血液病分子病理診斷ppt課件

1、血液病分子病理診斷臨床運用北京海思特臨床檢驗所 分子病理室2021.06 多層次檢測平臺綜合運用細胞遺傳學 形狀學 分子生物學 流式細胞學 染色體核型分析 熒光原位雜交RT-PCR測序 多重 熒光巢式PCR 定量PCR直接測序 GeneScan 血液病診斷分型 定量監(jiān)測MRD 白血病預后 靶向治療 耐藥及疾病進展監(jiān)測 范可尼貧血 嗜血細胞綜合癥等血液病分子病理檢測 交融基因檢測基因突變檢測血液遺傳病檢測大多數(shù)情況下，某一患者只需一種交融基因陽性個案 t(15;17) with t(9;22)46,XY,t(9;22)(q34;q11),t(15;17)(q22;q21)BM morpholog

2、y: APL FCM: M3 QPCR: PML/RARA + BCR/ABL(190)+ 多重巢式RT-PCR 篩查 定性檢測 用于染色體斷裂點跨越很大的區(qū)域的交融基因。 熒光定量RT-PCR 定量檢測 內(nèi)參基因 c-abl 結(jié)果以比值表示，全程動態(tài)監(jiān)測 交融基因的拷貝數(shù)/內(nèi)參基因 c-ablPCR-測序血液病分子病理檢測篩查 每月定量監(jiān)測 3-6月定量監(jiān)測 每月定量監(jiān)測 CMPD-慢性骨髓增殖性疾病CML慢性粒細胞白血病Ph染色體t(9;22)(q34;q11) ET原發(fā)性血小板增多癥JAK2 V617F*PV真性紅細胞增多癥JAK2 V617F*CIMF慢性特發(fā)性骨髓纖維化JAK2 V6

3、17F*HES特發(fā)性高嗜酸性粒細胞白血病FIP1L1-PDGFR4q12缺失CMML慢性粒單核細胞白血病TEL/PDGFR:t(5;12)(q33;p13) *William V,Stefan N. A unique activating mutation in JAK2(V617F) is at the origin of polycythemia vera and allows a new classification of myeloproliferative diseases. Hematology . 2005,10-13:195-200CMLBCR/ABL約95%的CML5%的兒童

4、ALL15%-30%的成人ALLCMPD-慢性骨髓增殖性疾病BCR/ABLJAK2V617FPV(-)65%-97% (+)純合子多見少數(shù)JAK2V617F (-) 12Exon突變ET(-)50% (+)CIMF(-)50% (+)JAK2V617F (-) 5%MPL W515L/K (+)Molecular Pathology：the molecular basis of human disease by Willam B. Coleman,Gregory J. Tsongalis激活JAK2基因使細胞對生長因子敏感性增高 PV、ET、CIMF 不是獨立的診斷目的 MDS、3%CMMLJ

5、AK2V617F 纈氨酸 苯丙氨酸 FISH內(nèi)參缺失預后5q-5p15.25q31差7q-7p11.1-q11.17q31差20q-20q12好+88p11-q11MDS轉(zhuǎn)AML的幾率為50%-Yq11好MDS-骨髓增生異常綜合癥分子方面的實際有限，但發(fā)現(xiàn)有5q31,7q31，20q12的反復缺失，提示能夠這些區(qū)域存在腫瘤抑制基因。1.MLL/AFX2.MLL/AF43.MLL/AF64.MLL/AF95.MLL/ELL6.MLL/ENL7.CBFB/MYH118.BCR/ABL9.MLL/AF1P10.TEL/PDGFR11.MLL/AF1012.DEK/CAN13.MLL/AF1714.S

6、ET/CAN15.dupMLL16.PML/RARa17.E2A/PBX118.PLZF/RARa19.E2A/HLF20.NPM/ALK21.SIL/TAL122.NPM/MLF123.TEL/AML124.NPM/RARa25.AML1/ETO26.TEL/ABL27.AML1/MDS128.HOX1129.TLS/ERG30.EVI131.MLL/AF1Q白血病-31種交融基因篩查55% L型5% V型 體外對ATRA的敏感度低 40% S型 低分化M3其他交融基因M3: PML-RARAt(5;17)(q32;q21)t(11;17)(q13;q21)t(11;17)(q23;q21)

7、t(15;17)(q22;q21)PML-RARaPLZF-RARaNPM-RARaNuMA-RARa 95%A(p.E255K)和c.944CT(p.T315I)。WT1表達量檢測*約75%AML患者可檢測到WT1高程度表達，WT1是AML患者常用的MRD檢測標志交融基因定量檢測MRD監(jiān)測*Current Opinion in Oncology 2021, 22:656663WT1 (Wilms tumor gene) 1.WT1基因在各類型白血病中均能表達(ALL，AML，CML，MDS).2.表達程度與白血病的進程相關(guān)，可作為化療和骨髓移植后MRD檢測敏感目的。3.鑒別白血病與反響性白細

8、胞增高。初診 B-ALL; MLL-AF4 t(4;11)(q21;q23)WT1 (Wilms tumor gene) 弟供姐異基因 造血干細胞移植+14d白細胞植活+27d血小板植活嗜血細胞綜合征相關(guān)基因突變 PRF1、UNC13D、STXBP2、STX11、SH2D1A、XIAP LYST、AP3B1、RAB27A范可尼貧血基因突變FANCA 60% 、FANCC 15% 、FANCG 10% WASP綜合征純紅再障 RPS19先天性角化不良 DKC1、NHP2、TERC、TERT、NOP10、TINF2血液遺傳病分子檢測PRF1 10q21-10q22 細胞殺傷功能缺陷 嗜血細胞綜合征

9、 Perforin FANCA 16q24.3FANCC 9q22.3 范可尼貧血基因檢測Exon1Itron4 Exon5Exon6Exon14Q13XIVS4+4ATc.637_643delTACCGCCR185XR548XL554PRPS19 19q13.2 hot spot of missense mutations - codons 52 and 62常染色體1歲 女 Exon4發(fā)現(xiàn)點突變：c.184CT(p.R62W)，其他外顯子未發(fā)現(xiàn)突變純紅再障-RPS19基因檢測DKC1 Xq28X-連鎖隱性7歲 男 DKC1基因Exon11發(fā)現(xiàn)錯義突變：c.1058CT(p.A353V)先天性角化不良 PCR Secquence送檢標本要求標本要求EDTA抗凝、快速送達實驗室EDTA抗凝、DNA or cDNA靈敏度最高大于15-20%分辨率bpbp報告時間3-5天5-7天Molecular platform 謝謝！ 耐藥位點 伊馬替