實(shí)驗(yàn)三革蘭染色法

1、實(shí)驗(yàn)三 革蘭染色法實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?. 理解革蘭染色法的原理；2. 掌握細(xì)菌涂片的制作；3.掌握革蘭染色的方法以及意義；細(xì)菌形態(tài)檢查方法1. 不染色標(biāo)本檢查法2. 染色標(biāo)本檢查法（一）不染色標(biāo)本檢查應(yīng)用：主要用于觀察活菌的動(dòng)力和運(yùn)動(dòng)方式常用方法：壓滴法、懸滴法、暗視野映光法壓滴法載玻片細(xì)菌懸液蓋玻片懸滴法鏡 檢觀察細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列，還能鑒別細(xì)菌。（二）染色標(biāo)本檢查法細(xì)菌體積小、半透明，經(jīng)染色后才能觀察清楚。染色法是染色劑與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)結(jié)合。最常用的染色劑是鹽類。堿性染色劑是由有色的陽離子和無色的陰離子組成；酸性染色劑則相反。細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)富含核酸，可以與帶正電荷的堿性染色劑結(jié)合；酸性染料不能使菌

2、體染色，而使背景著色而形成反差，故稱負(fù)染。染色標(biāo)本的檢查法負(fù)染色法正染色法細(xì)菌染色的方法 單染法:采用一種染料染色,只能觀察細(xì)菌的形態(tài)和排列特征，不能觀察細(xì)菌的染色特性和進(jìn)行鑒別。 復(fù)染法（鑒別染色法）:采用兩種或兩種以上的不同染料進(jìn)行先后染色，使不同種類的細(xì)菌、同種細(xì)菌的不同結(jié)構(gòu)，分別染上不同的顏色，以便鑒別細(xì)菌。革蘭染色法 該染色法是最常用最重要的染色法。是丹麥細(xì)菌學(xué)家革蘭于1884年創(chuàng)建的，至今仍廣泛應(yīng)用。革蘭染色法的原理滲透學(xué)說：與肽聚糖結(jié)構(gòu)有關(guān)。 革蘭陽性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易滲透，而革蘭陽性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量少，脂類含量高，酒精易滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將結(jié)合的結(jié)晶紫碘復(fù)合物脫

3、出?；瘜W(xué)學(xué)說：與細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中核糖核酸鎂鹽有關(guān)。 革蘭陽性菌細(xì)胞質(zhì)中的核糖核酸鎂鹽與結(jié)晶紫-碘結(jié)合形成更大的復(fù)合物，不易被酒精脫出。等電點(diǎn)學(xué)說：與細(xì)菌所帶電荷有關(guān)。 革蘭陽性菌等電點(diǎn)低（pI）為23，在中性或堿性環(huán)境中所帶負(fù)電荷多；革蘭陽性菌pI為45，所帶負(fù)電荷少，影響結(jié)合染色的多少。實(shí)驗(yàn)材料與方法（一）材料: 菌種：葡萄球菌、大腸埃希菌培養(yǎng)物 染液：結(jié)晶紫染液、盧戈碘液 95%酒清、稀釋復(fù)紅 其他：玻片、接種環(huán)、酒精燈 無菌生理鹽水、顯微鏡等（二）方法： 細(xì)菌涂片的制作：涂片、干燥、固定 革蘭染色：初染、媒染、脫色、復(fù)染 油鏡使用：觀察染色結(jié)果并記錄染色標(biāo)本檢查的基本程序涂片干燥固定染色涂片

4、：接種環(huán)滅菌、平板取材、細(xì)菌涂布干燥：自然干燥、熱空氣干燥固定：通過火焰外焰三次染色：初染、媒染、脫色、復(fù)染細(xì)菌涂片的制作涂片干燥固定染色鏡檢革蘭染色法（Gram染色）染液組成： 結(jié)晶紫染液、盧戈碘液 95乙醇、稀釋復(fù)紅染色方法：結(jié)晶紫 初染盧戈碘液 媒染95乙醇 脫色稀釋復(fù)紅 復(fù)染1分鐘1分鐘影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是脫色水洗水洗水洗水洗干燥30S1min Procedures of Gram Staining初染媒染脫色復(fù)染結(jié)晶紫1分鐘盧戈氏碘液1分鐘95%酒精30秒稀釋復(fù)紅30秒革蘭染色結(jié)果紫色革蘭陽性菌紅色革蘭陰性菌革蘭染色意義有助于鑒別細(xì)菌有助于選擇用藥有助于了解細(xì)菌的致病性影響革蘭染色的因素1. 操作因素 涂片的厚薄