1細菌培養(yǎng)接種、常用生化反應(yīng)及細菌生長方式

1、實驗報告:課程名稱：醫(yī)學微生物學指導(dǎo)老師： 績：i實驗名稱：細菌培養(yǎng)接種、常用生化反應(yīng)及細菌生長方式 實驗類型:同組學生姓名：:一、實驗?zāi)康暮鸵螅ū靥睿┒?、實驗?nèi)容和原理（必填）:三、主要儀器設(shè)備（必填）四、操作方法和實驗步驟:五、實驗數(shù)據(jù)記錄和處理六、實驗結(jié)果與分析（必填）:七、討論、心得:一、實驗?zāi)康?1.了解細菌常用培養(yǎng)基:2.掌握細菌的分離培養(yǎng)技術(shù)及純種移種法:3.熟悉細菌各種生長現(xiàn)象:4.熟悉細菌常用生化反應(yīng):二、實驗材料:生理鹽水、大腸桿菌液、白色葡萄球菌液、痢疾桿菌液，接種環(huán)、酒精燈以及多種培養(yǎng)基。:三、操作方法:1.細菌接種法1）分離培養(yǎng)V -平板劃線法（葡萄球菌/大腸埃希菌

2、）裝2）純種培養(yǎng)法斜面培養(yǎng)基接種法（葡萄球菌/大腸埃希菌）a）用左手握住菌種管和斜面培養(yǎng)基管，右手持接種環(huán)或接種針。b）用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。c）用接種環(huán)或接種針伸入菌種管內(nèi)，挑取用來接種的菌苔。d）伸入斜面培養(yǎng)管內(nèi)，先從斜面底部到頂端拖一條接種線，再自下而上蜿蜒劃線。e）接種完成之后，用火焰滅菌培養(yǎng)管口，并塞上棉塞，置于37 培養(yǎng)。半固體培養(yǎng)基接種法-穿刺接種法（大腸埃希菌/痢疾枉菌）a）用左手握住菌種管和半固體培養(yǎng)管，右手持接種針b）用右手小指與手掌、小指與無名指分別拔出兩管的棉塞，將管口通過火焰滅菌。c）用接種針伸入菌種管內(nèi)，挑取用來接種的

3、菌苔。d）垂直刺入半固體中心，至近管底部，然后沿穿刺線退出。e）塞回棉塞，接種針重新滅菌。接種完畢，于37 培養(yǎng)1824h，觀察生長情況。液體培養(yǎng)基接種法（葡萄球菌/大腸埃希菌/痢疾桿菌）/a）用滅菌接種環(huán)挑取用來接種的菌苔。力b）在試管內(nèi)壁與液面交界處輕輕研磨，使細菌均勻得散落在液體培養(yǎng)基中。示教1）細菌的生長現(xiàn)象液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基2）常用生化反應(yīng)乳糖發(fā)酵試驗Indol試驗硫化氫試驗?zāi)蛩胤纸庠囼炈?、實驗結(jié)果細菌接種試驗1）乳糖發(fā)酵試驗2）Indol 試驗3）硫化氫試驗4）尿素分解試驗如左圖所示在IIIIII區(qū)細 菌分布比較集中，在W區(qū) 占布了二分之一的培養(yǎng)基 中，肉眼可見大量的

4、單個 菌落以供挑選純種用。對大腸桿菌的分離細菌的生長現(xiàn)象1）大腸桿菌（固體培養(yǎng)基）圓形凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤 2）痢疾桿菌（半固體培養(yǎng)基）沿穿刺線生長 3）白色葡萄球菌（液體培養(yǎng)基）成白色，葡萄串狀，液體未混濁常用生化反應(yīng)大腸桿菌，傷寒桿菌+，產(chǎn)堿桿菌-大腸桿菌+，乙副傷寒桿菌-大腸桿菌-，變形桿菌+痢疾桿菌-，變形桿菌+ 五、結(jié)果分析大腸桿菌的分離使單菌落出現(xiàn)。通過劃布使單個細菌被分離出來。細菌生長中大腸桿菌：具鞭毛，無芽孢；痢疾桿菌：無芽胞，無莢膜，無鞭毛兼性厭氧；白色葡萄球菌 既表皮葡萄球菌，無鞭毛，無芽孢，無莢膜。生化反應(yīng)：1）糖發(fā)酵試驗原理：不同細菌具有不同的糖分解酶，故分解

5、各種糖后的產(chǎn)物也不相同，有的產(chǎn)酸，有 的尚有氣體形成，借此可鑒別各種細菌。乳糖發(fā)酵試驗在腸道病原菌的鑒定中尤其重要。接種細菌 若能分解糖產(chǎn)酸則漠甲酚紫指示劑由紅變黃。若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成，杜氏小管內(nèi) 則聚集有氣泡；不分解，則指示劑不變色。2）吲哚（Indol）試驗原理：有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)）。吲 哚無色不能直接察見，加入對二甲基氨基苯甲醛試劑（吲哚試劑），作用后能形成紅色的玫瑰吲哚， 則被肉眼所識別。3）硫化氫試驗原理：某些細菌能分解培養(yǎng)基中胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氫。硫化氫遇鐵（如硫 酸亞鐵）或鉛離子，則形成黑褐色的硫化亞鐵（或硫化

6、鉛）沉淀物，黑色沉淀物愈多，表示生成的硫化 氫量愈多，硫化氫試驗用的培養(yǎng)基中含有硫代硫酸鈉，它是一種還原劑，能保持還原環(huán)境，使形成 的硫化氫不再被氧化。4）尿素分解試驗原理：有的細菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培養(yǎng)基pH值上升而變成 堿性，使酚紅指示劑呈現(xiàn)紅色，是為陽性反應(yīng)。六、討論心得培養(yǎng)基配成后，滅菌要充分，單個或少數(shù)細菌（或其他微生物的細胞、孢子）接種到固體培養(yǎng)基 表面，如果條件適宜，就會形成以母細胞為中心的體形較大的子細胞群體。這種由單個或少量細胞在 固體培養(yǎng)基表面繁殖形成的、肉眼可見的子細胞群體稱為菌落。菌落形態(tài)包括菌落的大小、形狀、邊緣、光澤、質(zhì)地、顏色和透明程度等。每一

7、種細菌在一定條 件下形成固定的菌落特征。不同種或同種在不同的培養(yǎng)條件下，菌落特征是不同的。這些特征對菌種 識別、鑒定有一定意義。細胞形態(tài)是菌落形態(tài)的基礎(chǔ)，菌落形態(tài)是細胞形態(tài)在群體集聚時的反映。細 菌是原核微生物，故形成的菌落也??；細菌個體之間充滿著水分，所以整個菌落顯得濕潤，易被接種 環(huán)挑起；球菌形成隆起的菌落；有鞭毛細菌常形成邊緣不規(guī)則的菌落；具有莢膜的菌落表面較透明， 邊緣光滑整齊；有芽孢的菌落表面干燥皺褶；有些能產(chǎn)生色素的細菌菌落還顯出鮮艷的顏色。如果細 菌菌體接種于半固體培養(yǎng)基中或液體培養(yǎng)基中，是不能形成菌落的。在半固體培養(yǎng)基中，接種的無鞭 毛的細菌只沿著穿刺線生長，而有鞭毛的細菌可在

8、穿刺線的周圍擴散生長。細菌菌體接種于液體培養(yǎng) 基中，細菌生長后能使液體培養(yǎng)基變得混濁?；鞚崆闆r視細菌對氧氣需求的不同而有所不同：好氧 菌僅使上部培養(yǎng)液混濁，厭氧菌使底部培養(yǎng)液混濁，兼性厭氧菌使培養(yǎng)液上下均勻混濁；有的細菌可 在培養(yǎng)液表面形成菌環(huán)或菌膜，或在底部產(chǎn)生沉淀。從實驗結(jié)果可以看出，固體培養(yǎng)基主要用于劃線分離、純種移種，半固體培養(yǎng)基主要用于細菌動 力、保存菌種，液體培養(yǎng)基主要用于增菌。臨床上由于細菌感染而致病的各種標本及帶菌者所需檢查的各種標本，往往并非單一的細菌，而 且混有其它非致病菌（人體正常菌群）。因此當對此標本需作出細菌鑒定時，就必須從標本中分離出 致病菌，稱為細菌分離培養(yǎng)技術(shù)。另外，對已得到可疑病菌進行細菌鑒定及菌種保存等培養(yǎng)，稱為純 培養(yǎng)接種技術(shù)。平板劃線四區(qū)法：注意要嚴格無菌操作，灼燒后接種環(huán)要冷卻，劃線時用腕力，不要使接種環(huán)嵌入瓊 脂，各個分區(qū)要分明，在培養(yǎng)皿底部貼標簽，倒置培養(yǎng)一一防止細菌被沖散不同細菌由于所含的酶系統(tǒng)不