聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)用指南

1、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)應(yīng)用指南PCR歷史演變PCR技術(shù)簡介PCR的臨床應(yīng)用1984年，教授發(fā)明了具有劃時代意義的PCR技術(shù)。并因此項技術(shù)于1993年獲得諾貝爾化學(xué)獎。 1985年，實驗室技術(shù)成熟并逐步在臨床上應(yīng)用。二十世紀(jì)九十年代開始，在國內(nèi)各級醫(yī)院廣泛開展。2000年左右，全國開始規(guī)范化管理，工作人員需要培訓(xùn)資質(zhì)，實驗室需經(jīng)過相關(guān)機構(gòu)認(rèn)證。PCR歷史演變PCR技術(shù)簡介 所謂PCR技術(shù)，指的是在體外，以某一保守區(qū)段為模板，以一對特異性引物進(jìn)行誘導(dǎo)，以游離的堿基為原料，在Taq酶的催化下，對目的基因迅速擴增的一種分子生物學(xué)技術(shù)。一、PCR的概念1、體外擴增2、迅速大量擴增3、靈敏度高4、特異性高二、技術(shù)

2、特點變性：使雙鏈DNA變?yōu)閱捂湣Ｍ嘶穑菏挂锖突パa模板結(jié)合 。延伸：按53方向以引物為起始點復(fù)制循環(huán)次數(shù) DNA的鏈數(shù) 1 21 2 2 22 4 3 23 8 10 210 1024 20 220 1,048,576 30 230 1,073,741,824 10億 三、PCR技術(shù)分類1、普通PCR檢測技術(shù)2、實時熒光定量PCR檢測技術(shù)3、高敏感度內(nèi)標(biāo)熒光定量PCR檢測技術(shù)PCR的臨床應(yīng)用用于苛養(yǎng)病原菌的鑒定用于培養(yǎng)周期較長的病原菌檢測用于目前難以或者不能培養(yǎng)病原菌檢測病原菌載量分析病毒類疾病診斷需要快速匯報結(jié)果的病原菌檢測細(xì)菌或腫瘤細(xì)胞耐藥基因檢測遺傳代謝病的分子診斷（一）、檢測適宜人群1

3、、疑似肝炎患者。2、需要進(jìn)行抗病毒治療效果評估患者。3、需調(diào)整抗肝炎病毒治療方案者。4、有肝炎病史且已治愈的擬受孕及孕期女性。5、有肝炎病史且已治愈的擬母乳喂養(yǎng)及哺乳期婦女。6、有肝炎病史且已治愈的擬生育男性。7、肝炎所致肝癌后做過肝移植手術(shù)以后患者。8、血液制品及獻(xiàn)血員篩查。9、轉(zhuǎn)氨酶正常、血清學(xué)指標(biāo)改變后，需要停止藥物治療的患者。一、乙型肝炎/丙型肝炎檢測（二）、如何檢測1、疑似病人隨時抽血進(jìn)行檢測。2、乙型肝炎患者抗病毒治療期間，至少每3個月監(jiān)測一次HBV-DNA水平。3、對于抗HCV陽性者、考慮接受抗病毒治療者，在開始治療前、治療第4周、第12周，均需要進(jìn)行HCV-RNA檢測。4、有肝

4、炎病史且已治愈的擬生育男、女性，應(yīng)在受孕前進(jìn)行病毒載量檢測。5、有肝炎病史且已治愈的孕期婦女，應(yīng)在受孕早期、中期及晚期均進(jìn)行病毒載量檢測。6、有肝炎病史且已治愈的生育后婦女，若想母乳喂養(yǎng)嬰兒，應(yīng)在哺乳期間，定期進(jìn)行病毒載量檢測。7、獻(xiàn)血員及肝移植術(shù)后患者應(yīng)定期進(jìn)行病毒載量檢測。（三）、標(biāo)本采集 采集EDTA抗凝（紫帽血常規(guī)管）靜脈血2-3ml。患者抽血前需要空腹。注意：標(biāo)本要及時送到實驗室，尤其是丙型肝炎病毒，應(yīng)于采血后盡快送檢。二、HPV（人類乳頭瘤病毒）檢測 HPV病毒感染與子宮頸糜爛、尖銳濕疣和宮頸癌等婦科疾病高度相關(guān)，其中高危型HPV持續(xù)感染時導(dǎo)致宮頸癌的主要原因，而且從感染HPV到發(fā)

5、展成為宮頸癌大約需要10年時間。HPV感染所致宮頸癌是唯一一種病因明確，可以早期預(yù)防與治療及徹底根治的腫瘤。 一項調(diào)查表明，我國約18%的女性高危型HPV檢測陽性，但是25歲以上，有超過80%的人從未做過宮頸癌預(yù)防篩查。（一）檢測適宜人群1、有性生活史的女性2、有不潔性交史的男性或女性3、疑似尖銳濕疣患者診斷4、25歲以上女性健康普查（二）、如何檢測 疑似宮頸癌患者檢測通常采用細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測（TCT）和病原學(xué)檢測兩種方法。但由于HPV感染早期，細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變不顯著，單純依靠TCT結(jié)果會造成漏檢。采取PCR與反向雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，是明確診斷的關(guān)鍵手段。（三）、標(biāo)本采集 1、使用窺器暴露宮頸，使用

6、專用的HPV采樣刷置于宮頸口，逆時針方向轉(zhuǎn)三圈，并停留十秒。把采樣刷放入專用的標(biāo)本儲存瓶里，折斷采樣刷多余的部份，切勿將采樣刷丟掉，以保留足量標(biāo)本。蓋好蓋子，標(biāo)記好送檢驗室檢測。 2、若為尖銳濕疣患者，可以采集疣體組織進(jìn)行送檢。 3、男性患者可以采集尿道拭子送檢。 注意：采集HPV標(biāo)本前三天不要陰道用藥或沖洗；避免經(jīng)期采樣，少量血液不影響檢測結(jié)果；采樣前不要進(jìn)行醋酸或碘液涂抹。三、性病三項（NG、CT、UU）檢測 淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原體（CT）、解脲支原體（UU）是引起淋病性尿道炎/陰道炎、非淋病性尿道炎/陰道炎的病原體。常規(guī)檢測采用細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)，由于NG抵抗力差，易死亡；CT目前上不能夠體外培養(yǎng)；UU培養(yǎng)較為困難，故傳統(tǒng)微生物法檢測存在困難。（一）檢測適宜人群1、疑似性病患者診斷2、有不潔性交史者篩查3、夫妻雙方一方患有性病，另一方篩查1、男性：清潔尿道后，采用專用拭子插入尿道2cm處，旋轉(zhuǎn)后取出，放置在無菌管中送檢。2、女性：清潔外陰后，采用專用拭子在子宮頸口處采集標(biāo)本（停留數(shù)秒），轉(zhuǎn)入無菌管中送檢。3、尿道炎患者若無明顯分泌物，可以采集前段晨尿作為標(biāo)本送檢。（二）標(biāo)本采集四、其他病原體檢測EB檢測：依據(jù)病原體寄生及復(fù)制釋放部位，建議采用咽拭子和血液標(biāo)本同時檢測。