機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)教學(xué)課件：第7次課 紅細(xì)胞滲透脆性觀察-溶血與藥物溶血反應(yīng)-血型鑒定

1、節(jié)次：機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué) 第7次課內(nèi)容：紅細(xì)胞滲透脆性觀察-溶血與藥物溶血反應(yīng)-血型鑒定學(xué)時(shí)：4h課程信息紅細(xì)胞滲透脆性觀察前言紅細(xì)胞膜允許一些脂溶性物質(zhì)，如O2和CO2，及水分子自由通透。正常紅細(xì)胞置于不同濃度NaCl溶液中時(shí)，在等滲溶液中紅細(xì)胞形態(tài)與大小不變；在滲透壓遞減的一系列溶液中，紅細(xì)胞逐漸膨大以至破裂溶解。前言對(duì)低滲鹽溶液抵抗力最小的紅細(xì)胞，最早出現(xiàn)溶血，被認(rèn)為其具有最大滲透脆性。反之，滲透脆性最小的紅細(xì)胞，對(duì)低滲鹽溶液有最大抵抗力，最后出現(xiàn)溶血。紅細(xì)胞最小和最大滲透抵抗力分別用開始出現(xiàn)溶血與剛達(dá)到完全溶血時(shí)其所處的NaCl溶液的濃度來表示。 目的測(cè)試紅細(xì)胞的滲透脆性，加深理解紅細(xì)胞的生理

2、特性對(duì)于實(shí)現(xiàn)其正常功能的重要意義。 材料與方法動(dòng)物 健康家兔、雌雄不拘。 藥品與試劑 0.9NaCl溶液， 蒸餾水 。裝置和器材： 20ml注射器、10ml試管（4個(gè)）、20ml試管（2個(gè)）、試管架6個(gè)，小試管10支，三角瓶、硅膠刷、滴管、離心機(jī)、50ml量桶、吸耳球。 材料與方法心臟采血兔子仰臥在手術(shù)臺(tái)上，用手觸摸心前區(qū)搏動(dòng)最明顯的地方，直接用20ml注射器在胸骨左側(cè)23mm與第三肋間隙處垂直進(jìn)針，迅速抽出1520ml血液并放入三角瓶中，用硅膠刷輕度快速攪動(dòng)血液以刺激凝血機(jī)制，35分鐘后拿出硅膠刷。材料與方法2紅細(xì)胞懸液的配制生理鹽水稀釋后以20002500r/min離心5分鐘，吸去液體成分

3、，再加生理鹽水混勻、離心。第三次離心后用滴管輕輕吸去上清夜，得到紅細(xì)胞。用吸管取2ml的血細(xì)胞加生理鹽水至100ml，即得到2的紅細(xì)胞懸液。 滲透脆性實(shí)驗(yàn)：將10支小試管按110順序編號(hào)，并排列在試管架上，按照表7-1所示，加入不同量的2紅細(xì)胞懸液和蒸餾水，并迅速用拇指封住管口，輕輕緩慢顛倒12次，混勻，在室溫下放置4060分鐘或2000 2500r/min離心3分鐘觀察結(jié)果，尋找最大滲透脆性和最小滲透脆性。表7-1 低滲鹽溶液配制過程結(jié)果 1試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色，上層為清淡無色或極淡黃色，表示無溶血。 2試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色，上層呈透明紅色，表示不完全（部分）溶血。 3試管內(nèi)液體不分

4、層，完全變成透明紅色，管底有紅細(xì)胞膜沉積，表示完全溶血。【注意事項(xiàng)】吸管不能混用。吸取溶液時(shí)必須仔細(xì)觀察吸管的刻度，做到準(zhǔn)確無誤。試管中加入紅細(xì)胞懸液后混勻時(shí)，不可用力快速振蕩，以免人為造成紅細(xì)胞破裂。觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)勿將試管從試管架上拿出，應(yīng)水平端起試管架進(jìn)行觀察。溶血與藥物溶血反應(yīng) 前言溶血是指紅細(xì)胞破裂、溶解的一種現(xiàn)象，某些藥物，尤其是注射劑的毒副作用之一是引起紅細(xì)胞膜破裂、造成溶血反應(yīng); 在新藥研發(fā)或藥品生產(chǎn)中，都需要對(duì)注射劑藥品進(jìn)行藥物溶血實(shí)驗(yàn)測(cè)定。 目的通過觀察供試藥品是否引起溶血反應(yīng)來了解藥物制劑的安全性。 材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康家兔，體重2.02.5kg ，雌雄不拘。 試劑和藥

5、品 蒸餾水、生理鹽水、供試藥品。實(shí)驗(yàn)器材 離心機(jī)，水浴鍋，試管，試管架，離心管，吸管，小燒杯，竹簽，注射器。表7-2 藥品溶血反應(yīng)觀察表結(jié)果觀察試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色，上層為清淡無色或極淡黃色，表示無溶血； 試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色，上層呈透明紅色，表示部分溶血； 試管內(nèi)液體完全變成透明紅色，管底有紅細(xì)胞膜沉積，表示完全溶血； 雖無溶血，但紅細(xì)胞彼此粘連，搖動(dòng)后不能分散，表示出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。ABO血型鑒定 前言血型鑒定是將單克隆抗A抗體和抗B抗體與受試者紅細(xì)胞分別混合，觀察有無凝集反應(yīng)，從而推斷出受試者紅細(xì)胞膜上凝集原的有無及類型，確定受試者的血型。臨床輸血時(shí)，可因血型不合而引起紅細(xì)胞凝集，

6、從而使紅細(xì)胞的功能喪失，危及病人的生命。實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜BO血型鑒定的方法，充分認(rèn)識(shí)輸血時(shí)血型不合所造成的嚴(yán)重后果。 材料對(duì)象 人。試劑和藥品 抗A抗體，抗B抗體，生理鹽水裝置和器材 采血針，玻片，牙簽，75酒精棉球，干棉球，碘酒棉球。實(shí)驗(yàn)方法在玻片的兩端分別滴抗A抗體、抗B抗體各一滴，并進(jìn)行標(biāo)記。用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球消毒后,用采血針刺破皮膚,輕擠少量血液。用潔凈竹簽兩端各蘸取少量血液，分別加入兩種抗體中，并用牙簽輕輕攪動(dòng)片刻或搖動(dòng)混勻，靜置35分鐘以上觀察。用消毒干棉球置于傷口，并按壓23分鐘。【結(jié)果觀察】先用肉眼觀察有無紅細(xì)胞凝集，可參考圖進(jìn)行判斷。如果不能作出明確判斷，可

7、在顯微鏡下進(jìn)行仔細(xì)觀察。anti-Aanti-Banti-Aanti-Banti-Aanti-BType AType BType AB Type Oanti-Aanti-B討論1為什么同一份血液中的紅細(xì)胞滲透脆性不一樣？對(duì)同一份血液而言，含有的紅細(xì)胞所處的時(shí)期不同，有新生的紅細(xì)胞，還有衰老的紅細(xì)胞，這些細(xì)胞的滲透脆性不相同，所以同一份血液中的紅細(xì)胞滲透脆性也不一樣。討論2何為紅細(xì)胞的最大脆性和最小脆性？對(duì)低滲鹽溶液抵抗力最小的紅細(xì)胞，最早出現(xiàn)溶血，被認(rèn)為其具有最大滲透脆性。反之，滲透脆性最小的紅細(xì)胞，對(duì)低滲鹽溶液有最大抵抗力，最后出現(xiàn)溶血。討論3本次試驗(yàn)對(duì)你以后的臨床工作有什么指導(dǎo)意義？在臨床工作的過程中，所有的藥物尤其是新藥開發(fā)和靜脈用藥，一定要考慮藥物對(duì)細(xì)胞膜滲透脆性的影響，防止溶血事件的發(fā)生。討論4如何鑒定并判斷出你的血型？討論5經(jīng)ABO血型鑒定后，若是同型血，是否可直接輸血？為什么？經(jīng)ABO血型鑒定后，即使是同型血，也不可以直接輸血，須考