化學(xué)藥物分析第3章藥物的雜質(zhì)檢查

1、化學(xué)藥物分析第3章藥物的雜質(zhì)檢查 第三章 藥物的雜質(zhì)檢查1、藥物的純度（purities of durgs ) 指藥物純凈程度，反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣，含有雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素。 第一節(jié) 藥物純度的概念與要求 2、雜質(zhì)（impurities） 指任何影響藥品純度的物質(zhì)有毒副作用的物質(zhì) 本身無毒副作用，但影響藥物的穩(wěn)定性和療效的物質(zhì)本身無毒副作用，也不影響藥物的穩(wěn)定性和療效，但影響藥物的科學(xué)管理的物質(zhì)青霉素過敏 青霉素本身不具有免疫原性，其制劑中所含高分子聚合物及其降解產(chǎn)物（如青霉烯酸、青霉噻唑酸等）作為半抗原進(jìn)入人體后，可與蛋白質(zhì)、多糖及多肽類結(jié)合而成為全抗原，引起過敏反應(yīng)3、藥物的純度

2、與化學(xué)試劑的純度藥物的純度: 考慮雜質(zhì)的生理作用，藥品只有兩個(gè)等級(jí)： 合格或不合格化學(xué)試劑的純度: 考慮雜質(zhì)的化學(xué)作用，不考慮雜質(zhì)的生理作用，有很多等級(jí)： 基準(zhǔn)試劑、優(yōu)級(jí)純（GR）、分析純（AR）、化學(xué)純（CP）、色譜純、光譜純第二節(jié) 雜質(zhì)的來源和種類1.雜質(zhì)的來源（1）生產(chǎn)過程中引入1）原料、反應(yīng)中間體及副產(chǎn)物 例如：藥用NaCl的Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、 Mg2+、Fe3+； ASA中的SA； 地西泮中的去甲安定；2）試劑、溶劑、催化劑類如： 華法林鈉：異丙醇的檢查5）生產(chǎn)中所用金屬器皿、裝置以及其他不耐酸、堿的金屬工具所帶來的雜質(zhì)4）藥物中無效、低效異構(gòu)體或晶型的檢查

3、例如：無味氯霉素存在A、B晶型，其中B為有效，A為低效。甲苯咪唑有A，B，C三種晶型；20%；40%60%；90%3）制劑中生成的雜質(zhì)如：鹽酸普魯卡因注射液中對(duì)氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇的檢查。（2) 貯藏過程中產(chǎn)生 雜質(zhì)來源于水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶形轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等 如：阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸； 麻醉乙醚氧化為醛和有毒的過氧化物； 利血平光氧化產(chǎn)物；易發(fā)生水解反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：酯、內(nèi)酯、酰胺、鹵代烴、苷類等易發(fā)生氧化反應(yīng)的結(jié)構(gòu)：醚、醛、酚羥基、巰基、亞硝基、雙鍵等（1）按來源分類 1） 一般雜質(zhì)：指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)。如氯化物、硫酸鹽

4、、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸、堿、水分、易炭化物、熾灼殘?jiān)取?一般雜質(zhì)檢查法收載在中國藥典的附錄中。 2、雜質(zhì)的分類 2）特殊雜質(zhì)：指某一個(gè)或某一類藥物的生產(chǎn)或貯藏過程中引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游離水楊酸、異煙肼中的游離肼、甾體激素中的其他甾體。特殊雜質(zhì)檢查法收載在中國藥典正文藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中。（2）按性質(zhì)分類 1）信號(hào)雜質(zhì)：一 般無害，但其含量的多少可以反映出藥物的純度水平，氯化物、硫酸鹽等就屬于信號(hào)雜質(zhì)。 2）有害雜質(zhì)：如重金屬、砷鹽、氰化物等，對(duì)人體有害，在藥品標(biāo)準(zhǔn)中必須嚴(yán)格控制。（3）按理化性質(zhì)分類 1）有機(jī)雜質(zhì) 2）無機(jī)雜質(zhì) 3）殘留溶劑第 三 節(jié) 雜質(zhì)限量1、雜質(zhì)限量雜質(zhì)限量：藥物

5、中所含雜質(zhì)的最大允許量，通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示雜質(zhì)量 雜質(zhì)限量 雜質(zhì)量藥品合格藥品不合格 2、雜質(zhì)限量的控制法（1）定量測(cè)定：測(cè)定雜質(zhì)的絕對(duì)含量，如測(cè)定吸收度、pH值等。 特點(diǎn)：準(zhǔn)確測(cè)定雜質(zhì)的量，不需對(duì)照品 （2)限量檢查法：特點(diǎn)：不需知道雜質(zhì)的準(zhǔn)確含量 1）對(duì)照法： 系指取一定量的被檢雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液和一定量供試品溶液，在相同條件下處理，比較反應(yīng)結(jié)果，以確定雜質(zhì)含量是否超過限量（注意平行原則 ) 2） 靈敏度法：系指在供試品溶液中加入試劑，在一定反應(yīng)條件下，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)。（不需對(duì)照品） 3）比較法：系指取供試品一定量依法檢查，測(cè)定特定待測(cè)雜質(zhì)的參數(shù)與規(guī)定的限量比較，不得更

6、大。（不需對(duì)照品） 3、雜質(zhì)限量的計(jì)算例1磷酸可待因中嗎啡的檢查：取本品0.10g，加鹽酸溶液(9 1000)使溶解成5ml，,加亞硝酸鈉試液2ml，放置5min，加氨試液3ml,所顯顏色與嗎啡溶液取無水嗎啡2.0mg，加鹽酸溶液(9 1000)使溶解成100ml5.0ml，用同一方法制成的對(duì)照液比較，不得更深，問限量為多少？ 已知： S = 0.1g=100mg; V = 5.0ml； C =2mg/100ml=0.02mg/ml； 求： L = ？ 解：注意 : 單位一致練習(xí)題：1、高錳酸鉀中氯化物的檢查：取本品2.0 g，加熱水60 ml溶解后，置水浴上加熱，在不斷攪拌下滴加乙醇適量（約

7、8 ml），移入100 ml量瓶中，加水置刻度，搖勻，過濾；分取濾液25 ml，依法檢查，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5. 0ml（每1 ml相當(dāng)于10g的Cl）制成的對(duì)照液比較，不得更濃。計(jì)算高錳酸鉀中氯化物的限量。2. 阿司匹林中重金屬的檢查：取本品1.0g，加乙醇23ml溶解后，加醋酸鹽緩沖液2ml，依法檢查，含重金屬不得過百萬分之十。問應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液多少ml（每1ml相當(dāng)于10g的Pb）？第四節(jié) 一般雜質(zhì)的檢查方法1、一般雜質(zhì)檢查規(guī)則 藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：(1) 遵循平行操作原則1）儀器的配對(duì)性 如納氏比色管應(yīng)配對(duì)，刻度線高低相差不超過2mm，砷鹽檢查時(shí)導(dǎo)氣管長度及孔的大小要一致2）對(duì)照品與供試

8、品的同步操作 （2） 正確的取樣及供試品的稱量范圍 1g不超過2%，1g不超過1% （3） 正確的比色、比濁方法 （4） 檢查結(jié)果不符合規(guī)定或在限度邊緣時(shí)應(yīng)對(duì)供試管和對(duì)照管各復(fù)查二份 2、氯化物檢查法（1）原理 對(duì)照法：利用氯化物在硝酸性溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀混濁液比較，以判斷供試品中氯化物是否超過限量。（2）檢查方法 藥典附錄 除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml（溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml,納氏比色管中，加水使成約40m1，搖勻，即

9、得供試溶液。另取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，搖勻，即得對(duì)照溶液。于供試溶液與對(duì)照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0m1，用水稀釋使成50m1，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較即得1）標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液 10gCl/ml2）檢查供試品中Cl-的范圍： 0.05mg0.08mg/50ml, 即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5ml8ml。 所顯渾濁梯度明顯酸度 稀硝酸10ml/50ml。4) 溫度 3040（3）測(cè)定條件 作用：加速AgCl渾濁的形成；避免弱酸銀鹽如碳酸銀、磷酸銀以及氧化銀沉淀的形成；產(chǎn)生較好的渾濁

10、； （4）干擾及排除 1) 若供試品有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 內(nèi)消色法：倍量法，如枸櫞酸鐵銨中氯化物的檢查。 外消色法：如高錳酸鉀中氯化物的檢查，可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。 供試品+ AgNO3放置10min澄清溶液+標(biāo)準(zhǔn)NaCl+水對(duì)照溶液供試品+ AgNO3+水供試品溶液暗處放置5min后比較2）供試品液混濁：可用含硝酸的蒸餾水洗凈濾紙中氯化物后過濾來消除混濁對(duì)氯化物檢查的干擾。3）當(dāng)有其它干擾物質(zhì)存在時(shí)，必需在檢查前除去 碘中氯化物和溴化物的檢查 碘化物中氯化物的檢查4）不溶于水的有機(jī)藥物 中的雜質(zhì)加水振搖，過濾，取濾液進(jìn)行檢查。 加熱使供試品溶解，放冷，過濾，取濾液進(jìn)

11、行檢查。溶于有機(jī)溶劑如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后進(jìn)行檢查。 （1）原理 對(duì)照法3、硫酸鹽檢查法 利用SO42-在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇試液作用，生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的硫酸鋇渾濁液比較，以判斷供試品中硫酸鹽是否超過限量。 （2）測(cè)定條件標(biāo)準(zhǔn)K2SO4溶液: 每1ml 相當(dāng)于0.1mg的SO42，檢查供試品中 SO42- 的范圍 ： 0.1mg0.5mg/50ml, 即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn) 硫酸鉀溶液15ml。 所顯渾濁梯度明顯酸 度： 稀鹽酸2ml/50ml。作用：防止碳酸鋇或磷酸鋇等沉淀的產(chǎn)生； 若供試品有色，也可用內(nèi)消色法即倍量法處理。 （3）干擾及

12、排除4、鐵鹽檢查法1) 原理 對(duì)照法（1）硫氰酸鹽法 ChP（2005）、USP（24）2)檢查方法 藥典附錄 除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量制成的對(duì)照溶液（取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成25ml，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35m1后，加30%硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻）比較，即得 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液：用FeNH4(SO

13、4)212H2O（硫酸鐵銨）配制標(biāo) 準(zhǔn)鐵貯備液（加入硫酸防止Fe3+的水 解），標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液臨用前稀釋而成，標(biāo) 準(zhǔn)鐵溶液10g Fe3+/ml檢查供試品中 Fe3+的范圍 ： 1050g /50ml，即相 當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液15ml 顯色梯度明顯酸 度： 稀鹽酸4ml/50ml。3) 測(cè)定條件檢查Fe2+和Fe3+ ：加過硫酸銨氧化Fe2+為Fe3+。 同時(shí)可 防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色。4）干擾及排除 為了提高靈敏度或供試管與對(duì)照管色調(diào)不一致時(shí)，可用正丁醇提取后，分取正丁醇層比色。 具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，需經(jīng)700800熾灼破壞處理后再依法檢查。 （2）巰基醋酸法 BP（1998）對(duì)照法 本

14、法靈敏度較高，但試劑較貴 在加巰基醋酸溶液前，先加枸櫞酸溶液，使其與鐵離形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉淀。中國藥典（2005年版）共收載四法。 5、重金屬檢查法 (以鉛為代表)重金屬: 指在實(shí)驗(yàn)室條件下與S2-作用顯色的金屬 雜質(zhì)，如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、 銻、鉍等.（1）第一法 硫代乙酰胺法1) 原理 對(duì)照法 適用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物 2) 測(cè)定條件標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛：用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液（加硝酸防止Pb2+水解），標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液臨用前稀釋而成，標(biāo)準(zhǔn)硝酸鉛溶液10g Pb2+/ml，檢查供試品中 Pb2+的范圍 ：含1020g /25ml。 酸度：用2ml pH3.5的醋酸鹽

15、緩沖液控制溶液pH值為33.5。 顯色劑：從ChP（1990）開始改用硫代乙酰胺做顯色劑 供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 A. 外消色法：在對(duì)照管中加稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液。B. 內(nèi)消色法C. 改用第四法，微孔濾膜過濾法3) 干擾及排除若供試品中有微量Fe3+存在，會(huì)氧化硫化氫生成單質(zhì)硫，干擾比色，加入抗壞血酸或鹽酸羥胺（0.51.0g）還原Fe3+為Fe2+，可消除干擾（2）第二法 熾灼殘?jiān)牧虼阴０贩?500600熾灼后的殘?jiān)?，?jīng)處理后，依一法檢查。 1） 原理 對(duì)照法 適用于含芳環(huán)、雜環(huán)以及不溶于水、稀酸、乙醇及堿的有機(jī)藥物。 2） 操作方法 含鈉及氟的有機(jī)藥物應(yīng)用鉑坩堝

16、、石英坩堝或硬質(zhì)玻璃蒸發(fā)皿（因可腐蝕瓷坩堝，帶入大量重金屬）（3）第三法 硫化鈉法 1）原理 對(duì)照法 適用于溶于堿而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物。如磺胺類、巴比妥類。 NaOH堿性條件下：（4）第四法 微孔濾膜法 依一法檢查，微孔濾膜過濾后比較色斑。 適用于含25g重金屬雜質(zhì)及有色供試液的檢查。6、砷鹽檢查法 （1）古蔡氏法 遇HgBr2試紙生成黃色棕色的砷斑，與2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在相同條件下生成的砷斑比較1） 原理 對(duì)照法 As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn2+ +AsH3 AsO33- + 3Zn + 9H+ 3Zn2+ + 3H2O + AsH3 AsO43- + 4Zn +

17、11H+ 4Zn2+ + 4H2O + AsH3 AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (黃色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (黑色)2）操作方法3） 測(cè)定條件及各個(gè)試劑的作用 標(biāo)準(zhǔn)砷溶液：臨用新配，1gAs/ml。 酸度：酸量應(yīng)足夠，加濃鹽酸5ml。 酸性KI-SnCl2的作用：A. 還原As5+為As3+，加快反應(yīng)速度； B. KI被氧化生成的I2又可被氯化亞錫還原為I-，I-與反應(yīng)中生成的Zn2+能形成穩(wěn)定的配位離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行； C. S

18、nCl2與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，使氫氣均勻而連續(xù)地發(fā)生； D. 可抑制微量Sb的干擾，在實(shí)驗(yàn)條件下，100 gSb存在也不干擾測(cè)定。 Pb(AC)2棉的作用: 消除供試品可能含有的少量的硫 化物。醋酸鉛棉花60mg裝管高度6080mm。 S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑） H2S + Pb(AC)2 PbS + 2HAC 4)干擾及排除 供試品為S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S,SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。 供試品為Fe3+鹽能消耗KI，應(yīng)先加SnCl2 ，將Fe

19、3+還原為Fe2+具環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，要先行有機(jī)破壞后再進(jìn)行檢查。 堿破壞法：石灰法、無水碳酸鈉堿融法 酸破壞法：如葡萄糖中砷鹽的檢查 白田道夫法: 含Sb藥物中砷鹽的檢查 如葡萄糖酸銻鈉本法適用于不含Sb或含Sb量小于100g的供試品。 銻鹽被還原為SbH3與HgBr2試紙作用，產(chǎn)生灰色銻斑，干擾砷斑的檢查，可改用白田道夫法 ChP（2005） Betterdorff法。（2）Ag-DDC(二乙基二硫代氨基甲酸銀）法 檢查、含量測(cè)定 ChP(2005)、USP（24） 1） 原理 對(duì)照法 砷化氫與Ag-DDC溶液作用，還原AgDDC為紅色膠態(tài)銀，直接比色或于510nm波長處測(cè)定吸收度，進(jìn)行

20、比較。 用有機(jī)堿吸收反應(yīng)產(chǎn)生的HDDC有利于反應(yīng)的進(jìn)行。USP（24）用吡啶，ChP（2005）用三乙胺。2） 原理 對(duì)照法本法適用于含Sb量小于500g的供試品。在藥物生產(chǎn)過程中引入雜質(zhì)的途徑為（ ) A. 原料不純或部分未反應(yīng)完全的原料造成 B. 合成過程中產(chǎn)生的中間體或副產(chǎn)物分離不凈造成 C. 需加入的各種試劑產(chǎn)生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金屬器皿及裝置等引入雜質(zhì) E. 由于操作不妥，日光曝曬而使產(chǎn)品發(fā)生分解引入的雜質(zhì) ABCD 練 習(xí) 題藥物中氯化物雜質(zhì)檢查，是使該雜質(zhì)在酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化物渾濁，所用的稀酸是（ ）A. 硫酸 B. 硝酸 C. 鹽酸 D. 醋酸

21、E. 磷酸 B藥物中硫酸鹽檢查時(shí)，所用的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液是（ ）A. 標(biāo)準(zhǔn)氯化鋇B. 標(biāo)準(zhǔn)醋酸鉛溶液C. 標(biāo)準(zhǔn)硝酸銀溶液D. 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液 E. 以上都不對(duì) D中國藥典 （2005年版） 規(guī)定，檢查氯化物雜質(zhì)時(shí)，一般取用標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（ ）A. 使檢查反應(yīng)完全B. 藥物中含氯化物的量均在此范圍C. 加速反應(yīng)D. 所產(chǎn)生的濁度梯度明顯E. 避免干擾 D采用硝酸銀試液檢查氯化物時(shí)，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ ）A加速生成氯化銀渾濁反應(yīng)B消除某些弱酸鹽的干擾C消除碳酸鹽干擾D消除磷酸鹽干擾E避免氧化銀沉淀生成ABCDE若要進(jìn)行高錳酸鉀中氯化物的檢查，最佳方法是（ ）A. 加入一定量氯仿提取后測(cè)定B. 氧瓶燃燒C. 倍量法D. 加入一定量乙醇E. 以上都不對(duì)D中國藥典收載的鐵鹽檢查，主要是檢查（ ）A. FeB. Fe2+C. Fe3+D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不對(duì) D重金屬檢查中，加入硫代乙酰胺時(shí)溶液控制最佳的pH值是（ ）A. 1.5