慶大霉素的制備工藝課程

1、慶大霉素的制備工藝v 慶大霉素的制備工藝v慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素, 主要用于主要用于治療細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的治療細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌引起的感染。慶大霉素能與細(xì)菌核糖體感染。慶大霉素能與細(xì)菌核糖體30s亞基結(jié)亞基結(jié)合，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。慶大霉素是為數(shù)合，阻斷細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。慶大霉素是為數(shù)不多的熱穩(wěn)定性的抗生素，因而廣泛應(yīng)于培不多的熱穩(wěn)定性的抗生素，因而廣泛應(yīng)于培養(yǎng)基配置。養(yǎng)基配置。慶大霉素化學(xué)式v化學(xué)式：慶大霉素的性狀v性狀： 常用其硫酸鹽，為白色或類白色結(jié)晶性粉末；無臭；有引濕性。在水中易溶，在乙醇、乙醚、丙酮或氯仿中不溶。 慶大霉

2、素的功能主治v功能主治： 對(duì)大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌、克雷白桿菌、奇異變形桿菌、某些吲哚變形桿菌、綠膿桿菌、某些奈瑟菌、某些無色素沙雷桿菌和志賀菌等革蘭陰性菌有抗菌作用。適用于敏感細(xì)菌所致的新生兒膿毒癥、敗血癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染（包括腦膜炎）、尿路生殖系統(tǒng)感染、呼吸道感染、胃腸道感染（包括腹膜炎）、膽道感染、皮膚、骨骼、中耳炎、鼻竇炎、軟組織感染（包括燒傷）、李斯特菌病。 硫酸慶大霉素工藝流程圖發(fā) 酵 用 小單 胞 菌一 級(jí) 種 子罐二 級(jí) 種 子罐三 級(jí) 種 子罐四 級(jí) 種 子罐酸 化 中 和交 換分 離 漂 洗產(chǎn) 品濃 縮噴 霧 干 燥成 鹽脫 色 壓 濾洗 滌 洗 脫脫 色無 菌 接 入培 養(yǎng)

3、 48小 時(shí) 左 右 ，pH自 然 ， 36-37培 養(yǎng) 24小 時(shí) 左 右 ，pH6.8-7.4培 養(yǎng) 24小 時(shí) 左 右 ，pH6.7-7.4培 養(yǎng) 4天 ，34-35洗 脫 收 率 98%濃 縮 收 率 88%炭 脫 收 率 95%調(diào) pH至 5.0-5.8噴 速 ： 20-80L/h進(jìn) 塔 溫 度 ： 116-135噴 霧 收 率 90%孢子懸浮液的制備流程及工藝要求孢子懸浮液的制備流程及工藝要求v設(shè)備：v1、蒸汽滅菌柜v2、雙人凈化工作臺(tái)孢子懸浮液的制備v操作步驟v1.分裝純化水至三角瓶，每瓶裝150mL左右。v2.組裝接種瓶及接種皮管，組裝嚴(yán)密，包扎結(jié)實(shí)。 v3.以上器材及接種用具

4、滅菌，1251C，60min。v4.在緩沖間穿好無菌衣，戴上無菌口罩，進(jìn)入潔凈室，符合人流物流進(jìn)出程序。v5.用酒精棉球擦拭超凈臺(tái)面雙手，先擦臺(tái)面，后擦手。v6.開啟超凈臺(tái)通風(fēng)，觀察風(fēng)速是否正常，將接種瓶、皮管、無菌水、接種鏟及斜面擺在潔凈臺(tái)上。v7.將滅菌純化水倒入茄子瓶中，一瓶純化水倒兩只茄子瓶。v8.用接種鏟將孢子刮下制成孢子懸浮液，用力適度，勿刮出培養(yǎng)基碎屑。v9.打開接種瓶瓶口，將孢子懸浮液全部倒入接種瓶中，注意不要倒在瓶口處，然后重新組裝好接種瓶及接種皮管。v10. 制備完畢關(guān)閉潔凈臺(tái)，出潔凈室，符合人流、物流進(jìn)出程序。種子的發(fā)酵培養(yǎng)v以一級(jí)種子為例說明v操作步驟v1.校正量具，小

5、于1kg用臺(tái)秤，大于1kg用磅秤。v2.先后將淀粉，玉米粉，硝酸鉀，蛋白胨，輕質(zhì)碳酸鈣稱好后裝在編織袋中，準(zhǔn)備投料。v3.向事先沖洗干凈并壓凈的一級(jí)罐中加水至埋住下層攪拌槳時(shí)，開攪拌，然后將稱好的物料緩緩加入罐中，再分別量取2%氯化鈷溶液和豆油加入罐中，加水至所需體積。上緊罐蓋，準(zhǔn)備滅菌。v4.打開罐底閥，放掉夾套水，夾層通蒸汽預(yù)熱至90后關(guān)閉。v5.由取樣管、壓出管、進(jìn)氣管3路進(jìn)蒸汽，進(jìn)行直接蒸汽滅菌。升溫，當(dāng)罐壓達(dá)0.1MPa時(shí)，保壓30min。保壓過程重要適當(dāng)控制進(jìn)氣、排氣。v6.滅菌結(jié)束，先關(guān)排氣閥，后關(guān)進(jìn)氣閥，當(dāng)罐壓低于空氣分過濾器壓力時(shí)，再開空氣進(jìn)氣閥，控制排氣要適當(dāng)。7.打開夾層

6、冷水閥，關(guān)閉罐底閥，打開回水閥降溫至38時(shí)關(guān)閉。消罐人員停攪拌，進(jìn)行壓差接種。8.消罐人員停攪拌，將罐壓降至0.04Mpa, 看罐人員配合種子組人員接種，先取無菌樣，接種前點(diǎn)燃火圈燒接種口，對(duì)接種口消毒，火焰要大，要均勻。用火圈保護(hù)打開接種咀套管。9.種子人員一手持接種瓶，一手將接種皮管插入接種咀。種子罐放在木盒或雙層布袋中以防爆裂，關(guān)閉種子罐機(jī)械攪拌。當(dāng)罐壓降至0.03-0.04MPa，種子組人員在火焰保護(hù)下將接種頭上的紗布迅速插入接種口上。10.種子人員高舉接種瓶并倒置，再由消罐人員慢慢降低罐壓至0.04Mpa,借壓將接種瓶中的孢子懸液引入罐內(nèi)。一次接種不完可以重復(fù)多次至接種完畢。罐壓應(yīng)維

7、持在0.04-0.08 Mpa之間。11.接種完畢，先關(guān)接種閥，再拔接種皮管，并擰上接種咀套管。12.調(diào)節(jié)進(jìn)排氣控制罐閥，空氣流量達(dá)到工藝要求，并開攪拌，交值班培養(yǎng)參數(shù)控制培養(yǎng)時(shí)間 罐溫罐壓空氣壓力空氣流量攪拌時(shí)間48h左右370.06Mpa0.1Mpa30m3/h培養(yǎng)時(shí)間 罐溫罐壓空氣壓力空氣流量攪拌時(shí)間24h左右370.03Mpa0.7Mpa170m3/h一級(jí)種子二級(jí)種子提煉車間生產(chǎn)概況v 提煉組的任務(wù)是將慶大霉素從來自發(fā)酵車間的發(fā)酵液中提煉出來，同時(shí)也負(fù)責(zé)本車間低單位稀氨洗脫液和成鹽炭脫車間活性炭濾餅中慶大霉素的提取，并最終得到含慶大霉素的洗脫液，送入濃縮崗位濃縮。提煉車間流程圖氨 回

8、收 罐回 收低 單 位 收 集 罐樹 脂 分 離 器酸 化 罐洗 脫 液 貯 灌漂 洗 罐陽 離 子 交 換 柱發(fā) 酵 液稀 氨 洗 滌 生 物效 價(jià) 低 于 2 0 0 u / m l陽 串 陰測 定 生 物 效 價(jià)高 于 6 0 0 u / m l低 于 600u/ml回 收 , 套 用 下 一 批 回 收套 用 下 一 批濃 氨洗 脫脫 色除 雜 質(zhì)分 離 樹 脂復(fù) 合 物提煉車間流程簡介酸化、中和加樹脂吸附發(fā)酵液分離陽離子交換柱飲用水疏松 稀酸洗0.05M鹽酸、0.02M氯化銨除鈣離子、鎂離子純化水沖洗除氯離子0.08-0.12M稀氨洗1:20VVM-1:40VVM除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)調(diào)節(jié)p

9、H值至堿性pH8.5-94.5%-5.3%濃氨 洗脫解析收集旋光效價(jià)1000u/mL 經(jīng)陽串陰管道進(jìn)入陰離子交換柱9500-12000L酸洗、堿中和再生樹脂低單位洗脫液貯罐 旋光效價(jià)200-1000u/mL3000-4000L作陽離子交換柱洗脫液回收、氨撈（再吸附)酸化罐樹脂分離器飽和樹脂漂洗柱漂洗高單位洗脫液脫色解析完畢后水洗使樹脂再生壓回酸化罐旁的樹脂計(jì)量槽需要時(shí)通空氣趕氣泡加入濃氨水洗脫液貯罐送入濃縮車間陰離子交換樹脂再生含部分慶大霉素的洗脫液流速1：100-150VVM慶大霉素的酸化中和v操作方法：v1.備好酸化用鹽酸、中和用10mol/LNaOH，壓備用樹脂入計(jì)量槽；v2.接發(fā)酵液2

10、0噸左右入酸化罐，緩緩加入鹽酸（約1.5噸），調(diào)pH1.4-3.0，加入泡敵消沫，計(jì)量體積。該過程目的在于裂解菌絲體，釋放其中的慶大霉素，以提高收率。v3. 加適量飲用水稀釋（20%左右），用10mol/LNaOH中和pH6.4-6.8；v4.按6.5萬u/mL(50噸、45噸罐)或6萬u/mL（30噸、65噸罐）計(jì)量加入732陽離子交換樹脂。30min后復(fù)測pH，控制在6.4-6.8。交換吸附5-8h。取樣送化驗(yàn)組測生物效價(jià)。慶大霉素的洗滌v操作方法:1. 配制0.5 mol/L HCl與0.2 mol/LNH4Cl混合液，0.08-0.12mol/L的稀氨。2. 每柱裝飽和樹脂1100-1

11、500L，用飲用水及空氣疏松樹脂并用飲用水趕走氣泡。3. 通入稀酸洗滌液至無鈣、鎂離子，完成后用飲用水沖洗至無Cl-，再用0.080.12mol/L稀氨水洗至pH 8.59.0。慶大霉素的洗脫和脫色v操作方法：v1. 配制4.5-5.3%的濃氨。v2. 用純化水疏松并沖洗樹脂中氮根。v3. 用4.5%-5.3%濃氨水解吸至洗脫液旋光效價(jià)控制在1000 u/mL。v4. 第2罐透光度低于70%時(shí)，用2mol/L HCl和2mol/L NaOH對(duì)711脫色樹脂進(jìn)行再生，使其可以循環(huán)使用。 慶大霉素的成鹽碳脫慶大霉素的成鹽碳脫v成鹽 配置人員穿好防護(hù)用品，先抽入總體積2/3的純化水，在夾層冷卻下再緩

12、慢抽入1/3的濃硫酸，攪拌均勻，冷卻應(yīng)在0.5小時(shí)以上。上批裝塔的濃縮液與本批濃縮液混合后壓入成鹽炭脫罐。在不斷攪拌及夾層通冷卻水冷卻下緩慢加入6mol/L的硫酸液，調(diào)pH至5.0-5.8，當(dāng)pH在5.0左右時(shí)取樣檢測。v炭脫： 成鹽液溫度降到45以下時(shí)，加入767型針用活性炭進(jìn)行炭脫，加炭量為成鹽液體積的5左右，在攪拌及夾層通蒸汽加熱下，升溫至655，保溫45min后，壓縮。第一遍炭脫液由儲(chǔ)罐壓入成鹽炭脫罐調(diào)pH在5.3左右，同法進(jìn)行第二遍炭脫。濾餅用預(yù)熱的純化水清洗至尾樣在500 u/mL以下，濃縮至比重1.10-1.13，套用于下一批。炭脫脫率在95以上。精煉車間濃縮液硫酸儲(chǔ)罐成鹽碳脫罐

13、壓濾器炭脫液儲(chǔ)罐透光率92%濃縮車間慶大霉素的炭脫流程圖慶大霉素的精煉慶大霉素的精煉v本噴霧工藝流程的操作要求如下：v1所用設(shè)備有噴霧液計(jì)量罐、折疊式預(yù)過濾器、折疊式過濾器、液體過濾器、離心噴霧塔、旋風(fēng)分離器、捕集器。計(jì)量罐微孔折疊式過濾器液體過濾器離心噴霧塔旋風(fēng)分離器袋式捕集器2清潔： 用純化水旋轉(zhuǎn)沖洗噴霧液計(jì)量罐內(nèi)壁，注意對(duì)折疊式預(yù)過濾器和折疊式過濾器進(jìn)行清潔時(shí)頂洗水要回收，噴霧液計(jì)量罐、折疊式預(yù)過濾器、折疊式過濾器、液體過濾器要純蒸汽消毒，而離心噴霧塔、旋風(fēng)分離器、捕集器則要熱干空氣消毒3消毒：接收料液前對(duì)系統(tǒng)相關(guān)設(shè)備用過濾蒸消，條件為過濾器消毒壓力為0.1MPa、30min，過濾器過料壓力為0.1MPa，儲(chǔ)罐、管道消毒壓力為0.11-0.13MPa、60min。4噴霧：（1）符合要求的炭脫液經(jīng)鈦棒過濾器抽壓至炭脫液計(jì)量罐，用無菌空氣經(jīng)0.45m、0.22m的濾膜過濾至噴量液計(jì)量罐中，再經(jīng)0.22m的濾膜輸送至離心噴霧塔，干粉由塔底收集至容器內(nèi)；（2）噴塔條件的控制： 熱空氣流量： 2500350