林木病理學(xué)二.林木病原細(xì)菌教案

1、林木病理學(xué)二.林木病原細(xì)菌教案大多有鞭毛極鞭著生在菌體的一端或兩端周鞭著生在菌體的四周鞭毛著生的位置是分類的依據(jù)一般要對(duì)鞭毛染色后再鏡檢菌體結(jié)構(gòu)黏質(zhì)層(較厚而固定的稱作莢膜)-細(xì)胞壁(多糖，擬脂類和甲殼質(zhì)組成) -質(zhì)膜（質(zhì)膜下的小粒狀鞭毛穿過細(xì)胞壁和黏質(zhì)層延伸到體外） -胞質(zhì)（異染粒中性體氣泡液泡核糖體）-核區(qū)（DNA，無(wú)核膜）無(wú)芽孢用革蘭氏染色法可反映細(xì)胞壁的差異革蘭氏陰性菌壁厚，肽聚糖為主革蘭氏陽(yáng)性菌壁薄，有脂多糖和脂蛋白革蘭氏染色是用結(jié)晶紫草酸銨對(duì)細(xì)菌染色，經(jīng)酒精脫色后再用番紅復(fù)染以便觀察未能脫色的為陽(yáng)性（紫色），脫色的為陰性（紅色）革蘭氏染色陽(yáng)性大腸桿菌革蘭氏染色陰性枯草桿菌植物病原細(xì)

2、菌對(duì)鏈霉素敏感，可用于防治細(xì)菌病害培養(yǎng)性狀，繁殖，遺傳和變異培養(yǎng)性狀：固定培養(yǎng)基上菌落液體培養(yǎng)基上混濁，絮狀物，菌膜，菌環(huán)等繁殖繁殖方式為裂殖，繁殖速度為次分鐘，S形生長(zhǎng)曲線遺傳遺傳裂殖時(shí)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)均等分配到子細(xì)胞質(zhì)粒染色體DNA之外的可自我復(fù)制的環(huán)狀雙鏈DNA，常帶有與抗藥性，致病性，性結(jié)合有關(guān)的基因變異類有性作用接合：一個(gè)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)可以部分進(jìn)入另一個(gè)細(xì)胞，接受遺傳物質(zhì)的細(xì)菌在分裂繁殖時(shí)體內(nèi)的兩種遺傳物質(zhì)重新組合突變頻率低但次數(shù)多轉(zhuǎn)化：由于菌體破裂，一個(gè)細(xì)胞的遺傳物質(zhì)釋放出來(lái)，進(jìn)入另一個(gè)有親和力的同種或近似種的菌體內(nèi)，并作為后者遺傳物質(zhì)的一部分轉(zhuǎn)導(dǎo)：噬菌體侵染和在消解一種細(xì)菌時(shí)， 其DN

3、A可以攜帶寄主細(xì)胞的部分遺傳物質(zhì)，在侵染另一個(gè)細(xì)菌時(shí)，就可以將遺傳物質(zhì)帶到第二個(gè)細(xì)菌體內(nèi)作為它的遺傳物質(zhì)的一部分噬菌體：細(xì)菌的病毒，專性寄生，一般蝌蚪狀，在細(xì)菌液體培養(yǎng)時(shí)使培養(yǎng)液變清，在細(xì)菌培養(yǎng)平板上形成透明斑（噬菌斑）寄生性：絕大多數(shù)非專性寄生,極少數(shù)專性寄生鑒定方法:癥狀觀察:染色鏡檢鑒定法(革蘭氏染色法和鞭毛染色法)培養(yǎng)性狀鑒定法(菌落性狀觀察,生理生化性狀觀察)致病性測(cè)定:血清學(xué)鑒定法:核酸技術(shù):植物病原細(xì)菌的主要類群薄壁菌門重要屬:野桿菌屬Agrobacterium,也叫膿桿菌桿菌屬,革蘭氏陰性菌，鞭毛周生，引起植物組織腫瘤或畸形假單胞桿菌屬Pseudomonas革蘭氏陰性菌，鞭毛數(shù)

4、根，菌落白色，能產(chǎn)生熒光性色素，引起葉斑，潰瘍，果斑黃單胞桿菌屬Xanthomonas革蘭氏陰性菌，鞭毛根，菌落黃色，能產(chǎn)生非水溶性黃色色素，柑橘潰瘍病,核桃黑斑病歐氏桿菌屬Erwina革蘭氏陰性菌，鞭毛周生，引起植物組織腐爛或萎焉厚壁菌門棒桿菌屬Gorynebacterium（Clavibacter）革蘭氏陽(yáng)性菌，多數(shù)無(wú)鞭毛軟壁菌門植原體屬（Phytomonas）引起的病狀很象病毒病的癥狀，主要是黃化叢枝癥狀以前放在病毒病中，后來(lái)發(fā)現(xiàn)有些病可用四環(huán)素治療，在電鏡下可看到啞鈴狀類似于菌原體的生物體，改成類菌原體，近年來(lái)將其歸到植原體屬中，引起桑的萎縮病，造成節(jié)尖縮短，叢枝，縮葉，黃化；泡桐叢枝

5、病：叢枝，花果變枝葉，黃化，有傳染性螺原體屬（Spiroplasma）菌體的基本形態(tài)為螺旋形繁殖時(shí)可產(chǎn)生分支，分支也螺旋形引起柑橘僵化病（S.citri）節(jié)間變短，縮小，叢生枝或叢芽樹皮增厚，植株矮化，并且全年可開花，但結(jié)果小而少，多畸形，易脫落可以人工培養(yǎng)，在培養(yǎng)基上形成“荷包蛋”狀菌落油橄欖腫瘤病Pseudomonas假單胞桿菌屬楊屬柳屬山楂屬果樹冠癭病Agrobacterium（野桿菌屬）根瘤根部小木瘤病原細(xì)菌柑橘潰瘍病Xanthomonas cestri pv.citri (Hasse)黃單胞桿菌屬X.citri同物異名癥狀病原細(xì)菌病害的癥狀 侵染循環(huán)和防治癥狀斑點(diǎn)潰瘍萎焉侵染循環(huán)植物

6、病原細(xì)菌從傷口侵入,有的從自然孔口侵入寄生性弱的細(xì)菌一般都是從傷口侵入寄生性強(qiáng)的細(xì)菌從傷口和自然孔口都能侵入假單胞桿菌屬和黃單胞桿菌屬的細(xì)菌引致葉斑病, 一般是從自然孔口侵入棒形桿菌屬、歐氏桿菌屬和土壤桿菌屬的細(xì)菌引致萎蔫、腐爛和瘤腫, 多半是從傷口侵入有多次再侵染的機(jī)會(huì)在自然條件,傳播靠雨水濺灑作用,故傳播距離不會(huì)很遠(yuǎn)帶菌的種苗是細(xì)菌病害傳染的重要來(lái)源昆蟲介體也可傳播細(xì)菌工具傳播侵染來(lái)源細(xì)菌在受害苗木內(nèi)越冬,成為初侵染來(lái)源種子和無(wú)性繁殖器官：帶菌種苗是最重要的初侵入來(lái)源，帶菌種苗調(diào)運(yùn)可遠(yuǎn)距離傳播病殘?bào)w：植物病原細(xì)菌可以在病株殘余組織中長(zhǎng)期存活，也是重要的初侵染來(lái)源土壤：主要存活于土壤中的作物

7、殘余組織雜草和其他作物：相同寄主范圍的作物昆蟲介體：玉米細(xì)菌性萎蔫病菌可以在玉米葉甲體內(nèi)越冬，成為初侵染來(lái)源防治方法作好種苗消毒和清除植物病死殘?bào)w用抗生素效果較好防止造成傷口和及時(shí)保護(hù)傷口,在防治上特別重要寄生性種子植物寄生性種子植物的種類主要有桑寄生科(Loranthaceae)菟絲子科(Cuscutaceae)列當(dāng)科(Orobanchaceae) 野菰蛇菰科（Balanophoraceae）其中菟絲子和列當(dāng)是對(duì)外檢疫對(duì)象寄生性種子植物的寄生特點(diǎn)寄生部位:莖寄生(地上部分的莖):桑寄生和菟絲子根寄生(地下部分的根):列當(dāng)和野菰對(duì)寄主的依賴程度半寄生:含葉綠素,其吸盤的導(dǎo)管與寄主導(dǎo)管相連,如桑

8、寄生全寄生:不含葉綠素,其吸盤的導(dǎo)管和篩管分別與寄主的導(dǎo)管和篩管相連,如菟絲子,列當(dāng)和野菰菟絲子害種子萌發(fā)到纏繞寄主的過程菟絲子的莖和果實(shí)枝條被害狀寄主和菟絲子莖切面,示菟絲子吸器伸入寄主皮層槲寄生油杉寄生害 列當(dāng)危害番茄蛇菰科Balanophoraceae 雙子葉植物，19屬，約120種，分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)，中國(guó)只有 蛇菰屬Balanophora 鎖陽(yáng)屬Cynomorium 雙柱蛇菰屬 Rhopalocemis 3屬17種，產(chǎn)中南部至西南 一年生或多年生、肉質(zhì)草本，寄生于根上 無(wú)葉綠素和氣孔，花單性，很少兩性，密集成一個(gè)單性或兩性的花序野菰野菰，又名蔗寄生一年生寄生草本植物，整個(gè)列當(dāng)科都

9、是營(yíng)寄生的植物，南方最常見的是這種莖基部分枝，地上不分枝。葉退化成鱗片狀，全株肉色枝頂開花，萼佛焰苞狀，冠二唇形，紫紅色，黃白色地下根常附于禾本科寄生植物全株藥用，具清熱解毒，消腫功效油杉矮槲寄生發(fā)育循環(huán)圖越冬場(chǎng)所菟絲子種子比寄主植物的種子成熟早、萌發(fā)晚種子在土內(nèi)或與寄主種子一起越冬列當(dāng)靠寄主根部分泌物刺激而萌發(fā)桑寄生直接在寄主上越冬傳播小的種子靠風(fēng)傳播(菟絲子,列當(dāng))大的種子靠鳥類傳播(桑寄生) 防治方法:檢疫輪作手工拔除(砍除)噴灑除草劑植物病原線蟲線蟲的形態(tài)和結(jié)構(gòu)低等動(dòng)物，屬線蟲動(dòng)物門，數(shù)量多，分布廣，受線蟲危害的癥狀與一般的病害癥狀相似，稱為線蟲病350-1000 x15-35微米，蟲

10、體細(xì)長(zhǎng)，蠕蟲形，蟲體半透明生活史寄生性卵幼蟲（齡）成蟲受精卵專性寄生，去食時(shí)排出唾液，起到致病作用，刺激細(xì)胞分裂，腫瘤，枯萎癥狀：根結(jié)，叢根，根腐，地上部分似缺素癥松材線蟲是松褐天牛傳播線蟲癥狀雄蟲雌蟲檢驗(yàn)及鑒定檢驗(yàn)方法對(duì)應(yīng)施檢疫物首先直接觀察是否存在本質(zhì)干枯、木質(zhì)部藍(lán)變和媒介昆蟲或它的棲居痕跡等癥狀，然后進(jìn)行室內(nèi)檢驗(yàn)(1)抽樣和取樣抽取有上述癥狀的部分檢疫物，數(shù)量為每批次總件數(shù)的0.5%-5.0%，但最低不得少于5件。若無(wú)明顯癥狀時(shí)可隨機(jī)抽樣在所抽取的樣木 (或樣品)上取部分樣品，或鉆取少量木屑(不得少于20g)，每樣3個(gè)重復(fù)標(biāo)號(hào)后帶回實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。必要時(shí)可將整件樣木 (或樣品)帶回備檢取樣時(shí)

11、注意選取靠近蛀道、蛹室的部位，所取樣品不得帶有樹皮(2)分離線蟲將各標(biāo)號(hào)樣品分別進(jìn)行線蟲分離分離線蟲可采用貝爾曼漏斗法或淺盤法對(duì)媒介昆蟲進(jìn)行線蟲分離時(shí)，可將其用剪刀或尖頭鑷子、解剖針等剪碎或撕碎后同樣采用上述方法進(jìn)行分離時(shí)若室溫較低(不得低于7 oC)可根據(jù)室溫將分離用水調(diào)至20-40 oC (不得超過40 oC)浸泡分離材料3-4h線蟲游離出一定數(shù)量后即可鏡檢(一般需經(jīng)24小時(shí)后鏡檢) 貝爾曼 (Baermann)漏斗法將漏斗末端接一段長(zhǎng)約10cm乳膠管在乳膠管上裝一止水夾剪大小適當(dāng)紗布兩層鋪在漏斗上將樣段去皮劈成長(zhǎng)約3-4cm細(xì)條,約取10 g (或木屑)置于漏斗上的紗布中，紗布四角向中間

12、蓋上分離材料，然后注入清水浸沒注入清水后要注意使水充滿漏斗和下面的乳膠管，不要產(chǎn)生空隙 用培養(yǎng)皿在漏斗末端接取線蟲分離液10ml鏡檢貝爾曼漏斗法線蟲分離裝置圖淺盤法淺盤分離裝置由兩只不銹鋼淺盤組成口徑略小的一只底部為粗網(wǎng)篩，放在另一只淺盤上面將兩層紗布打濕鋪于篩盤上，把樣品劈碎 (或鉆取的木屑)置于篩盤的紗布上慢饅注人清水，使水浸沒樣品分離結(jié)束后,移去篩盤，把大盤內(nèi)的分離液集中于小燒杯內(nèi)小燒杯內(nèi)的線蟲分離液可通過自然沉降或離心機(jī)(1500轉(zhuǎn)/min，離心2-3min)濃縮至適宜的量，以便鏡檢(3)鏡檢將各標(biāo)號(hào)盛有線蟲分離液的培養(yǎng)皿置于解剖鏡下觀察，先確認(rèn)有無(wú)線蟲對(duì)有線蟲的樣品進(jìn)行活體鏡檢，觀察

13、它的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)選擇幾條成熟、特征易觀察的線蟲，用針或吸管移至載玻片上的水滴中使之沉底將此載玻片在酒精燈火焰上方往返幾次約5-6秒至蟲體突然伸直時(shí)停止加蓋玻片后在顯微鏡下觀察根據(jù)形態(tài)特征予以初步鑒別，以確定是否需作進(jìn)一步的鑒定 1.病原鑒定線蟲培養(yǎng):鑒定需要相當(dāng)數(shù)量的雌、雄成蟲，但在檢驗(yàn)時(shí)分離到的線蟲多是處于休眠階段的分散型3齡蟲（L）;有時(shí)雖可見雌雄成蟲，但數(shù)量較少?gòu)拿浇槔ハx分離到的線蟲則只能是被稱為休眠幼蟲(DL)的分散型4齡蟲，因此，需將上述情況的線蟲進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得大量雌雄成蟲供鑒定真菌上的單異活體培養(yǎng)通常用于培養(yǎng)松材線蟲的真菌為灰葡萄孢(Botrytis cinerea)多毛孢(Pe

14、stalotia sp.)鐮刀菌(Fusarium sp.)培養(yǎng)松材線蟲將真菌菌種接至馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)平板或試管斜面上在25 oC條件下經(jīng)過4-5d待菌絲鋪滿平板或斜面后將經(jīng)過表面消毒的線蟲用吸管接到菌絲上28 oC條件下培養(yǎng)10-15d即可繁殖出大量線蟲用少量清水將線蟲充分洗至小燒杯內(nèi)備用 樣木保溫、保濕培養(yǎng)將樣木劈開、鋸成小段，置于燒杯中加少量清水，使木段下端浸在水中，木段上端用濕紗布覆蓋在26 oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-4d倒取杯底水液，亦可獲得較多的雌、雄成蟲 接種線蟲的表面消毒經(jīng)分離后獲得的線蟲懸浮液用1500轉(zhuǎn)/min離心2-3min濃縮至離心管底部吸去上清液，用無(wú)菌滴管將底部線蟲液約2ml移至另一無(wú)菌離心管內(nèi)加 入2ml雙倍濃度的消毒液，輕輕振蕩混勻一定時(shí)