浙江大學生物化學實驗甲植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析

1、植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析1、過氧化物酶簡介過氧化物酶是一類以鐵樸啉作為輔基的酶，該酶能2O2氧化供氫體，酶對H2O2具高度專一性，對供氫體的要求則較為廣泛。酚類、胺類化合物、某些雜環(huán)化合物和一些無機離子等都可作為過氧化物酶的供氫體。該酶催化的反應可用一通式表示：過氧化物酶廣泛存在于生物界，特別是在高等植物中，過氧化物酶含量豐富，并具有高度的多型性，即存在同工酶現(xiàn)象。AH2 + H2O2 A + 2 H2OE供氫體 氧化型產(chǎn)物1植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析研究表明，在植物不同的生長發(fā)育時期和不同的組織器官中，過氧化物酶同工酶的數(shù)目和活性存在較大差異。種子芽期的過氧化物

2、酶同工酶是種子發(fā)育過程中最穩(wěn)定、最豐富的時期，可作為研究同工酶的最佳取材時期。由于該期過氧化物酶同工酶比較穩(wěn)定，酶帶明確，具有較為明顯的品種專一性，因此可作為研究種子分類的一個生化指標。同時，在種子的生長發(fā)育過程中，過氧化物酶同工酶酶帶數(shù)目及染色程度深淺均呈有規(guī)律的變化。以水稻為例，在苗期酶帶數(shù)目少，酶活性低；在拔節(jié)期酶帶數(shù)目增多，酶活性增高；到灌漿期酶帶數(shù)目最多，酶活性最高。過氧化物酶同工酶這種有規(guī)律的變化可作為一項生理生化指標，用于研究種子的生長發(fā)育。2植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析植物激素可影響過氧化物酶同工酶的酶譜，如吲哚乙酸可抑制小麥和豌豆中過氧化物酶某些同工酶的表達?；疾?/p>

3、、輻射、乙烯處理均能導致過氧化物酶活性迅速增加。2、過氧化物酶活性染色原理根據(jù)過氧化物酶能利用H2O2氧化供氫體的反應可測定該酶的活性。常用的測定過氧化物酶活性的供氫體有愈創(chuàng)木酚和聯(lián)苯胺。本試驗采用愈創(chuàng)木酚和聯(lián)苯胺的混合液，有關(guān)反應式如下： 愈創(chuàng)木酚 + 聯(lián)苯胺 + H2O2 紫紅色復合物 + H2O E3植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析過氧化物酶同工酶經(jīng)電泳后，根據(jù)分子量和電荷的不同分成不同的譜帶，將電泳后的凝膠用愈創(chuàng)木酚聯(lián)苯胺染色后，在無過氧化物酶的地方，凝膠透明，而在過氧化物酶譜帶處，由于生成紫紅色復合物，因此譜帶呈紫紅色，這樣，在透明背景下出現(xiàn)紫紅色條帶的地方，即為過氧化物酶，由此可測定過氧化物酶同工酶的種類和數(shù)量狀況。3、材料與試劑試驗材料：新鮮植物葉片。試驗試劑：試驗試劑及注意事項詳見P125。4、操作方法操作過程及各步注意事項解說詳見P126。4植物不同生長發(fā)育期過氧化物酶同工酶譜分析5、試驗結(jié)果及