上海市臨床科研基本實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)——哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基

1、上海市臨床科研基本實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：基礎(chǔ)交流Meeting date: 2009/12/18Speechmaker: Youzhi Huang（ph D.）E-mail: service上海銳賽生物技術(shù)有限公司 Shanghai R&S Biotechnology Co., Ltd.High technology and service Eyeing for Integrated Solution R&S, your reliable cooperator!目錄細(xì)胞培養(yǎng)基本概念細(xì)胞培養(yǎng)基本要求細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)銳賽細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)High technology and service

2、, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 一、細(xì)胞培養(yǎng)基本概念細(xì)胞培養(yǎng)定義細(xì)胞培養(yǎng)簡(jiǎn)史生長(zhǎng)類型細(xì)胞形態(tài)傳代次數(shù)High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞培養(yǎng)定義定義： 模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，將細(xì)胞從機(jī)體中取出，在人工條件下使其生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。優(yōu)點(diǎn)：1活細(xì)胞：同時(shí)、大量、均一性、重復(fù)性；2可控制：各種物理、化學(xué)

3、、生物等因素可調(diào)控；3研究方法多樣：倒置、熒光、電子、激光共焦顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記；4應(yīng)用廣：不同物種、不同年齡、不同組織、正常或異常（腫瘤）；缺點(diǎn)：人工所模擬的條件與體內(nèi)實(shí)際情況仍不完全相同；當(dāng)細(xì)胞被置于體外培養(yǎng)后，生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的環(huán)境中，時(shí)間久了，必然發(fā)生變化。 High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞培養(yǎng)簡(jiǎn)史High technology and service, Eyeing for Integrate

4、d Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞類型按生長(zhǎng)方式:貼壁型細(xì)胞（Monolayer cells）懸浮型細(xì)胞（Suspension cells）絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬貼壁型細(xì)胞，只有少數(shù)細(xì)胞類型如某些腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞可在懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)。按細(xì)胞形態(tài)(貼壁細(xì)胞）：成纖維型細(xì)胞（Fibroblast-liked cells）上皮型細(xì)胞（Epithelium-liked cells）其它，不定型High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable

5、cooperator! 成纖維型細(xì)胞梭形或不規(guī)則三角形中央有卵圓形核胞質(zhì)向外伸出長(zhǎng)短不同的突起中胚層間質(zhì)起源 上皮型細(xì)胞扁平不規(guī)則多角形細(xì)胞中央有圓形核緊密相連單層膜樣生長(zhǎng)內(nèi)、外胚層細(xì)胞如皮膚、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型細(xì)胞散在生長(zhǎng)，一般不連成片細(xì)胞質(zhì)經(jīng)常伸出偽足或突起活躍的游走或變形運(yùn)動(dòng)羊水細(xì)胞培養(yǎng)的早期多形細(xì)胞型 難以確定規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài) 如神經(jīng)組織的細(xì)胞等 細(xì)胞形態(tài)High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 接觸抑制（Contact inhib

6、ition）細(xì)胞相互接觸時(shí)，將停止增長(zhǎng)；細(xì)胞停留在細(xì)胞周期的G0期；轉(zhuǎn)化的細(xì)胞卻可以繼續(xù)生長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)胞重疊堆積生長(zhǎng)。High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 體外培養(yǎng)的細(xì)胞增殖能力不是無(wú)限的，傳代次數(shù)有一定的界限，稱為“ Hayflick極限”。傳代次數(shù)與物種壽命有關(guān)：小鼠壽命3年，傳代12次；龜壽命200年，傳代140次。傳代次數(shù)與個(gè)體年齡成反比：人胚胎，40-60代； 幼年，20-40代；成年，10-30代；早老病兒童，2-10代。 細(xì)胞傳代次數(shù)（Pa

7、ssage Number）High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 原代培養(yǎng)（primaryculture）從動(dòng)物機(jī)體取出的進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞群。生長(zhǎng)緩慢，繁殖一定的代數(shù)后（一般10代以內(nèi)）停止生長(zhǎng)。 克?。╟lone）亦稱無(wú)性繁殖系或無(wú)性系。對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，克隆是指由同一個(gè)祖先細(xì)

8、胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群。 細(xì)胞系（cellline）從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，在培養(yǎng)條件下可無(wú)限繁殖 細(xì)胞株（cellstrain）從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群，能夠繁殖50代左右，在培養(yǎng)過(guò)程中其特征始終保持。 原代培養(yǎng)與細(xì)胞系 The American Type Culture Collection (ATCC) The European Collection of Animal Cell Culture (ECACC) National Institute of Health (NIH), USA National

9、 Cancer Institute (NCI), USA細(xì)胞系資源High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 二、細(xì)胞培養(yǎng)基本要求常用儀器設(shè)備培養(yǎng)器皿培養(yǎng)基血清其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 常用儀器設(shè)備超凈臺(tái)或生物安全柜：細(xì)胞操作CO2 培養(yǎng)箱：細(xì)胞培養(yǎng)液氮罐：細(xì)胞長(zhǎng)期凍存37 水?。号囵B(yǎng)

10、溶液預(yù)熱，細(xì)胞復(fù)蘇倒置顯微鏡：觀察細(xì)胞離心機(jī)：收集細(xì)胞，細(xì)胞常用300g轉(zhuǎn)速5min冰箱：細(xì)胞培養(yǎng)溶液分裝儲(chǔ)存負(fù)壓吸引器：細(xì)胞培養(yǎng)廢液吸取High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 超凈臺(tái)或生物安全柜垂直風(fēng)超凈臺(tái)水平風(fēng)超凈臺(tái)生物安全柜High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! Culture flaskCulture

11、Plate 培養(yǎng)器皿High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基需使用者自己配制并滅菌，其優(yōu)點(diǎn)是價(jià)格便宜。缺點(diǎn)是配制過(guò)程繁瑣，質(zhì)量不易控制液體培養(yǎng)基是由專業(yè)廠家按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)?；a(chǎn)，不僅質(zhì)量得到保證，而且使用十分方便常用的培養(yǎng)基種類RPMI-1640（標(biāo)準(zhǔn)型）、DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型）、DMEM-低糖（標(biāo)準(zhǔn)型）、McCoys 5A、M199、F12等High technology and service, Eyeing

12、 for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 培養(yǎng)基的選擇沒(méi)有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供參考： 建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首選的培養(yǎng)基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I(xiàn)，或在購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞株時(shí)咨詢。 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞，觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，可以用生長(zhǎng)曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。 High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, y

13、our reliable cooperator! 血清使用注意事項(xiàng)血清必須貯存于20 -70，若存放于4，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶，可將4045 ml 分裝于無(wú)菌50 ml 離心管中，由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10 %， 必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。 血清解凍步驟(逐步解凍法): -20或70至4冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由20直接至37解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活（heat-inactivation）是指56, 30 分鐘加熱

14、已完全解凍之血清。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份(complement) 去活化。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。勿將血清置于37太久，若在37放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin

15、) 造成，這些凝絮沉淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沉淀物，可用離心3000 rpm, 5 min 去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沉淀物，因?yàn)闀?huì)阻塞過(guò)濾膜。 顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”：通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染，而將血清放在37中欲培養(yǎng)此“微生物“，但在37環(huán)境下，又會(huì)使此沉淀物增多，更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細(xì)菌之培養(yǎng)基檢測(cè)，又沒(méi)有污染。一般而言，此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng)，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號(hào)的血清。 血清沉淀物 Hi

16、gh technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 谷氨酰胺谷氨酰胺在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4下放置7天即可分解約50%，所以都是在使用前添加配制好的培養(yǎng)液（含谷氨酰胺）在4放置2周以上時(shí)，要重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺，故需單獨(dú)配制谷氨酰胺，以便臨時(shí)加入培養(yǎng)液內(nèi)使用終濃度為1-4mM一般配制為100倍濃縮液，即濃度為200mM（29.22g/L）配制方法為 ：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配

17、成200mM的溶液，充分?jǐn)嚢枞芙夂螅☉?yīng)加溫30），過(guò)濾除菌，分裝小瓶，-20保存，使用時(shí)可向100ml培養(yǎng)液中加入0.5-2ml谷氨酰胺濃縮液，終濃度為1-4mM High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 酚紅大多數(shù)培養(yǎng)液中使用酚紅作為pH 指示紅色表示中性pH黃色代表酸性pH紫色表示堿性pH在一些特殊培養(yǎng)液中不含酚紅因?yàn)橐延幸恍┭芯勘砻鳎悍蛹t能模擬類固醇激素（尤其是雌激素）樣作用High technology and service, Eyeing f

18、or Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞消化液分離組織和分散細(xì)胞常用的有胰蛋白酶和乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)兩種溶液，單獨(dú)或混合使用胰蛋白酶溶液主要作用：使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解，使細(xì)胞相互離散消化細(xì)胞時(shí)，加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液，能終止消化作用EDTA4Na 溶液一種化學(xué)螯合劑，對(duì)細(xì)胞有一定的離散作用，而且毒性小，價(jià)格低廉，使用方便常用工作液濃度為0.02%。注意：使用EDTA 處理細(xì)胞后，要用平衡鹽液沖洗干凈，因殘留的EDTA 會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)High technology and service, Eyeing f

19、or Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 三、細(xì)胞培養(yǎng)基本技術(shù)細(xì)胞原代培養(yǎng) 細(xì)胞換液與傳代細(xì)胞凍存與復(fù)蘇細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力細(xì)胞污染與控制High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 鼠胎組織細(xì)胞原代培養(yǎng)取材：用頸椎脫位法使孕鼠迅速死亡。把整個(gè)孕鼠浸入盛有75乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺(tái)。用消過(guò)毒的剪刀在軀干中部環(huán)行剪開(kāi)皮膚，剖腹取出子宮置于無(wú)菌平皿中。用消過(guò)毒的剪刀剪開(kāi)子

20、宮，取出鼠胎，剪去頭、爪，以平衡鹽溶液洗去血污切割：用平衡鹽溶液將取出的組織塊清洗三次，然后用眼科手術(shù)剪刀仔細(xì)將組織反復(fù)剪碎，直到成1mm3左右的小塊，再用平衡鹽溶液清洗，洗到組織塊發(fā)白為止。靜置數(shù)分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清消化、接種培養(yǎng)：加入0.25胰蛋白酶消化液（5-10倍量），與組織塊混勻。置37水浴，觀察消化情況（每隔幾分鐘搖動(dòng)一下試管），靜止，吸去上清，加入510ml細(xì)胞培養(yǎng)液，用吸管吹打混勻，移入二個(gè)培養(yǎng)瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, you

21、r reliable cooperator! 換液：全量換液和半量換液換液時(shí)機(jī)的選擇：培養(yǎng)液pH值：細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，代謝產(chǎn)生酸性物質(zhì)積累增多， pH值下降，營(yíng)養(yǎng)液酸化變黃，。細(xì)胞狀態(tài)細(xì)胞換液High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞傳代原代細(xì)胞傳代以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株細(xì)胞系傳代以得到大量的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)接觸抑制營(yíng)養(yǎng)枯竭將培養(yǎng)的細(xì)胞從培養(yǎng)器皿中消化下來(lái)，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的器皿中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)細(xì)胞“一代”指從細(xì)胞接

22、種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細(xì)胞世代或倍增不同，在一代中，細(xì)胞培增36次High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞凍存冷凍保存要點(diǎn)冷凍過(guò)程要緩慢：4 3060 分鐘-20 30 分鐘 -80 1618 小時(shí)（或過(guò)夜）液氮長(zhǎng)期保存或使用程序降溫盒，每秒下降1 凍存細(xì)胞必須處在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，活力大于90，無(wú)微生物污染。細(xì)胞濃度控制在：5x1062x107/ml。常用細(xì)胞冷凍保存液5%或10DMSO完全培養(yǎng)液10甘油完全培養(yǎng)液High technology

23、and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞復(fù)蘇快速解凍凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1 分鐘內(nèi)全部融化（不要超過(guò)3 分鐘）解凍后的細(xì)胞可直接接種到含完全生長(zhǎng)培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24 小時(shí)后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過(guò)離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含完全生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中High technology and service, Eyeing for Integrat

24、ed Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞計(jì)數(shù)及活力High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞污染細(xì)菌污染真菌污染細(xì)菌和真菌的清除支原體污染支原體的清除High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)菌污染 細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)的污染最常見(jiàn)的有革蘭氏陽(yáng)性菌，如枯草桿菌以及大

25、腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見(jiàn)。 培養(yǎng)細(xì)胞受細(xì)菌污染后，會(huì)出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細(xì)胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，最后變圓脫落死亡。 High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 真菌污染真菌污染后，細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，但最后由于營(yíng)養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。 High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliabl

26、e cooperator! 細(xì)菌和真菌的清除 使用抗生素抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好，一般用雙抗生素。 污染后清除用藥需采用大于常用量510倍藥物沖洗法，于加藥后作用2448小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期有效。High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 95以上是以下四種支原體：口腔支原體（M.orale）精氨酸支原體（M.arginini）豬鼻支原體（M.hyorhinis）牛萊氏無(wú)膽甾原體（A.l

27、aidlawii）危害：世界性問(wèn)題，平均發(fā)生率達(dá)到11%能改變細(xì)胞的DNA,RNA及蛋白表達(dá)不能通過(guò)可視法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)率影響較小，不易引起注意污染來(lái)源：操作環(huán)境不良操作人員的疏失實(shí)驗(yàn)器具不潔等已受污染的細(xì)胞已受污染的培養(yǎng)基、血清支原體污染High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 熒光染色法電鏡檢查：掃描電鏡、透射電鏡支原體培養(yǎng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法支原體污染檢測(cè)High technology and service, Eyeing for

28、Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液常常仍清亮但變黃,細(xì)胞生長(zhǎng)變緩，部分細(xì)胞發(fā)生脫落等等，細(xì)胞間隙可見(jiàn)鋪滿細(xì)沙樣小點(diǎn)。支原體污染表現(xiàn)熒光染料Hoechst33258染色法檢測(cè)支原體High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 支原體的清除 支原體清除劑MRA （MycoplasmaRemovalAgent）處理法每4天換一次液，連續(xù)處理15天清洗純化法細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選細(xì)

29、胞清洗反復(fù)離心洗滌 原理：由于支原體個(gè)體小且除發(fā)酵支原體外多為細(xì)胞外寄生，所以通過(guò)反復(fù)洗滌細(xì)胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至極限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用，可達(dá)到更好的效果。 藥物輔助高溫處理法先用藥物處理后，再將污染的組織培養(yǎng)物放在41培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。支原體特異性血清法 用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。 High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reli

30、able cooperator! 四、銳賽細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)上海銳賽生物公司簡(jiǎn)介銳賽細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 上海銳賽生物簡(jiǎn)介上海銳賽專注于向國(guó)內(nèi)生命科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)臨床科研應(yīng)用及生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè)研發(fā)提供最新技術(shù)咨詢、全方位現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)。銳賽公司前身是一個(gè)生命科學(xué)研究交流團(tuán)隊(duì)，團(tuán)隊(duì)組建于2003年，是非盈利的學(xué)術(shù)交流平臺(tái)，技術(shù)團(tuán)隊(duì)建有基因操作、基因組分析、細(xì)胞、病毒包裝、RNAi等多個(gè)成熟的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，團(tuán)隊(duì)人員操作經(jīng)驗(yàn)豐富，碩士

31、學(xué)歷以上占85%。公司愿景：立足于深厚的分子、細(xì)胞生物學(xué)背景和扎實(shí)的科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)基礎(chǔ)，立命于終身為祖國(guó)的科研工作者提供一流的研究產(chǎn)品和全方位實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，并孜孜不倦地打造出我們自己研發(fā)生產(chǎn)的、比國(guó)際一流品牌產(chǎn)品還過(guò)硬的科研產(chǎn)品民族品牌！ High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 銳賽細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染瞬時(shí)轉(zhuǎn)染穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的構(gòu)建流式細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡細(xì)胞表面抗原（CD系列）腫瘤細(xì)胞生物學(xué)檢測(cè)細(xì)胞活力測(cè)定腫瘤細(xì)胞基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

32、病毒包裝腺病毒包裝慢病毒包裝逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝RNA干擾siRNA干擾評(píng)價(jià)慢病毒RNAi干擾腺病毒RNAi干擾High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 細(xì)胞轉(zhuǎn)染瞬時(shí)轉(zhuǎn)染特點(diǎn)：技術(shù)平臺(tái)：陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陽(yáng)離子聚合物（FuGene）、電穿孔儀等根據(jù)客戶的靶細(xì)胞系選擇最高效的轉(zhuǎn)染方法并進(jìn)行轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化應(yīng)用：觀察目的基因表達(dá)蛋白在細(xì)胞中的功能（短期效應(yīng)）穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株構(gòu)建特點(diǎn)：技術(shù)平臺(tái)：陽(yáng)離子脂質(zhì)體、陽(yáng)離子聚合物（ FuGene）、電穿孔儀、腺病毒、慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病

33、毒等根據(jù)客戶選擇的靶細(xì)胞系選擇最高效的轉(zhuǎn)染方法并進(jìn)行轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化可選用高效的病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)方法建立穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株應(yīng)用抗生素篩選出穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株應(yīng)用：觀察目的基因表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（穩(wěn)定，可長(zhǎng)期研究）High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 流式細(xì)胞檢測(cè)特點(diǎn)：技術(shù)平臺(tái)：FACSCalibur7500 單細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析特定細(xì)胞群體的分選精度和靈敏度高，重復(fù)性好應(yīng)用：細(xì)胞周期細(xì)胞凋亡細(xì)胞表面抗原：CD 系列High technology and service, Eyeing for Integrated Solution, R&S, your reliable cooperator! 腫瘤細(xì)胞