食品中有害成分的檢測(cè)課件

1、食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）模塊八 食品中有害成分的檢測(cè)知識(shí)目標(biāo)1.了解食品中常見農(nóng)藥、獸藥和動(dòng)、植物類食品中常見毒素的種類及危害。2.理解農(nóng)藥、獸藥及殘留概念、種類及分析檢測(cè)方法，抗生素類藥物殘留及激素類藥物殘留的快速測(cè)定。3.掌握食品中常見農(nóng)藥、獸藥和動(dòng)、植物類食品中常見毒素的測(cè)定原理、操作方法及要點(diǎn)等。技能目標(biāo)能運(yùn)用現(xiàn)代分析儀器如氣相色譜儀、高效液相色譜儀等。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目一農(nóng)藥殘留的檢測(cè)張奶奶去菜市場(chǎng)買菜，看到空心菜鮮亮無蟲，便買回?zé)顺?，隨后就出現(xiàn)腹痛、腹瀉、惡心嘔吐、視物不清等癥狀，經(jīng)醫(yī)院確診為空心菜殘留的農(nóng)藥中毒。案例引入有機(jī)氯農(nóng)藥的檢測(cè)有機(jī)氯農(nóng)

2、藥包括六六六、滴滴涕DDT）等，是一類應(yīng)用最早的高效廣譜殺蟲劑。有機(jī)氯農(nóng)藥化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在自然界不易分解，通過食物鏈最終進(jìn)入人體，并在人體內(nèi)蓄積，影響食品安全，危害人類健康。因此，我國(guó)的食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中明確限定有機(jī)氯農(nóng)藥在食品中的最大限量。如表8-1食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）表8-1 有機(jī)氯農(nóng)藥在食品中的殘留最大限量標(biāo)準(zhǔn)(GB 27632005) 樣品中六六六、滴滴涕經(jīng)提取和凈化后用氣相色譜法測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量分析。電子捕獲檢測(cè)器對(duì)于負(fù)電極強(qiáng)的化合物具有極高的靈敏度，利用這一特點(diǎn)，分別測(cè)出痕量的六六六、滴滴涕。不同異構(gòu)體和代謝物可同時(shí)分別測(cè)定。 出峰順序：-HCH、-HCH、-HCH

3、、-HCH、P,P-DDE 、O,P-DDT、P,P-DDD 、P,P-DDT。有機(jī)氯農(nóng)藥的測(cè)定- GCECD法 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）2.試劑 丙酮、正己烷、石油醚（沸程3060）、苯、硫酸、無水硫酸鈉、硫酸鈉溶液（20g/L） 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：六六六（-HCH、-HCH、-HCH和-HCH）純度99；滴滴涕（P,P-DDE 、O,P-DDT、P,P-DDD 、P,P-DDT）純度99。 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取-HCH、-HCH、-HCH、-HCH、P,P-DDE O,P-DDT、P,P-DDD 、P,P-DDT各10mg，溶于苯中，分別移于100mL容量瓶中，以苯稀釋

4、至刻度，混勻，濃度為100mg/L,儲(chǔ)存于冰箱中。 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別量取上述個(gè)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于同一容量瓶中，以正己烷稀釋至刻度。-HCH、-HCH和-HCH的濃度為0.005 mg/L，-HCH和P,P-DDE的濃度為0.01 mg/L，O,P-DDT的濃度為0.01 mg/L，P,P-DDD的濃度為0.02 mg/L，P,P-DDT的濃度為0.01mg/L。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）3.儀器（1）氣相色譜儀（具電子捕獲檢測(cè)器和微處理機(jī)）（2）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（3）勻漿機(jī)（4）調(diào)速多用振蕩器（5）離心機(jī)（6）粉碎機(jī)4.操作步驟 樣品處理 谷物制成粉末，其制品制成勻漿；蔬菜水果及其制品制

5、成勻漿；蛋品去殼制成勻漿；肉制品去皮、筋后，切成小塊，制成肉糜；鮮乳混勻待用；食用油混勻待用。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 提取 稱取具有代表性的各類食品試樣勻漿20g，加水5mL（視其水分含量加水，使總水量約20mL），加丙酮405mL，震蕩30min，加氯化鈉6g，搖勻。加石油醚30mL，再震蕩30min，靜置分層。取上清液35mL經(jīng)無水硫酸鈉脫水，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至近干，以石油醚定容至5 mL，加0.5 mL濃硫酸凈化，震蕩0.5min，于3000r/min離心15min。取上清液進(jìn)行GC分析。 稱取具有代表性的試樣粉末2g，加石油醚20mL，震蕩30min，過濾，濃縮，定容至

6、5 mL，加0.5 mL濃硫酸凈化，震蕩0.5min，于3000r/min離心15min。取上清液進(jìn)行GC分析。 稱取具有代表性食用油試樣0.5g，以石油醚溶解于10mL試管中，取上清液進(jìn)行GC分析。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 氣相色譜條件 色譜柱：內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)2m的玻璃柱，內(nèi)裝1.5OV-17和2QF-1混合固定液的80100目硅藻土。 載氣：高純氮，流速110mL/min。 溫度：柱溫185，檢測(cè)溫度225，進(jìn)樣溫度195。 進(jìn)樣量：進(jìn)樣量為110L。 測(cè)定：以外標(biāo)法定量分析。5.結(jié)果計(jì)算樣品中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)物或代謝物的單一含量用下式進(jìn)行計(jì)算：2022/7/20食品分析

7、與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中：X試樣中六六六、滴滴涕及其異構(gòu)物或代謝物的單一含量，mg/kg；A1被測(cè)定試樣組分的峰值（峰高或面積）；A2各農(nóng)藥組分標(biāo)準(zhǔn)的峰值（峰高或面積）；m1單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液的含量，ng；m2被測(cè)定試樣的取樣量，g；V1被測(cè)定試樣的稀釋體積，mL；V2被測(cè)定試樣的進(jìn)樣體積，L；有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè) 有機(jī)磷農(nóng)藥是指有機(jī)磷酸酯類化合物，廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)、公共衛(wèi)生事業(yè)，在農(nóng)藥中是極為重要的一類化合物。根據(jù)其毒性大小，可將有機(jī)磷農(nóng)藥分為高毒、中毒和低毒三類，其中高毒農(nóng)藥不準(zhǔn)用于蔬菜、果樹、茶葉、中藥材，不準(zhǔn)用于防治衛(wèi)生蟲害及人、畜皮膚病。

8、有機(jī)磷農(nóng)藥大多呈油狀或結(jié)晶狀，工業(yè)品呈淡黃色至棕色，除敵百蟲和敵敵畏之外，大多是有蒜臭味。一般不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑如苯、丙酮、乙醚、三氮甲烷及油類，對(duì)光、熱、氧均較穩(wěn)定，遇堿易分解破壞。 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)定常采用氣相色譜法、薄層色譜酶抑制法等。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品中殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥經(jīng)有機(jī)溶劑提取并經(jīng)凈化、濃縮后，注入氣相色譜儀，氣化后在載氣攜帶下于色譜柱中分離，由火焰光度檢測(cè)器檢測(cè)當(dāng)含有機(jī)磷的試樣在檢測(cè)器中的富氫焰上燃燒時(shí)，以HPO碎片的形式，放射出波長(zhǎng)為526nm的特性光，這種光經(jīng)檢測(cè)器的單色器（濾光片）將非特征光譜濾除后，由光電倍增管接收，產(chǎn)生電信號(hào)而被檢出。試樣

9、的峰面積或峰高與標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積或峰高進(jìn)行比較定量。有機(jī)磷農(nóng)藥的測(cè)定- 氣相色譜法 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）2.試劑二氯甲烷、丙酮、無水硫酸鈉（在700灼燒4h后備用）、中性氧化鋁（在550灼燒4h）、硫酸鈉溶液 有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別準(zhǔn)確稱取有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品敵敵畏、樂果馬拉硫磷、對(duì)硫磷、甲拌磷、稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲螨磷各10.0mg用苯（或三氯甲烷）溶解并稀釋至100mL，放在冰箱中保存。 有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)用二氯甲烷稀釋為使用液，使其濃度為敵敵畏、樂果、馬拉硫磷、對(duì)硫磷、甲拌磷每毫升各相當(dāng)于1.0g，稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲螨磷每毫升各相當(dāng)于2

10、.0g。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）3.儀器氣相色譜儀（附火焰光度檢測(cè)器）、電動(dòng)振蕩器、組織搗碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀4.操作步驟 樣品處理 蔬菜：取適量蔬菜擦凈,去掉不可食部分后稱取蔬菜試樣，將蔬菜切碎混勻。稱取10.0g混勻的試樣，置于250mL具塞錐形瓶中，加30g100g無水硫酸鈉脫水，劇烈振搖后如有固體硫酸鈉存在，說明所加無水硫酸鈉已夠。加0.2g0.8g活性炭脫色。加70mL二氯甲烷，在振蕩器上振搖0.5h，經(jīng)濾紙過濾。量取35mL濾液，在通風(fēng)柜中室溫下自然揮發(fā)至近干，用二氯甲烷少量多次研洗殘?jiān)?，移?0mL具塞刻度試管中，并定容至2mL，備用。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）

11、 谷物：將樣品磨粉（稻谷先脫殼），過20目篩，混勻。稱取10g置于具塞錐形瓶中，加入0.5g中性氧化鋁（小麥、玉米再加0.2g活性炭）及20mL二氯甲烷，振搖0.5h，過濾，濾液直接進(jìn)樣。若農(nóng)藥殘留過低，則加30mL二氯甲烷，振搖過濾，量取15mL濾液濃縮，并定容至2mL進(jìn)樣。 植物油：稱取5.0g混勻的試樣，用50mL丙酮分次溶解并洗入分液漏斗中，搖勻后，加10mL水，輕輕旋轉(zhuǎn)振搖1min，靜置1h以上，棄去下面析出的油層，上層溶液自分液漏斗上口傾入另一分液漏斗中，當(dāng)心盡量不使剩余的油滴倒入（如乳化嚴(yán)重，分層不清，則放入50mL離心管中，于2500r/min轉(zhuǎn)速下離心0.5h，用滴管吸出上層

12、清夜）。加30mL二氯甲烷，100mL50g/L硫酸鈉溶液，振搖1min。靜置分層后，將二氯甲烷提取液移至蒸發(fā)皿中。丙酮水溶液再用10mL二氯甲烷提取一次，分層后，合并至蒸發(fā)皿中。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）自然揮發(fā)后，如無水，可用二氯甲烷少量多次研洗蒸發(fā)皿中殘液移入具塞量筒中，并定容至5mL。加2g無水硫酸鈉振搖脫水，再加1g中性氧化鋁、0.2g活性炭（毛油可加0.5g）振蕩脫油和脫色，過濾，濾液直接進(jìn)樣。如自然揮發(fā)后尚有少量水,則需反復(fù)抽提后再如上操作。 色譜條件 色譜柱：玻璃柱，內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)1.5m2.0m。 分離測(cè)定敵敵畏、樂果、馬拉硫磷和對(duì)硫磷的色譜住內(nèi)裝涂以2.5SE30

13、和3QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；內(nèi)裝涂以1.5OV17和2QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；內(nèi)裝涂以2OV101和2QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS。2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 分離測(cè)定甲拌磷、稻瘟凈、倍硫磷、殺螟硫磷及蟲螨磷的色譜住內(nèi)裝涂以3PEGA和5QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DMCS；內(nèi)裝涂以2NPGA和3QF1混合固定液的60目80目Chromosorb W AW DM

14、CS； 氣流速度：載氣為氮?dú)?0mL/min；空氣50mL/min；氫氣180mL/min（氮?dú)?、空氣和氫氣之比按各儀器型號(hào)不同選擇各自的最佳比例條件）。 溫度：進(jìn)樣口：220；檢測(cè)器：240；柱溫：180，但測(cè)定敵敵畏為130。 測(cè)定 將有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)使用液2L5L分別注入氣相色譜儀中，可測(cè)得不同濃度有機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰高，分別繪制有機(jī)磷農(nóng)藥質(zhì)量-峰高標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)取試樣溶液2L5L注入氣相色譜儀中，測(cè)得峰高，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)的含量。 5. 結(jié)果計(jì)算按下式計(jì)算： 式中：X試樣中有機(jī)磷農(nóng)藥的含量，單位為mg/Kg；A進(jìn)樣體積中有機(jī)磷農(nóng)藥的質(zhì)量，由標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得，單位為ng；計(jì)m與進(jìn)樣體積（

15、L）相當(dāng)?shù)脑嚇淤|(zhì)量，單位為g。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目二黃曲霉毒素的檢測(cè) 黃曲霉毒素是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物，具有極強(qiáng)的毒性和致癌性，是已確定的肝癌致癌物。 由于黃曲霉毒素的劇毒性、強(qiáng)致癌性及廣泛存在性，世界各國(guó)都制定了最高允許限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)的黃曲霉毒素允許量標(biāo)準(zhǔn)如表8-2所示： 樣品中AFT B1經(jīng)有機(jī)溶劑提取、凈化、濃縮并經(jīng)薄層色譜分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下產(chǎn)生熒光，根據(jù)其在薄層板上顯示熒光的強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)品AFT B1最低檢出量產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度比較來測(cè)定樣品中AFT B1的含量。

16、2試劑三氯甲烷、正己烷（沸程30-60）或石油醚（沸程60-90）、甲醇苯、乙腈、無水乙醚、丙酮 以上試劑應(yīng)重蒸，并應(yīng)經(jīng)檢驗(yàn)對(duì)薄層色譜測(cè)定無干擾。薄層層析法黃曲霉毒素B1的測(cè)定 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）苯-乙腈(98:2)混合溶液、甲醇-水（55:45）混合溶液、三氟乙酸、氯化鈉無水硫酸鈉（AR）、硅膠G （薄層色譜用）5%次氯酸鈉溶液：稱取100g漂白精，加入500mL水，攪勻。另將80g工業(yè)用碳酸鈉（Na2CO3.10H2O）溶于500mL溫水中，倒入上述溶液中，攪勻，澄清過濾后貯存于帶橡皮塞的玻璃瓶中，用作消毒劑。黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取1-1.2mgAF

17、T B1標(biāo)準(zhǔn)品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀釋至100mL，避光置于4冰箱中保存。用紫外分光光度計(jì)測(cè)此標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收峰的波長(zhǎng)及該波長(zhǎng)的吸光度。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，g/mL；A 測(cè)得的吸光度；M 黃曲霉毒素B1的相對(duì)分子量，312； f 使用儀器的校正因素；E2黃曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩爾消光系數(shù)，19800。3主要儀器（1）小型粉碎機(jī)（2）玻璃板：520cm（3）薄層板涂布器（4）色譜展開槽（2564cm）（5）紫外光燈：100-125W，帶有波長(zhǎng)365nm濾光片（6）微量注射器：20uL,10uL各一支食品分析與檢測(cè)（楊玉紅

18、、田艷花主編）4操作步驟 樣品處理 玉米、大米、麥類、面粉、薯干、豆類、花生、花生醬等：稱取20g粉碎過篩樣品（面粉、花生醬不需粉碎）置于250mL錐形瓶中，加30mL石油醚或正己烷和100mL甲醇水溶液，在瓶塞上涂上一層水，蓋嚴(yán)防漏。震蕩30min，靜置片刻，過濾于分液漏斗，待下層甲醇水溶液分清后，放出甲醇水溶液于另一錐形瓶中。取20mL甲醇水溶液，置于125mL分液漏斗中，加20mL三氯甲烷，振搖2分鐘，靜止分層。放出三氯甲烷層，經(jīng)盛有約10g先用三氯甲烷濕潤(rùn)的無水硫酸鈉的慢速濾紙過濾于50mL蒸發(fā)皿中，分液漏斗中再加5mL三氯甲烷提取一次，三氯甲烷層一并濾入蒸發(fā)皿中，最后用少量三氯甲烷洗

19、過濾器，洗液并入蒸發(fā)皿中。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）在通風(fēng)柜中，將蒸發(fā)皿于65水浴上揮干，然后放入冰盒上泠卻2-3分鐘，準(zhǔn)確加入1mL苯-乙腈混合液，用帶橡皮頭滴管的管尖將殘?jiān)浞只旌?，若有結(jié)晶析出，將蒸發(fā)皿取下，繼續(xù)溶解、混勻，晶體消失后用滴管吸取上清液轉(zhuǎn)移于2mL具塞試管中。 花生油、香油、菜油等：稱取4g混勻樣品于小燒杯中，用20mL石油醚或正己烷，將其轉(zhuǎn)移到125mL分液漏斗中，用20mL甲醇-水溶液分?jǐn)?shù)次洗燒杯，洗液并入分液漏斗中，振搖2分鐘，靜止分層后，將下層甲醇-水溶液移入第二分液漏斗，再用5mL甲醇-水溶液重復(fù)提取一次，提取液并入第二分液漏斗中。在第二分液漏斗中加入2

20、0mL三氯甲烷，以下按a法中自“振搖2分鐘，靜止分層”起依法操作。2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 醬油、醋：稱取10g樣品于小燒杯中，為防止提取時(shí)乳化，加0.4g氯化鈉，于分液漏斗，用15mL三氯甲烷分次洗滌燒杯，洗液并入漏斗。以下按a法中自“振搖2分鐘，靜止分層”起依法操作，最后加入2.5mL苯-乙腈混合液，此溶液每毫升相當(dāng)于4g樣品。 發(fā)酵酒類：用醬油、醋的測(cè)定方法，但不加氯化鈉。 樣品測(cè)定 薄層板的制備：稱取約3g硅膠G，加相當(dāng)于硅膠量的2-3倍左右的水，用力研磨1-2分鐘，至成糊狀后立即倒入涂布器內(nèi)，推鋪成520cm、厚度為0

21、.25 mm的薄層板三塊。于空氣中干燥約15分鐘后，在100下活化2小時(shí)，取出放入干燥器中保存。 點(diǎn)樣：將薄層板邊緣附著的吸附劑刮凈，在距薄層板底端3cm的基線上用微量注射器滴加樣液和標(biāo)準(zhǔn)液：第一點(diǎn)：10uL 0.04ug/mL AFT B1 標(biāo)準(zhǔn)使用液。第二點(diǎn)：20uL樣液第三點(diǎn)：20uL 樣液 + 10uL 0.04ug/mL AFT B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：20uL 樣液 + 10uL 0.2ug/mL AFT B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。要求點(diǎn)距邊緣和點(diǎn)間距約為1cm,樣點(diǎn)直徑約3cm,大小相同，點(diǎn)樣時(shí)可用電吹風(fēng)冷風(fēng)邊吹邊點(diǎn)。 展開：在展開槽內(nèi)加10mL無水乙醚，將點(diǎn)好樣的薄層板預(yù)展12cm，取出

22、揮干。再于另一展開槽內(nèi)加10mL 丙酮+三氯甲烷（8+92）混合溶劑，展開10-12cm，取出揮干。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 結(jié)果觀察：將展開好的薄板放在365nm的紫外燈光下觀察：a.若第一點(diǎn)無熒光或都無熒光。說明薄板或展開劑未制備好，需重新制備。b.第一點(diǎn)有熒光，而其余三點(diǎn)無熒光。說明樣液中有熒光猝滅劑，樣液需重新制備。c.第一點(diǎn)有熒光，第二點(diǎn)無熒光，三、四點(diǎn)有熒光。說明樣液不含AFT B1或含量小于最低檢出量。d.四個(gè)點(diǎn)都有熒光。需做確證實(shí)驗(yàn)后再進(jìn)行定量。 確證實(shí)驗(yàn)：于另一薄板上左邊依次點(diǎn)二個(gè)樣，第一點(diǎn)：10uL0.04ug/mL AFT B1標(biāo)準(zhǔn)使用液；第二點(diǎn)，20uL樣液

23、。在以上兩點(diǎn)各加一小滴三氟乙酸（TFA），待反應(yīng)5min后，用電吹風(fēng)熱風(fēng)2分鐘，使溫度不高于40。再于薄層板的右邊點(diǎn)以下二個(gè)點(diǎn)：第三點(diǎn)：10uL 0.04ug/L AFT B1標(biāo)準(zhǔn)使用液。第四點(diǎn)：20uL樣液；展開(方法同)，于紫外光下觀察樣液是否產(chǎn)生與AFT B1標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)相同的衍生物,未加TFA的第三、四點(diǎn)作空白對(duì)照。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 稀釋定量：若第二點(diǎn)的熒光強(qiáng)度比第一點(diǎn)強(qiáng)，則根據(jù)其強(qiáng)度估計(jì)減少點(diǎn)樣體積，于另一薄板上點(diǎn)四個(gè)點(diǎn)：第一點(diǎn)：10uL 0.04ug/mL AFT B1標(biāo)準(zhǔn)使用液第二點(diǎn)：10uL 樣液第三點(diǎn)：15uL 樣液第四點(diǎn)：20uL 樣液展開后取熒光強(qiáng)度與第一點(diǎn)

24、相同的樣點(diǎn)進(jìn)行計(jì)算。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中X 樣品中AFT B1 的含量，ug/kg(ppb)；V1稀釋前樣液的總體積，mL；D 樣液的稀釋倍數(shù)；V2出現(xiàn)同等熒光強(qiáng)度的稀釋后樣液點(diǎn)樣量mL；m加入苯乙腈混合液溶解時(shí)相當(dāng)于樣品的質(zhì)量，g；0.004黃曲霉毒素B1的最低檢出量，ug。5計(jì)算 試樣經(jīng)過甲醇+水提取，提取液經(jīng)過濾、稀釋后，濾液經(jīng)過含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和層析凈化，黃曲霉毒素交聯(lián)在層析介質(zhì)中的抗體上，此抗體對(duì)黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2具有專一性。用水將免疫親和柱上雜質(zhì)除去.以甲醇通過免疫親和層析柱洗脫，加入溴溶液衍生，以

25、提高測(cè)定靈敏度。洗脫液通過熒光光度計(jì)測(cè)定黃曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)總量。免疫親和層析凈化熒光光度法測(cè)定大米中黃曲霉毒素 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）2.試劑甲醇(CH30H):色譜純；甲醇+水(7+3):取70 mL 甲醇加 30 mL 水；甲醇+水(8+2):取80 ml 甲醇加 20 ml 水；氯化鈉(NaCl)；磷酸氫二鈉(Na2HPO4) ；磷酸二氫鉀(Na2HPO4)； 氯化鉀(KCl)；溴溶液儲(chǔ)備液(0.01%):稱取適量溴，溶于水，配成0.01%的儲(chǔ)備液，4避光保存；溴溶液工作液(0.002%):取10ml 0.01%的溴溶液加入 40ml 水混勻，于

26、棕色瓶中保存?zhèn)溆谩Ｐ杳看问褂们芭渲?；二水硫酸奎?C20H24N2O2H2SO42H20)；硫酸溶液(0.05mol/L):取2.8ml濃硫酸，緩慢加入適量水中，冷卻后定容至 1000ml；熒光光度計(jì)校準(zhǔn)溶液:稱取3.40g 硫酸奎寧(C20H24N2O2H2SO42H20)用 0.05mol/L 硫酸溶液稀釋至 100mL，此溶液熒光光度計(jì)讀數(shù)相當(dāng)于 20 g/L 黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）3.儀器 熒光光度計(jì)、高速均質(zhì)器.18000r/min22000r/min、黃曲霉毒素免疫親和柱 玻璃纖維濾紙:直徑11cm，孔徑1.5m、玻璃注射器:10mL,20mL、

27、玻璃試管:直徑12mm，長(zhǎng)75mm，無熒光特性、空氣壓力泵。4.操作步驟提取準(zhǔn)確稱取經(jīng)過磨細(xì)(粒度小于2mm)的試樣25.0g于250mL具塞錐形瓶中，加入5.0g氯化鈉及甲醇+水(7+3)至125.0mL(V1)，以均質(zhì)器高速攪拌提取2 min定量濾紙過濾，準(zhǔn)確移取15.00 mL(V2)濾液并加入30.0mL(V3)水稀釋，用玻璃纖維濾紙過濾12次，至濾液澄清，備用。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）凈化 將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。 準(zhǔn)確移取15.00 mL(V4)樣品提取液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6 mL/min流速緩慢通過免

28、疫親和柱，抽干。以10 mL水淋洗柱子兩次，棄去全部流出液，抽干。準(zhǔn)確加入1.00 mL(V)色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1mL/min2 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測(cè)用。熒光光度計(jì)校準(zhǔn) 在激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)450nm 條件下，以0.05m ol/L硫酸溶液為空白，調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的讀數(shù)值為0.0g/L；以熒光光度計(jì)校準(zhǔn)溶液(4.12)調(diào)節(jié)熒光光度計(jì)的讀數(shù)值為20.0 g/L。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）樣液測(cè)定取上述凈化后的甲醇洗脫液加入1.00mL 0.002%溴溶液，混勻，靜置1min按條件進(jìn)行 操作，于熒光光度計(jì)中讀取樣液中黃曲霉毒素(B1+B2+G1+G

29、2)的濃度 c(空白試驗(yàn) 用水代替試樣，按步驟做空白試驗(yàn)。5.結(jié)果計(jì)算樣品中（B1B2G1G2）的含量(X)以微克每千克表示，按下式計(jì)算：2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中: X 樣品中黃曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)含量，g/kg；C1 試樣中黃曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/kg；C0 空白試驗(yàn)黃曲霉毒素(B1+B2+G1+G2)的含量，g/L；V 最終甲醇洗脫液體積，mL； W 最終凈化洗脫液所含的試樣質(zhì)量，g；m 試樣稱取的質(zhì)量的數(shù)值，g；V1 樣品和提取液總體積，mL；V2 稀釋用樣品濾液體積，mL； V3

30、稀釋液體積，mL；V4通過親和柱的樣品提取液體積，mL。6.說明及注意事項(xiàng)方法操作中所有試劑不得出現(xiàn)熒光干擾物質(zhì)。每個(gè)試樣平行測(cè)定兩次，以其算術(shù)平均值作為結(jié)果。計(jì)算結(jié)果精確到0.1g/L。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目三食品中動(dòng)、植物毒素的測(cè)定食品中的天然毒素是指某些動(dòng)、植物中所含有的有毒天然成分，如河豚中含有河豚毒素、苦杏仁中的氰化物、毒蘑菇中含有的毒肽或毒蠅堿等。有些動(dòng)植物食品是由于儲(chǔ)存不當(dāng)而形成某些有毒物質(zhì)，如馬鈴薯發(fā)芽后可產(chǎn)生龍葵堿毒素。一、常見的天然毒素(一)動(dòng)物性食品毒素動(dòng)物性食品含有天然毒素的多為海產(chǎn)品。主要包括以下兩類：1.魚類的內(nèi)源性毒素 2.貝類毒素 （二）植物性

31、食品毒素1.有毒植物蛋白、氨基酸2.毒苷 主要有三類：氰苷類、致甲狀腺腫素和皂苷。3.生物堿 主要是指存在于植物中的含氮堿性化合物。組胺的測(cè)定動(dòng)物類食品（如魚肉）中組胺的測(cè)定是利用其與重氮試劑反應(yīng)生成紅色化合物的現(xiàn)象予以鑒定的。 重氮試劑一般稱取0.1g對(duì)硝基苯胺，置于100 mL 0.1moL/L HCL溶液中。取5 mL移至冰箱中冷卻，加入5亞硝酸鈉溶液0.1 mL，混勻，冷卻。具體方法如下：魚肉樣品去皮、去骨、去內(nèi)臟，置于燒杯中，加入相當(dāng)于樣品9倍的水，用玻璃棒將魚肉打碎，再加入等量5三氯乙酸溶液，攪拌均勻，過濾。取濾液2 mL，滴加0.5 NAOH溶液中和，加入1 mL 4Na2CO3

32、溶液，移入冰箱中冷卻5min，加入1 mL重氮化試劑，靜置5min后，加入乙酸乙酯10 mL，振搖30s，靜置。如乙酸乙酯層呈現(xiàn)紅色，則表示魚肉中有組胺存在。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）操作方法：取適量樣品置于燒杯中，加入適量甲醇，用1的乙酸溶液調(diào)pH為45，在水浴中回流浸出20min，取下，離心分離后收集上清液。重復(fù)回流提取一次，收集離心后的上清液，移入蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至糖漿狀，用乙醚分?jǐn)?shù)次洗滌，去除脂肪后，加少量水溶解糖漿，過濾。取濾液0.5mL注入小白鼠腹腔內(nèi)，觀察1530min。若在此期間小白鼠出現(xiàn)不安，突然旋動(dòng)，繼之走路蹣跚，呼吸急促，最后突然跳起，翻身，四肢痙攣而死，

33、則樣品中有河豚毒素存在。河豚毒素的測(cè)定-生物試驗(yàn)法食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）操作方法：取適量樣品置于燒杯中，加入適量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，離心分離后收集上清液。重復(fù)回流提取一次，收集離心后的上清液，移入蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至糖漿狀，用乙醚分?jǐn)?shù)次洗滌，去除脂肪后。將所提取漿狀物質(zhì)溶于濃硫酸后，再加入少量重鉻酸鉀呈現(xiàn)綠色，則樣品中有河豚毒素存在。河豚毒素的測(cè)定-呈色反應(yīng)法食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）操作方法：取適量樣品置于燒杯中，加入適量甲醇，再加入1的乙酸溶液至呈微酸性，在水浴中回流浸出20min，取下，離心分離后收集上清液。重

34、復(fù)回流提取一次，收集離心后的上清液，移入蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸發(fā)至糖漿狀，用乙醚分?jǐn)?shù)次洗滌，去除脂肪。將得到的漿狀物質(zhì)少許溶于10mL 0.5的乙酸溶液中，用1cm比色皿，于波長(zhǎng)250300nm檢測(cè)吸光度，在波長(zhǎng)270nm出現(xiàn)最大吸收峰，為河豚毒素特征吸收波長(zhǎng)。河豚毒素的測(cè)定-紫外分光光度法食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目四 食品加工過程中形成的有害物質(zhì)的檢測(cè)食品加工對(duì)食物營(yíng)養(yǎng)素的影響具有雙重性。一方面加工可以有效地殺滅微生物并鈍化酶的活性，減小微生物和酶對(duì)加工工藝及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的不利影響，破壞食物中某些抗?fàn)I養(yǎng)因子和有毒物質(zhì)，從而提高食物的消化率和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值

35、；另一方面則由于各種營(yíng)養(yǎng)素穩(wěn)定特性以及對(duì)不同加工工藝適應(yīng)程度的差異，在加工中也會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)素不同程度的破壞會(huì)損失，甚至在加工過程中還會(huì)產(chǎn)生一些有害物質(zhì)，對(duì)人體健康可產(chǎn)生很大的危害。如，在習(xí)慣吃熏魚的冰島、芬蘭和挪威等國(guó)家，胃癌的發(fā)病率非常高。我國(guó)胃癌和食道癌高發(fā)區(qū)的居民也有喜食煙熏肉和腌制蔬菜的習(xí)慣。在這幾類食品加工過程中形成的有害物質(zhì)主要可分為三類：N亞硝基化合物、多環(huán)芳烴和雜環(huán)胺。食品中苯并a芘的測(cè)定方法有熒光分光光度法、目測(cè)比色法、氣相色譜法和液相色譜法等。熒光分光光度法可準(zhǔn)確用于苯并a芘的定量分析，是我國(guó)食品衛(wèi)生檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的首選方法，也是公認(rèn)的方法之一。食品中苯并a芘的允許量標(biāo)準(zhǔn)如表8-3

36、所示3,4苯并芘的檢測(cè)食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）品種指標(biāo)品種指標(biāo)肉制品燒烤豬肉、鴨、鵝、雞5植物油花生油10叉燒肉、羊肉串5菜油10火腿、板鴨5茶油10煙熏魚5其他油10熏雞、熏牛肉、熏馬肉5糧食稻谷5熏紅腸、香腸5小麥5植物油豆油10大麥5表8-3 食品中苯并a芘的允許量標(biāo)準(zhǔn) 單位：g/樣品先用有機(jī)溶劑提取，或經(jīng)皂化后提取，再將提取液經(jīng)液-液分配或色譜柱凈化，然后在乙?；癁V紙上分離苯并（a）芘，因苯并（a）芘在紫外光照射下呈藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)，將分離后有苯并（a）芘的濾紙部分剪下，用溶劑浸出后，用熒光分光光度計(jì)測(cè)熒光強(qiáng)度與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。2試劑苯、環(huán)己烷（或石油醚，弗程3060）、二甲基

37、甲酰胺或二甲基亞砜、無水乙醇、乙醇（95%）、氫氧化鉀、無水硫酸鈉。展開劑：乙醇：二氯甲烷（2：1）、層析用氧化鋁（中性）、乙酰化濾紙。3,4苯并芘的檢測(cè)-熒光法食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 1.原理 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取10.0mg苯并（a）芘，用苯溶解后移入100mL棕色容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于苯并（a）芘100g。放置冰箱中保存。苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取1.00mL苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)溶液置于10mL容量瓶中，用苯稀釋至刻度，同法依次用苯稀釋，最后配成每毫升相當(dāng)于1.0及0.1g苯并（a）芘兩種標(biāo)準(zhǔn)使用液，放置冰箱中保存。3.儀器層析柱、層析缸（筒）、

38、K-D濃縮器、紫外光燈：帶有波長(zhǎng)為365nm或254nm的濾光片、振蕩器、微量注射器（25L、50L）、熒光分光光度計(jì)。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）4.操作步驟1.樣品處理稱取試樣50.00g于三角瓶中，加95乙醇100mL，氫氧化鉀12g，裝上冷凝管，于水?。?5）加熱回流3h，取下三角燒瓶，樣液濾入裝有100mL水的分液漏斗中。依次用乙醇50mL環(huán)己烷150mL分2次洗滌三角瓶，過濾后一并收于分液漏斗中，振搖3min，靜置分層，下層液放于第2個(gè)分液漏斗中，再用環(huán)己烷70mL提取3min，分層后，棄水層。環(huán)己烷提取液合并于第1個(gè)分液漏斗中，用環(huán)己烷8mL淋洗漏斗，洗液一并收入，用40

39、100mL水洗環(huán)己烷提取液3次，水洗液合并于第2個(gè)分液漏斗中用環(huán)己烷30mL，提取1次，振搖1min，分層后棄水層，再用40水50mL重復(fù)1次。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）全部環(huán)己烷提取液經(jīng)層析柱純化，用100mL苯淋洗層析柱，流速2Ml/min。洗脫液用K-D濃縮器濃縮至0.10.5mL，待測(cè)。2.紙層析點(diǎn)樣：在乙?；癁V紙條上的一端5cm處，用鉛筆劃一橫線為起始線，吸取一定量?jī)艋蟮臐饪s液，點(diǎn)于濾紙條上，同時(shí)點(diǎn)20L苯并（a）芘的標(biāo)準(zhǔn)使用液（1g/mL）。展開：將點(diǎn)樣后的乙?；癁V紙上端掛在圓柱形層析缸缸蓋的掛鉤上，層析缸內(nèi)加30mL無水乙醇、5mL二氯甲烷為展開劑，濾紙條下端浸入展開

40、劑約1cm，待溶劑前沿至約20cm時(shí)取出陰干。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）紫外燈照射：在365或254nm紫外光燈下觀察展開后的濾紙條，用鉛筆劃出標(biāo)準(zhǔn)苯并（a）芘及與其同一位置的樣品的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，剪下此斑點(diǎn)分別放入小比色管中，各加4mL苯加蓋，插入5060水浴中不時(shí)振搖，浸泡15min。3.測(cè)定將樣品及標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的苯浸出液移入熒光分光光度計(jì)的石英杯中，以365nm為激發(fā)波長(zhǎng)，以365460nm波長(zhǎng)進(jìn)行熒光掃描，所得熒光光譜與標(biāo)準(zhǔn)苯并（a）芘的熒光光譜比較定性。與樣品分析的同時(shí)做試劑空白，包括處理樣品所用的全部試劑同樣操作，分別讀取樣品、標(biāo)準(zhǔn)及試劑空白于波長(zhǎng)406、406+5、4065nm

41、處的熒光強(qiáng)度，按基線法由下式計(jì)算所得的數(shù)值，為定量計(jì)算的熒光強(qiáng)度。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中：X1樣品中苯并（a）芘的含量，g/kg；m1苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的質(zhì)量，g；F標(biāo)準(zhǔn)的斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度，mm；F1樣品斑點(diǎn)浸出液熒光強(qiáng)度，mm；F2試劑空白浸出液熒光強(qiáng)度，mm；V1樣品濃縮液體積，mL；V2點(diǎn)樣體積，mL；m2樣品質(zhì)量，g。4.操作步驟N亞硝基化合物是具有強(qiáng)致癌性的一類有機(jī)化合物，按其化學(xué)結(jié)構(gòu)，可分為兩類：一類為亞硝胺，另一類為N亞硝酸胺。低相對(duì)分子質(zhì)量的亞硝胺在常溫下為黃色油狀液體，高相對(duì)分子質(zhì)量的為固體。亞硝胺和

42、N亞硝酸胺在紫外光照射下都可發(fā)生光分解反應(yīng)。約90具有強(qiáng)致癌性，其中N亞硝酸胺是終末致癌物，亞硝胺需要在體內(nèi)活化后才能成為致癌物。由于N亞硝胺在在食品中含量較低（10g/水平），要求分析方法具有足夠的靈敏性和特異性，所以只能有氣相色譜熱能分析儀（GCTEA）和氣相色譜質(zhì)譜分析儀（GCMS）才能滿足這兩方面的要求。亞硝胺類化合物的檢測(cè)食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）樣品中的N一亞硝胺類化合物經(jīng)水蒸氣蒸餾和有機(jī)溶劑萃取后，濃縮至一定量，采用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀的高分辨峰匹配法進(jìn)行確認(rèn)和定量分析。2.試劑二氯甲烷、無水硫酸鈉、氯化鈉、硫酸(1+3)、氫氧化鈉溶液(3molL)N一亞硝胺標(biāo)準(zhǔn)溶液、

43、N一亞硝胺標(biāo)準(zhǔn)使用液、耐火磚顆粒。3.儀器 水蒸氣蒸餾裝置、KD濃縮器、氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀。亞硝胺類化合物的檢測(cè)-氣相色譜質(zhì)譜測(cè)定法 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）4.操作步驟水蒸氣蒸餾：稱樣品取200g，切碎(或絞碎、粉碎)后，置于水蒸氣蒸餾裝置的蒸餾瓶中(液體試樣直接量取200mL)，加入100 mL水(液體試樣不加水)，搖勻。在蒸餾瓶中加入120g氯化鈉，充分搖動(dòng)，使氯化鈉溶解。將蒸餾瓶與水蒸氣發(fā)生器及冷凝器連接好，并在錐形接收瓶中加入40 mL。二氯甲烷及少量冰塊，收集400 mL餾出液。萃取純化：在錐形接收瓶中加入80g氯化鈉和3mL的硫酸(1+3)，攪拌使氯化鈉完

44、全溶解。然后轉(zhuǎn)移到500 mL分液漏斗中，振蕩5min，靜止分層，將二氯甲烷層分至另一錐形瓶中，再用120 mL二氯甲烷分三次提取水層，合并四次提取液，總體積為160mL。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）對(duì)于含有較高濃度乙醇的試樣，如蒸餾酒、配制酒等，應(yīng)用50 mL氫氧化鈉溶液(3molL)洗有機(jī)層兩次，以除去乙醇的干擾。濃縮:將有機(jī)層用10 g無水硫酸鈉脫水后，轉(zhuǎn)移至KD濃縮器中，加入一粒耐火磚顆粒，于50水浴上濃縮至1 mL備用。氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定條件a.色譜條件.氣化室溫度：190。.色譜柱溫度：對(duì)N一亞硝基二甲胺、N一亞硝基=乙胺、N一亞硝基二丙胺N一亞硝基吡咯烷分別為130、

45、145、130、160。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）.色譜柱：內(nèi)徑1.8 mm3.0mm，長(zhǎng)2m的玻璃柱，內(nèi)裝涂以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15的PEG20M固定液和氫氧化鉀溶液(10gL)的80目100目Chromosorb WAWDWCS。.載氣：氦氣，流速為40mLmin。b.質(zhì)譜儀條件.分辨率：7000；.離子化電壓：70V；.離子化電流：300A；.離子源溫度：180；.離子源真空度：1.3310-4 Pa；.界面溫度：180。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）c.測(cè)定采用電子轟擊源高分辨峰匹配法，用全氟煤油(PFK)的碎片離子(它們的質(zhì)荷比為68.995 27、99.9936、130.9

46、92O、99.9936)分別監(jiān)視N一亞硝基二甲胺、N一亞硝基二乙胺、N一亞硝基二丙胺及N-亞硝基吡咯烷的分子、離子(它們的質(zhì)荷比為74.0480、102.0793、130.1106、100.0636)，結(jié)合它們的保留時(shí)間來定性以示波器上該分子、離子的峰高來定量分析。5.計(jì)算2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）式中：X樣品中某一N一亞硝胺化合物的含量，g/或gL；h1濃縮液中該N一亞硝胺化合物的峰高，mm；h2標(biāo)準(zhǔn)使用液中該N一亞硝胺化合物的峰高，mm；標(biāo)準(zhǔn)使用液中該N一亞硝胺化合物的濃度，gmL；m樣品質(zhì)量或體積，g或mL。計(jì)算結(jié)果表示到兩

47、位有效數(shù)字。6.說明由于質(zhì)譜靈敏度為10-10g，當(dāng)取樣量為200g、進(jìn)樣量為1L時(shí)，檢測(cè)下限位0.5g/。由于揮發(fā)性N一亞硝胺（如NDMA、NDEA、NDPA和NPYR）在100時(shí)都具有一定的蒸汽壓，可隨水蒸氣帶入氣相，在接收瓶中冷凝收集。待蒸餾的樣品中加入氯化鈉使之飽和是為了減低N一亞硝胺在水中的溶解度，使之易于蒸發(fā)。在接收瓶中加入冰塊和二氯甲烷，可利于揮發(fā)性N一亞硝胺的冷凝收集，提高回收率。在水相中加入3 mL硫酸（1+3）是為了出去堿性雜質(zhì)。濃縮時(shí)，如果溫度過高（超過60），會(huì)使亞硝胺明顯損失。對(duì)于含有較高濃度乙醇的樣品，可能在溜出液中含有較多的乙醇，在萃取時(shí)可轉(zhuǎn)入二氯甲烷中。為此必須

48、用50mL氫氧化鈉溶液(3molL)洗滌有機(jī)相兩次。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）獸藥殘留是“獸藥在動(dòng)物源食品中的殘留”的簡(jiǎn)稱，是指動(dòng)物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。所以，獸藥殘留既包括原藥，也包括藥物在動(dòng)物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物和獸藥生產(chǎn)中所伴生的雜質(zhì)。在動(dòng)物源食品中較容易引起獸藥殘留量超標(biāo)的獸藥主要有抗生素類、磺胺類、呋喃類、抗寄生蟲類和激素類藥物。1抗生素類如青霉素類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、土霉素、螺旋霉素、鏈霉素、金霉素等。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目五獸藥殘留的檢測(cè)2磺胺類常見藥物有磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺脒、新諾明、菌得

49、清等。3激素激素是指由內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌細(xì)胞分泌的具有傳遞信息作用的高效能生物活性物質(zhì)。這類藥物主要用于提高動(dòng)物的繁殖和加快生長(zhǎng)發(fā)育速度，常見使用的激素和-興奮劑類主要有性激素類、皮質(zhì)激素類和鹽酸克侖特羅等。4其他獸藥呋喃唑酮和硝呋烯腙常用于豬或雞的飼料中來預(yù)防疾病，它們?cè)趧?dòng)物源食品中應(yīng)為零殘留，即不得檢出，是我國(guó)食品動(dòng)物禁用獸藥。2022/7/20食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）樣品經(jīng)提取，微孔濾膜過濾后直接進(jìn)樣，用反相色譜分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量，出峰順序?yàn)橥撩顾?、四環(huán)素、金霉素。標(biāo)準(zhǔn)加法定量。2.試劑乙腈（分析純）、0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液、土霉素（OTC）標(biāo)準(zhǔn)溶液

50、四環(huán)素（TC）標(biāo)準(zhǔn)溶液、金霉素（CTC）標(biāo)準(zhǔn)溶液、混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（取土霉素、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.00mL，取金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00mL，置于10mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四環(huán)素各0.1mg，金霉素0.2mg，臨時(shí)現(xiàn)配）、5%高氯酸溶液。畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素含量的測(cè)定 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）3.儀器高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器。 4.色譜條件 色譜柱：ODSC18 （5m） 6.2mm15cm、檢測(cè)波長(zhǎng)（355nm）、 柱溫流速（1.0mL/min）、進(jìn)樣量（10L）、 流動(dòng)相（乙腈/0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（用30%（V/V）硝酸

51、溶液調(diào)節(jié)pH2.5），3565（v/v），使用前用超聲波脫氣10min）。 5.操作方法 （1）樣品測(cè)定食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）稱取5.00g（0.01g）切碎的肉樣（5mm），置于50mL錐形燒瓶中，加入5%高氯酸25.0mL，于振蕩器上振蕩提取10min，移入到離心管中，以2000r/min離心3min，取上清液經(jīng)0.45m濾膜過濾，取溶液10L進(jìn)樣，記錄峰高，從工作曲線上查得含量。 2.繪制工作曲線分別稱取7份切碎的肉樣，每份為5.00g（0.01g），分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0、25、50、100、150、200、250L（含土霉素、四環(huán)素各為0、2.5、5.0、10.0、15

52、.0、20.0、25.0g，含金霉素0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0g），按樣品測(cè)定方法操作、以峰高為縱坐標(biāo)，以抗生素含量為橫坐標(biāo)繪制工作曲線。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 6.計(jì)算 式中：X樣品中抗生素含量，mg/g；A樣品溶液測(cè)得抗生素質(zhì)量，g；m樣品質(zhì)量，g。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）樣品中的激素經(jīng)提取分離后，用高效液相色譜分離測(cè)定，以峰保留時(shí)間定性，以峰高或峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。2.試劑甲醇、丙酮、乙醚、二氯甲烷、乙酸鈉、乙酸、無水硫酸鈉、乙酸鈉緩沖液 （5.2）。內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液： 區(qū)安眠酮0.1000g，用甲醇溶液溶解并定容至100mL此溶液

53、每毫升含安眠酮1.000mg。激素的檢測(cè) 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）內(nèi)標(biāo)使用液： 取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液2.0mL，用甲醇溶液溶解并定容至100mL，此溶液每毫升含安眠酮20.00g。激素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 分別稱取雌三醇、雌二醇、雌酮、睪酮、孕酮0.1000g用甲醇溶液溶解并定容至100mL，每毫升含各種激素均為1.000mg。激素標(biāo)準(zhǔn)使用液 精密吸取一定量的激素標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇配制成每毫升含各種激素為10.00g、安眠酮2.00g和每毫升含各種激素為2.00g、安眠酮2.00g的兩種標(biāo)準(zhǔn)使用液。3.儀器高效液相色譜儀、紫外檢測(cè)器、離心機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、K-D濃縮器。食品分析與檢測(cè)

54、（楊玉紅、田艷花主編）4.操作步驟（1）樣品處理去可食部分，搗成勻漿，稱取50g左右置于250mL具塞三角瓶中在上述樣品中加入安眠酮20.00g/mL的內(nèi)標(biāo)使用液1.0mL，加甲醇-丙酮（1+1）混合溶液150mL，在振蕩器上振搖提取30min。用濾紙過濾，殘?jiān)蒙倭考状?丙酮（1+1）混合液洗滌數(shù)次，洗液并入濾液中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或K-D濃縮器中將溶劑蒸除，殘?jiān)眉状?0mL溶解，經(jīng)盛有無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL分液漏斗中，再用10mL甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌漏斗，洗液并入濾液中。加pH5.2的乙酸鈉緩沖液80mL左右，混勻后用二氯甲烷50、30、30mL振搖提取3次，合并提取液并用無水硫酸鈉脫水，

55、在水浴中揮干溶劑，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0.00mL，混勻后以3000r/min離心5min，取上清液供色譜分析用。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）（2）高效色譜分析參考條件色譜柱 HP-ODS，4.6mm200mm流動(dòng)相 乙腈：甲醇：四氫呋喃：0.01molL乙酸鈉溶液（超純水配制）=20:20:10:50流速 1.0mL/min測(cè)定波長(zhǎng) 270nm進(jìn)樣體積 10L（3）樣品測(cè)定取樣品10L注入液相色譜儀，以內(nèi)標(biāo)法定量。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）5.結(jié)果計(jì)算式中 X樣品中激素的含量，g/g；A1樣品中激素的峰高與安眠酮峰高之比；A2標(biāo)準(zhǔn)溶液中激素的峰高與安眠酮峰高之比；m樣品

56、的質(zhì)量，g；標(biāo)準(zhǔn)溶液中激素的質(zhì)量濃度，g/mL；V樣品定容體積，mL。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）動(dòng)物性食品中瘦肉精殘留的測(cè)定瘦肉精，、學(xué)名鹽酸克倫特羅，是一種白色或類白色的結(jié)晶粉末，無臭、味苦，溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚。鹽酸克倫特羅是一種平喘藥，該藥物既不是獸藥，也不是飼料添加劑而是腎上腺類神經(jīng)興奮劑。鹽酸克倫特羅屬于非蛋白質(zhì)激素，耐熱，使用后會(huì)在豬體組織中形成殘留，尤其是在豬的肝臟等內(nèi)臟器官殘留較高，食后直接危害人體健康。動(dòng)物性食品中鹽酸克倫特羅（瘦肉精）殘留的測(cè)定方法主要有氣相色譜質(zhì)譜法、高效液相色譜法和酶聯(lián)免疫法等。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）項(xiàng)目六 食品中

57、其他有害成分的檢測(cè)基于抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性抑制測(cè)定。微孔板包被有針對(duì)克倫特羅IgG的包被體?？藗愄亓_抗體被加入，經(jīng)孵育及洗滌后，加入競(jìng)爭(zhēng)性酶標(biāo)記物、標(biāo)準(zhǔn)或試樣溶液?？藗愄亓_與競(jìng)爭(zhēng)性酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)克倫特羅抗體，沒有與抗體連接的克倫特羅標(biāo)記酶在洗滌中被除去。將底物（過氧化尿素）和發(fā)色劑（四甲基聯(lián)苯胺）加入到孔中孵育，結(jié)合的標(biāo)記酶將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，在450nm處測(cè)量吸光度，吸光度比值與克倫特羅濃度的自然對(duì)數(shù)成反比。瘦肉精的測(cè)定-酶聯(lián)免疫法 1.原理 食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）2.試劑高氯酸溶液（0.1mol/L）、磷酸二氫鈉緩沖液（0.1

58、mol/L，pH=6）、異丙醇+乙酸乙酯（40+60）、針筒式微孔過濾膜（0.45m，水相）、克倫特羅酶聯(lián)免疫試劑盒、96孔板（12條8孔）包被有針對(duì)克倫特羅IgG的包被抗體、過氧化物酶標(biāo)記物（濃縮液）、克倫特羅系列標(biāo)準(zhǔn)液（至少5個(gè)倍比稀釋濃度水平，1個(gè)空白）、酶底物（過氧化尿素）、克倫特羅抗體（濃縮液）反應(yīng)停止液（ 1mol/L硫酸）、緩沖液（酶標(biāo)記物及抗體濃縮液稀釋用）。3.儀器酶標(biāo)儀（配備450nm濾光片）、微量移液器、勻漿器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、離心機(jī)、酸度計(jì)、磨口玻璃離心管、超聲波清洗器。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）4.操作步驟（1）樣品提取肌肉、肝臟、腎臟樣品。稱取樣品10g，用2

59、0mL0.1mol/L高氯酸溶液勻漿，置于磨口玻璃離心管中，然后置于超聲波清洗器中超聲20min，取出置于80水浴中加熱30min。取出后離心（4500r/min）15min。傾出上清液，沉淀用5L0.1mol/L高氯酸溶液洗滌，再離心，將兩次上清液合并。用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至9.50.1，若有沉淀產(chǎn)生，再離心（4500r/min）10min,將上清液轉(zhuǎn)移至磨口玻璃離心管中，加8g氯化鈉，混勻，加入25mL異丙醇+乙酸乙酯（40+60），置于振蕩器上振蕩提取20min。提取完畢，放置5min。食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編）用吸管小心將上層有機(jī)相移至蒸發(fā)器中，用20mL異丙醇+

60、乙酸乙酯（40+60）再重復(fù)萃取一次，合并有機(jī)相，于60再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干用1mL磷酸二氫鈉緩沖液充分溶解殘留物，經(jīng)針筒式微孔過濾膜過濾，洗滌三次完全轉(zhuǎn)移至5mL玻璃離心管中，并用磷酸二氫鈉緩沖液定容至刻度。尿液試樣。若尿液渾濁先離心（3000r/min）10min,將上清液適當(dāng)稀釋后上酶標(biāo)板進(jìn)行酶聯(lián)免疫法篩選實(shí)驗(yàn)。血液試樣。將血清或血漿離心（3000r/min）10min, 將血清適當(dāng)稀釋后上酶標(biāo)板進(jìn)行酶聯(lián)免疫法篩選實(shí)驗(yàn)。 2.測(cè)定試劑的準(zhǔn)備食品分析與檢測(cè)（楊玉紅、田艷花主編） 競(jìng)爭(zhēng)酶標(biāo)記物使用液：提供的競(jìng)標(biāo)酶標(biāo)記物為濃縮液。由于稀釋的酶標(biāo)記物穩(wěn)定性不好，僅稀釋實(shí)際使用酶標(biāo)記物。在吸取