進(jìn)行，加熱使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密閉，增加了器內(nèi)的壓力，使使器內(nèi)的水產(chǎn)生蒸汽，由于密

11、閉，增加了器內(nèi)的壓力，使水的沸點(diǎn)升高，從而獲得高于水的沸點(diǎn)升高，從而獲得高于100100度的蒸汽溫度。度的蒸汽溫度。牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固體固體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方：牛肉膏牛肉膏 0.3g 0.3g 蛋白胨蛋白胨 1g 1g 氯化鈉氯化鈉 0.5g 0.5g 瓊脂瓊脂 1.5g1.5g 水水 100mL 100mL pH 7.27.4 pH 7.27.4 滅菌滅菌 121121，20min20min牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨半固體半固體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0.3g牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨液體液體培養(yǎng)基配方：培養(yǎng)基配方： 瓊脂瓊脂 0g21牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨

12、培養(yǎng)基的配制1 1、固體培養(yǎng)基（平板制作）、固體培養(yǎng)基（平板制作）2 2、固體培養(yǎng)基（斜面制作）、固體培養(yǎng)基（斜面制作）2 2、半固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基3 3、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基三三. .操作步驟及本次實(shí)驗(yàn)具體安排操作步驟及本次實(shí)驗(yàn)具體安排22（一）平板固體培養(yǎng)基制作（一）平板固體培養(yǎng)基制作（由第由第1,2,3,41,2,3,4組同學(xué)各做組同學(xué)各做2X100ml2X100ml） 1.1.稱取一定量的稱取一定量的營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂到到250ml250ml的三角瓶中的三角瓶中. . 2. 2. 加入加入100mL100mL水水. . 3. 3.塞上硅膠塞塞上硅膠塞, ,用牛皮紙包扎好用牛皮紙包

13、扎好; ; 4. 4.高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 5.5.滅菌后滅菌后, ,當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至5050左右時(shí)左右時(shí),傾注平皿傾注平皿( (每每100ml100ml可可制備制備5-65-6個(gè)平皿個(gè)平皿) ) 6. 6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用 23（二）斜面培養(yǎng)基制作（二）斜面培養(yǎng)基制作（由第由第5,65,6組同學(xué)各做組同學(xué)各做2525支斜面培養(yǎng)基支斜面培養(yǎng)基）1.1.稱取一定量的稱取一定量的營養(yǎng)瓊脂營養(yǎng)瓊脂到到100ml100ml的三角瓶中的三角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 放入水浴鍋內(nèi)溶解放入水浴鍋內(nèi)溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒

14、入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6.6.擺斜面擺斜面, ,凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .24用于活化菌種，或培養(yǎng)菌種的斜面用于保存菌種的斜面25擱置斜面擱置斜面 當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至5050左右時(shí)，將試管帶棉塞的一左右時(shí)，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養(yǎng)基形成的端擱在一根木棒上。擱置的長度要合適，使培養(yǎng)基形成的斜面的長度不超過試管總長的一半。斜面的長度不超過試

15、管總長的一半。26（三）半固體培養(yǎng)基制作（三）半固體培養(yǎng)基制作（由第由第7,87,8組同學(xué)各做組同學(xué)各做2525支半固體培養(yǎng)基支半固體培養(yǎng)基）1.1.按牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方稱取相應(yīng)成分到按牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方稱取相應(yīng)成分到250ml250ml的的三角瓶中三角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 放入水浴鍋內(nèi)溶解放入水浴鍋內(nèi)溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量注意盡量不要讓培養(yǎng)基沾到試管口不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中

16、, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6.6.凝固后放冰箱備用凝固后放冰箱備用. .27按下列配方及方法配制按下列配方及方法配制 28（四）液體培養(yǎng)基制作（四）液體培養(yǎng)基制作（由第由第9,109,10組同學(xué)各做組同學(xué)各做2525支液體培養(yǎng)基支液體培養(yǎng)基）1.1.按牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方稱取相應(yīng)成分到按牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方稱取相應(yīng)成分到250ml250ml的三的三角瓶中角瓶中. .2. 2. 加入加入100mL100mL水水. .3. 3. 充分溶解充分溶解. .4. 4. 在空試管內(nèi)倒入在空試管內(nèi)倒入2 23mL3mL已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，已經(jīng)溶解好的培養(yǎng)基，【注意盡量注意盡量不要讓培養(yǎng)

17、基沾到試管口不要讓培養(yǎng)基沾到試管口】塞好硅膠塞塞好硅膠塞. .5.5.放入燒杯中放入燒杯中, ,高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌. .6. 6. 冷卻后放冰箱備用冷卻后放冰箱備用. .29按下列配方及方法配制按下列配方及方法配制 各組任務(wù)：各組任務(wù)：第第1-41-4組配制固體培養(yǎng)基，制平板；組配制固體培養(yǎng)基，制平板；第第5.65.6組配制固體培養(yǎng)基，制斜面；組配制固體培養(yǎng)基，制斜面；第第7,87,8組配制半固體培養(yǎng)基；組配制半固體培養(yǎng)基；第第9,109,10組配制液體培養(yǎng)基。組配制液體培養(yǎng)基。31注：試管加棉塞注：試管加棉塞( (最好最好) ) 培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口培養(yǎng)基分裝完畢以后，在管口上加

18、一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的2/32/3在試管口內(nèi)，如下圖所示在試管口內(nèi)，如下圖所示。n任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。n常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。n本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它本實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的。滅菌的。（二）培養(yǎng)基的滅菌（二）培養(yǎng)基的滅菌高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌 一般培養(yǎng)基一般培養(yǎng)基: : 1.05 Kg/cm 1.05 Kg/cm2 2, 121.3, 15-30 min, 121.3, 15-30 min 含糖培養(yǎng)