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1、節(jié)次:機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué) 第7次課內(nèi)容:紅細(xì)胞滲透脆性觀察-溶血與藥物溶血反應(yīng)-血型鑒定學(xué)時(shí):4h課程信息紅細(xì)胞滲透脆性觀察前言紅細(xì)胞膜允許一些脂溶性物質(zhì),如O2和CO2,及水分子自由通透。正常紅細(xì)胞置于不同濃度NaCl溶液中時(shí),在等滲溶液中紅細(xì)胞形態(tài)與大小不變;在滲透壓遞減的一系列溶液中,紅細(xì)胞逐漸膨大以至破裂溶解。前言對(duì)低滲鹽溶液抵抗力最小的紅細(xì)胞,最早出現(xiàn)溶血,被認(rèn)為其具有最大滲透脆性。反之,滲透脆性最小的紅細(xì)胞,對(duì)低滲鹽溶液有最大抵抗力,最后出現(xiàn)溶血。紅細(xì)胞最小和最大滲透抵抗力分別用開始出現(xiàn)溶血與剛達(dá)到完全溶血時(shí)其所處的NaCl溶液的濃度來表示。 目的測(cè)試紅細(xì)胞的滲透脆性,加深理解紅細(xì)胞的生理
2、特性對(duì)于實(shí)現(xiàn)其正常功能的重要意義。 材料與方法動(dòng)物 健康家兔、雌雄不拘。 藥品與試劑 0.9NaCl溶液, 蒸餾水 。裝置和器材: 20ml注射器、10ml試管(4個(gè))、20ml試管(2個(gè))、試管架6個(gè),小試管10支,三角瓶、硅膠刷、滴管、離心機(jī)、50ml量桶、吸耳球。 材料與方法心臟采血兔子仰臥在手術(shù)臺(tái)上,用手觸摸心前區(qū)搏動(dòng)最明顯的地方,直接用20ml注射器在胸骨左側(cè)23mm與第三肋間隙處垂直進(jìn)針,迅速抽出1520ml血液并放入三角瓶中,用硅膠刷輕度快速攪動(dòng)血液以刺激凝血機(jī)制,35分鐘后拿出硅膠刷。材料與方法2紅細(xì)胞懸液的配制生理鹽水稀釋后以20002500r/min離心5分鐘,吸去液體成分
3、,再加生理鹽水混勻、離心。第三次離心后用滴管輕輕吸去上清夜,得到紅細(xì)胞。用吸管取2ml的血細(xì)胞加生理鹽水至100ml,即得到2的紅細(xì)胞懸液。 滲透脆性實(shí)驗(yàn):將10支小試管按110順序編號(hào),并排列在試管架上,按照表7-1所示,加入不同量的2紅細(xì)胞懸液和蒸餾水,并迅速用拇指封住管口,輕輕緩慢顛倒12次,混勻,在室溫下放置4060分鐘或2000 2500r/min離心3分鐘觀察結(jié)果,尋找最大滲透脆性和最小滲透脆性。表7-1 低滲鹽溶液配制過程結(jié)果 1試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色,上層為清淡無色或極淡黃色,表示無溶血。 2試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色,上層呈透明紅色,表示不完全(部分)溶血。 3試管內(nèi)液體不分
4、層,完全變成透明紅色,管底有紅細(xì)胞膜沉積,表示完全溶血。【注意事項(xiàng)】吸管不能混用。吸取溶液時(shí)必須仔細(xì)觀察吸管的刻度,做到準(zhǔn)確無誤。試管中加入紅細(xì)胞懸液后混勻時(shí),不可用力快速振蕩,以免人為造成紅細(xì)胞破裂。觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)勿將試管從試管架上拿出,應(yīng)水平端起試管架進(jìn)行觀察。溶血與藥物溶血反應(yīng) 前言溶血是指紅細(xì)胞破裂、溶解的一種現(xiàn)象,某些藥物,尤其是注射劑的毒副作用之一是引起紅細(xì)胞膜破裂、造成溶血反應(yīng); 在新藥研發(fā)或藥品生產(chǎn)中,都需要對(duì)注射劑藥品進(jìn)行藥物溶血實(shí)驗(yàn)測(cè)定。 目的通過觀察供試藥品是否引起溶血反應(yīng)來了解藥物制劑的安全性。 材料與方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康家兔,體重2.02.5kg ,雌雄不拘。 試劑和藥
5、品 蒸餾水、生理鹽水、供試藥品。實(shí)驗(yàn)器材 離心機(jī),水浴鍋,試管,試管架,離心管,吸管,小燒杯,竹簽,注射器。表7-2 藥品溶血反應(yīng)觀察表結(jié)果觀察試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色,上層為清淡無色或極淡黃色,表示無溶血; 試管內(nèi)液體下層呈混濁紅色,上層呈透明紅色,表示部分溶血; 試管內(nèi)液體完全變成透明紅色,管底有紅細(xì)胞膜沉積,表示完全溶血; 雖無溶血,但紅細(xì)胞彼此粘連,搖動(dòng)后不能分散,表示出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。ABO血型鑒定 前言血型鑒定是將單克隆抗A抗體和抗B抗體與受試者紅細(xì)胞分別混合,觀察有無凝集反應(yīng),從而推斷出受試者紅細(xì)胞膜上凝集原的有無及類型,確定受試者的血型。臨床輸血時(shí),可因血型不合而引起紅細(xì)胞凝集,
6、從而使紅細(xì)胞的功能喪失,危及病人的生命。實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜BO血型鑒定的方法,充分認(rèn)識(shí)輸血時(shí)血型不合所造成的嚴(yán)重后果。 材料對(duì)象 人。試劑和藥品 抗A抗體,抗B抗體,生理鹽水裝置和器材 采血針,玻片,牙簽,75酒精棉球,干棉球,碘酒棉球。實(shí)驗(yàn)方法在玻片的兩端分別滴抗A抗體、抗B抗體各一滴,并進(jìn)行標(biāo)記。用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球消毒后,用采血針刺破皮膚,輕擠少量血液。用潔凈竹簽兩端各蘸取少量血液,分別加入兩種抗體中,并用牙簽輕輕攪動(dòng)片刻或搖動(dòng)混勻,靜置35分鐘以上觀察。用消毒干棉球置于傷口,并按壓23分鐘。【結(jié)果觀察】先用肉眼觀察有無紅細(xì)胞凝集,可參考圖進(jìn)行判斷。如果不能作出明確判斷,可
7、在顯微鏡下進(jìn)行仔細(xì)觀察。anti-Aanti-Banti-Aanti-Banti-Aanti-BType AType BType AB Type Oanti-Aanti-B討論1為什么同一份血液中的紅細(xì)胞滲透脆性不一樣?對(duì)同一份血液而言,含有的紅細(xì)胞所處的時(shí)期不同,有新生的紅細(xì)胞,還有衰老的紅細(xì)胞,這些細(xì)胞的滲透脆性不相同,所以同一份血液中的紅細(xì)胞滲透脆性也不一樣。討論2何為紅細(xì)胞的最大脆性和最小脆性?對(duì)低滲鹽溶液抵抗力最小的紅細(xì)胞,最早出現(xiàn)溶血,被認(rèn)為其具有最大滲透脆性。反之,滲透脆性最小的紅細(xì)胞,對(duì)低滲鹽溶液有最大抵抗力,最后出現(xiàn)溶血。討論3本次試驗(yàn)對(duì)你以后的臨床工作有什么指導(dǎo)意義?在臨床工作的過程中,所有的藥物尤其是新藥開發(fā)和靜脈用藥,一定要考慮藥物對(duì)細(xì)胞膜滲透脆性的影響,防止溶血事件的發(fā)生。討論4如何鑒定并判斷出你的血型?討論5經(jīng)ABO血型鑒定后,若是同型血,是否可直接輸血?為什么?經(jīng)ABO血型鑒定后,即使是同型血,也不可以直接輸血,須考
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