課件38尿素纖維素分解

1、背誦以下內(nèi)容 1、培養(yǎng)基的分類？、培養(yǎng)基的分類？ 2、培養(yǎng)基的成分有哪些？、培養(yǎng)基的成分有哪些？ 3、消毒和滅菌的區(qū)別及其常用方法？、消毒和滅菌的區(qū)別及其常用方法？ 4、培養(yǎng)基制備步驟？、培養(yǎng)基制備步驟？ 5、微生物常用接種方法？菌種保存方法？、微生物常用接種方法？菌種保存方法？習(xí)題處理學(xué)案537、11、12優(yōu)化大本P2271P2313課題課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)離與計(jì)數(shù)課題課題3 分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離項(xiàng)目?jī)?nèi)容要求考點(diǎn)1.微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)2.土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)3.分解纖維素的微生物的分離重難點(diǎn)微生物的培養(yǎng)和分離方

2、法及微生物培養(yǎng)的具體操作一、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)一、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（一）篩選菌株（一）篩選菌株KHKH2 2POPO4 4 1.4g 1.4g NaHPO NaHPO4 4 2.1g 2.1g MgSO MgSO4 4 H H2 2O 0.2gO 0.2g 葡萄糖葡萄糖 10.0g10.0g 尿素尿素 1.0g1.0g 瓊脂瓊脂 15.0g15.0g 將上述物質(zhì)溶解后，將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到用蒸餾水定容到1000mL1000mL。 該培養(yǎng)基的配方中，為該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？源的分別是什么物

3、質(zhì)？ 此配方能否篩選出產(chǎn)生此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？脲酶的細(xì)菌？為什么？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素氮源：尿素能。只有產(chǎn)生脲酶的能。只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌能利用尿素作為氮細(xì)菌能利用尿素作為氮源而生存。源而生存。學(xué)案54例1以尿素為以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基（全營(yíng)養(yǎng)全營(yíng)養(yǎng)）是是分離分離尿素尿素細(xì)菌細(xì)菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無選有無選擇性擇性實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組對(duì)照組培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型是否是否接種接種 目的目的 結(jié)果結(jié)果只生長(zhǎng)尿只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌素細(xì)菌生長(zhǎng)多種生長(zhǎng)多種微生物微生物是是（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法（二）統(tǒng)計(jì)菌落

4、數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)一定容積的樣品計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)一定容積的樣品中微生物數(shù)量。中微生物數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù)C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)M代表稀釋倍數(shù)代表稀釋倍數(shù)(2)活菌計(jì)數(shù)法活菌計(jì)數(shù)法（稀釋涂布平板稀釋涂布平板）原理：當(dāng)樣品

5、的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌出樣品中大約含有多少活菌。學(xué)案54鞏固練習(xí)2看課本看課本P22，并討論你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如，并討論你認(rèn)為這兩位同學(xué)的作法正確嗎？如果有問題，錯(cuò)在哪？果有問題，錯(cuò)在哪？第一位同學(xué)：沒有第一位同學(xué)：沒有重復(fù)實(shí)驗(yàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布（至少涂布3 3個(gè)平板）個(gè)平板）第二位同學(xué)：第二位同學(xué)：A A組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)用于計(jì)算平均值組結(jié)果誤差過大，不應(yīng)

6、用于計(jì)算平均值注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)選擇菌落數(shù)在選擇菌落數(shù)在3030300300的平板上計(jì)數(shù)。的平板上計(jì)數(shù)。需培養(yǎng)計(jì)算出需培養(yǎng)計(jì)算出三個(gè)或三個(gè)以上三個(gè)或三個(gè)以上的平板菌的平板菌落求落求平均數(shù)平均數(shù)。統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低低。閱讀閱讀P22P222323頁頁“（三）設(shè)置對(duì)照（三）設(shè)置對(duì)照”一段討論教材中提出一段討論教材中提出的問題。的問題。(1)A(1)A同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？同學(xué)出現(xiàn)此結(jié)果的可能原因？(2)(2)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，幫助設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)，幫助A A同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素？結(jié)果的因素？完成學(xué)案完成學(xué)案543設(shè)

7、置對(duì)照填空設(shè)置對(duì)照填空土壤取樣土壤取樣 樣品稀釋樣品稀釋 取樣取樣涂布涂布 微生物培養(yǎng)微生物培養(yǎng) 觀察并記觀察并記錄結(jié)果錄結(jié)果 細(xì)菌計(jì)數(shù)細(xì)菌計(jì)數(shù)（四）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（四）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)流程閱讀課本閱讀課本P2324資料一、二、三資料一、二、三樣品稀釋涂布平板樣品稀釋涂布平板稀釋倍數(shù)為稀釋倍數(shù)為 10101 1 10106 6。每個(gè)稀釋度均用。每個(gè)稀釋度均用3 3個(gè)選擇培養(yǎng)基個(gè)選擇培養(yǎng)基和和1 1個(gè)蛋白胨培養(yǎng)基個(gè)蛋白胨培養(yǎng)基。1 1、取土用的、取土用的小鐵鏟小鐵鏟的盛土樣的的盛土樣的信封信封在使用前都需要在使用前都需要滅菌滅菌。2 2、應(yīng)在、應(yīng)在火焰旁火焰旁稱取土

8、壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。中，塞好棉塞。3 3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁火焰旁操作。操作。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品的稀釋度等。（五）操作提示（五）操作提示（六）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（六）結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 1. 1.培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？是否篩選出菌落？ 對(duì)照的培養(yǎng)基對(duì)照的培養(yǎng)基無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染無菌落說明培養(yǎng)基沒有污染。 牛肉膏培養(yǎng)基的牛肉膏培養(yǎng)基

9、的菌落數(shù)目多余選擇培養(yǎng)基的菌菌落數(shù)目多余選擇培養(yǎng)基的菌落數(shù)目落數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。（六）（六）結(jié)果分析與評(píng)價(jià)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 2. 2.獲得某一稀釋度下，菌落數(shù)獲得某一稀釋度下，菌落數(shù)3030300300的平板，的平板，在這以稀釋度下是否至少有兩個(gè)平板的菌落數(shù)相在這以稀釋度下是否至少有兩個(gè)平板的菌落數(shù)相接近？接近？ 相接近，說明操作成功。相接近，說明操作成功。（七）課題延伸（七）課題延伸2、纖維素酶、纖維素酶二、分解纖維素的微生物的分離二、分解纖維素的微生物的分離纖維素酶是一種纖維素酶是一種復(fù)合酶復(fù)合酶，至少包括三種，至少包括三種組分，即組分，

10、即C1酶、酶、 CX酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶。纖維素纖維素纖維纖維二糖二糖葡萄糖葡萄糖C1酶酶Cx酶酶葡萄糖葡萄糖苷酶苷酶朗讀課本朗讀課本P27(1)篩選纖維素分解菌的方法是篩選纖維素分解菌的方法是_ 該方法可以通過該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法剛果紅染色法顏色顏色3、纖維素分解菌的篩選原理、纖維素分解菌的篩選原理(2)其原理是：剛果紅可以與纖維素形成其原理是：剛果紅可以與纖維素形成_，當(dāng)纖維素被，當(dāng)纖維素被_分解后，分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_為中心的為中心的_，我們可以通過，我們可以通過_來篩選纖維素分解菌。來篩選纖維素分解菌

11、。紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素酶纖維素分解菌纖維素分解菌 透明圈透明圈是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈朗讀課本P2812段可根據(jù)是否可根據(jù)是否產(chǎn)生產(chǎn)生透明圈透明圈來篩選纖維來篩選纖維素分解菌素分解菌土壤土壤取樣取樣選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)梯度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到布到鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落什么什么樣的樣的環(huán)境環(huán)境取樣取樣?培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ? 挑選什挑選什么樣的么樣的菌落菌落? ?如何鑒別如何鑒別? ?根據(jù)根據(jù)：微生物：微生物對(duì)生存環(huán)境的對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；環(huán)境中去找；目的：目的：增加纖維素增加纖維素分解菌的濃度，分解菌的濃度，以以確保能夠從

12、樣品中確保能夠從樣品中分離到所需要的微分離到所需要的微生物；生物；剛果紅染色法剛果紅染色法4、分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程、分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于屬于_（固體、液體）培（固體、液體）培養(yǎng)基，原因是養(yǎng)基，原因是_閱讀資料二閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：，回答以下幾問題：液體液體沒有添加瓊脂沒有添加瓊脂2、該培養(yǎng)基對(duì)微生物、該培養(yǎng)基對(duì)微生物_（具有，不具有）選擇作用。（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是如果具有，其選擇機(jī)制是_ 具有具有 以纖維素粉為唯一以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖碳源，能分解纖

13、維素的微生物可以大量繁殖；維素的微生物可以大量繁殖；若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)將將_改為改為_。3、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？纖維素粉纖維素粉用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基【資料資料】剛果紅染色法剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅在倒平板時(shí)就加入剛果紅思考：思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足 方法一方法一 缺點(diǎn)是操作煩瑣，加入剛果

14、紅溶液會(huì)使菌缺點(diǎn)是操作煩瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)落之間發(fā) 生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本生混雜；優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用上是纖維素分解菌的作用 方法二方法二 優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問題優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問題缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可以使能缺點(diǎn)一是由于培養(yǎng)基中還含有淀粉類物質(zhì)，可以使能產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)；缺點(diǎn)二有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過程中生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌會(huì)降解剛

15、果紅，形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分不易區(qū)分（ 1 1）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩）培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落選出菌落 對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。培養(yǎng)基制作合格。 如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。了分解纖維素的微生物。 （2 2）分離的結(jié)果是否一致）分離的結(jié)果是否一致 由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌和放線菌的數(shù)量，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取的數(shù)量

16、，因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌土樣的環(huán)境不同，不同同學(xué)也可能得到真菌和放線菌等不同的分離結(jié)果。等不同的分離結(jié)果。5、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 為了確定分離得到的是纖維素為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行分解菌，還需要進(jìn)行_實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有_ _ 發(fā)酵和發(fā)酵和_ _ 發(fā)酵。纖維發(fā)酵。纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的紙等纖維素所產(chǎn)生的_ _ 含量含量進(jìn)行定量測(cè)定。進(jìn)行定量測(cè)定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶 液體液體 固體固體 葡萄糖葡萄糖 比

17、較項(xiàng)目比較項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理培養(yǎng)基培養(yǎng)基類型類型目的目的鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原理原理現(xiàn)象現(xiàn)象方法方法將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有尿素做氮源的選擇尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)基上將細(xì)菌涂布在只有將細(xì)菌涂布在只有纖維素粉做碳源的纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株篩選菌株選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)比較比較項(xiàng)目項(xiàng)目分解尿素的細(xì)菌分解尿素的細(xì)菌纖維素分解菌纖維素分解菌選選擇擇培培養(yǎng)養(yǎng)原理原理培養(yǎng)基類培養(yǎng)基類型型目的目的鑒鑒定定培培養(yǎng)養(yǎng)基基原原理理現(xiàn)現(xiàn)象象方方法法剛果紅可以與纖維素形成剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶催化分解后紅色纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解上就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈菌為中心的透明圈觀察菌落周圍是否有著色的觀察菌落周圍是否有著色的環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌觀察菌落周圍是否出現(xiàn)觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈來篩選纖維素分解菌透明圈來篩選纖維