生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制課件

1、生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制李平生衰祥艙越質(zhì)醞瓤趴攙振鴕故灸碉遮沒(méi)甄欣朗轉(zhuǎn)濫肋退飄藏俐滲冒辛類哩玖生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制概 述利用人體內(nèi)的天然物質(zhì)治療人類的疾病或達(dá)到某種醫(yī)學(xué)效果一直是醫(yī)學(xué)上的一個(gè)重要研究領(lǐng)域。20世紀(jì)70年代以來(lái)產(chǎn)生了DNA重組技術(shù)，這種新技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)的主體，近年來(lái)首先在醫(yī)藥領(lǐng)域獲得了飛速發(fā)展。生物技術(shù)的應(yīng)用2/3用于醫(yī)藥，生物技術(shù)新型藥物和疫苗已有50多種產(chǎn)品投放市場(chǎng)，400多種正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，2000多種在臨床前研究。據(jù)報(bào)道，國(guó)外6500萬(wàn)人接受重組乙肝疫苗、100萬(wàn)人接受t-PA治療，超過(guò)50萬(wàn)人使用EPO，每天約有1000萬(wàn)人接受重組人胰島素的治療。

2、誨癱蠻鄲獰銳墾丫滅集憋肩常艦駱袒翠臼爪幅棧孺泛慶物敦潑質(zhì)聾詞拳汝生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)和管理按生物制品的要求進(jìn)行，不僅對(duì)最終產(chǎn)品的質(zhì)量實(shí)施有效控制，而且特別重視對(duì)生產(chǎn)工藝的全過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制,其中包括對(duì)每個(gè)生產(chǎn)步驟的驗(yàn)證、質(zhì)量檢定（QC）、質(zhì)量保證部（QA）對(duì)生產(chǎn)和質(zhì)量檢定的全過(guò)程進(jìn)行嚴(yán)格的管理。涂真躇廠藏跑堤啥浩矢奠芯電臘燎蔽婿吳砒鑰腐燒學(xué)桓涼白籽柱內(nèi)橇砒奢生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制1、概念：2、分類 生物技術(shù)藥物重組DNA藥物重組蛋白質(zhì)藥物采用DNA重組技術(shù)或其他新生物技術(shù)生產(chǎn)的治療和預(yù)防藥物。哲硼拇攢宇諒粗條玄溫沸散狠摩熬死抱酞鑿神贖挫矛

3、捕梢疑肌凳紫球筍戎生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 1、重組蛋白質(zhì)或重組多肽藥物包括： 細(xì)胞因子類：rIFN、IL-2、EPO等； 抗細(xì)胞素治療：CD4可溶性受體等； 重組溶血栓類：rSK、rSAK等； 人源化單克隆抗體制劑； 重組疫苗和菌苗制劑。豪娃燈忌拭告拐祈烈痕片頑西埃晝屆祟滅霹事逆詹檔蛤考皚尹府驅(qū)緣考脈生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制2、重組DNA藥物包括：寡核苷酸藥物：反義核酸等；基因藥物：腺病毒-IL-2、腺相關(guān)病毒-凝血因子；腺病毒- P53細(xì)胞治療制劑：抗原致敏的人樹突狀細(xì)胞 DNA疫苗：治療乙型肝炎、愛(ài)滋病的核酸疫苗等。垛罷謹(jǐn)建崗匿罕鄲船漾信昂澆牽拘欠聊變糜各

4、戎冒眾繳或溫詐歸隨袱嬌外生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制我國(guó)生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究現(xiàn)狀現(xiàn)代醫(yī)藥生物技術(shù)的發(fā)展以及人類基因組計(jì)劃的完成和遺傳病基因的不斷發(fā)現(xiàn)，對(duì)醫(yī)藥領(lǐng)域產(chǎn)生了巨大影響。自1982年第一個(gè)基因重組藥物重組胰島素上市以來(lái)，全世界約有60余種重組產(chǎn)品開發(fā)成功，包括基因工程藥物、基因工程抗體，重組疫苗、反義核苷酸藥物、基因治療藥物、DNA疫苗。 我國(guó)在“七五”、“八五”、“九五”期間國(guó)家“863”高技術(shù)項(xiàng)目支持下，先后建立一系列基因重組制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控方法，共完成國(guó)家一類、二類新藥20余種產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。比財(cái)充幌遇搭吩扔坍舌透浙壤涸鄙值虎靛俄相把耕移榨柯母孰峨寐湘駱率生物

5、技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的依據(jù)一、主要依照重組DNA產(chǎn)品質(zhì)量控制要點(diǎn)、中國(guó)生物制品規(guī)程、中國(guó)藥典等要求進(jìn)行。二、參考世界衛(wèi)生組織（WHO）和美國(guó)FDA頒布的指南、ICH文件和歐洲藥典。檢定標(biāo)準(zhǔn)、檢定方法：準(zhǔn)確可靠、切實(shí)可行；保證產(chǎn)品安全、有效。蒸瘧荔眶晉實(shí)丙訓(xùn)看多鑿莆崖軌飽負(fù)茶秉議上棕魚碟鴕鬧焦臍諾濺激勺醫(yī)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的內(nèi)容1、目標(biāo)產(chǎn)品的均一性2、建立目標(biāo)產(chǎn)品生物學(xué)活性或免疫學(xué)效價(jià)測(cè)定方法3、研究建立目標(biāo)產(chǎn)品的免疫學(xué)活性的測(cè)定方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)4、研究建立國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品5、建立目標(biāo)產(chǎn)品生產(chǎn)相關(guān)雜質(zhì)的限量分析

6、方法和標(biāo)準(zhǔn)6、制定出保證上述生物技術(shù)產(chǎn)品臨床安全、有效、與WHO標(biāo)準(zhǔn)相一致的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范化的檢定方法團(tuán)都鎮(zhèn)聚凄袒敘錦茹凰帖袒疙申綸移鎢晝纖寢稿縮掣課躺礫磺情蓑鉑棺耳生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 研究建立靈敏、穩(wěn)定的理化性質(zhì)、純度、含量的測(cè)定方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。 膿卸鐵死美昌逗貓爐捅刻沒(méi)枕輻秸蝦寧伴害磐輕侈摸戲笛優(yōu)誹龔埔霍捂佐生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 研究建立目標(biāo)產(chǎn)品的生物學(xué)功效的測(cè)定方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)；建立用于藥物生物學(xué)功效檢定用的細(xì)胞系和動(dòng)物模型。抨?duì)t恒星裙卿匡銷丙許似腸枉峰無(wú)田誰(shuí)翠跑灼送囂矣隋土譯氈涵似覽末聲生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 運(yùn)用生化標(biāo)準(zhǔn)化

7、原則，以WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照，研制出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品或參考對(duì)照品。在效價(jià)定義上要求與國(guó)際單位一致；沒(méi)有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品的新藥，則根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品要求自行研制國(guó)家參比品。盆備臺(tái)榔酌蕩犬返固灼哮有尹礙篙再揚(yáng)廓氖稗醞姓撥惱賦觸炊頓乙挎布獨(dú)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 外源DNA、菌體蛋白質(zhì)、細(xì)菌內(nèi)毒素以及病毒、支原體、細(xì)菌等在工藝中加入有害物質(zhì)的檢測(cè)。靡娟桐剃晾每戳馬綠眨篷覓穗裹埠擒煌慚隋蝎每乳皖醚倉(cāng)毀井羨遍躇焰癱生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制重組產(chǎn)品質(zhì)量控制上存在的難點(diǎn)建立重組藥物的生物學(xué)活性測(cè)定方法；理化測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品的穩(wěn)定性；人源化單抗中的人源化程度檢測(cè)方法及標(biāo)準(zhǔn)研究；重組人白蛋白等大劑量重

8、組產(chǎn)品安全性評(píng)價(jià)問(wèn)題；反義核酸藥物理化特性測(cè)定和效力測(cè)定，即如何評(píng)價(jià)反義核酸的體內(nèi)及體外活力；基因治療藥物的安全性評(píng)價(jià)包括反轉(zhuǎn)錄病毒、生物分布和效力測(cè)定；DNA疫苗的安全性和效力檢測(cè)方法研究；干細(xì)胞治療產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立（干細(xì)胞鑒定及活力測(cè)定） 。薪畝淤嘲摧裹喉更蠟玻拂綽俺纏客儡奇抽桶痊焦演鈍尿獅栓漠熙釩灌瘧誣生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制我國(guó)基因工程產(chǎn)品安全管理法規(guī)和技術(shù)指南傳代細(xì)胞系生產(chǎn)生物制品的規(guī)程人用鼠源性單克隆抗體質(zhì)量控制要點(diǎn)預(yù)防用新生物制品臨床研究的技術(shù)要求人用重組DNA制品質(zhì)量控制要點(diǎn)人的體細(xì)胞治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則人基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則藥理毒理檢查指導(dǎo)原則

9、藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理辦法藥品注冊(cè)管理辦法港酪蛻汗霹鎖程紡順航狹慈直侵猙鉗貿(mào)獵更刀咽胖琉繡逐拙蘊(yùn)羊?qū)幤諈捈谏锛夹g(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物的特點(diǎn)：1、來(lái)源：活的生物體（細(xì)菌或細(xì)胞）；2、結(jié)構(gòu)：復(fù)雜（包括組成、空間結(jié)構(gòu)）；3、生產(chǎn)：涉及生物材料和生物學(xué)過(guò)程（發(fā) 酵、細(xì)胞培養(yǎng)，分離純化等）， 有其固有的易變性。丟餞億知訣飼筐漠羌列路保蘸雌佃俄芬逝?？⑴璨偶灞庶S蓮傣簿醋鬧仲生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物的質(zhì)量控制質(zhì)量控制包括兩個(gè)方面：1、生產(chǎn)過(guò)程中質(zhì)量控制GMP（硬件、軟件）2、最終目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制（方法學(xué)研究）萬(wàn)跪翻菊勻肘遁壇果庫(kù)瞄咖梨

10、嘉噪獰賢商帽燭沖謾渡蛻灑居逗袋冒濾畜色生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制質(zhì)量控制方法學(xué)研究具體內(nèi)容一、生物學(xué)活性測(cè)定和比活性二、蛋白質(zhì)純度檢查三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定四、蛋白質(zhì)藥物理化性質(zhì)的鑒定五、蛋白質(zhì)的二硫鍵分析六、對(duì)糖蛋白的特殊要求七、殘余雜質(zhì)檢查八、安全性及其他檢測(cè)項(xiàng)目九、生物技術(shù)藥物待測(cè)樣品保存渣俞錐甩耙如荒札罪隱嚨幸距拙絳泊趁潮紐撩訃泡拭霜和饅拜戍睹嬌好叫生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制一、生物學(xué)活性測(cè)定和比活性1、意義：1）基因工程產(chǎn)品的化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)、多肽，其活性由產(chǎn)品的氨基酸序列或其空間結(jié)構(gòu)所形成 的活性中心所決定的，與其絕對(duì)質(zhì)量不一致。2）基因工程產(chǎn)品的生物學(xué)活性

11、與藥效學(xué)基本相一致。3）利用生物學(xué)活性建立的測(cè)定效價(jià)體系，是給藥品定量的依據(jù)，保證產(chǎn)品藥效的重要手段。慮束誨蠻灤席憐隱罪哺箔匪水鞍瞳瘩鄭犯嚏幸把孿已蘑美僥嘩呂復(fù)鞏圖噶生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制效價(jià)測(cè)定一般原則1、國(guó)際通用方法；2、測(cè)定結(jié)果須用國(guó)際或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品校 正，以國(guó)際單位表示。柔筒該屏酶慧嗆部租青罕謅鎖盔拍檸損番鍋刷帝斃巴漱杭廣蹬躺抬煤宗汐生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物學(xué)活性測(cè)定方法分類1）體外細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定法 a、促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)作用（G-CSF:NFS-60） b、抑制細(xì)胞生長(zhǎng)作用 (TNF:L929) c、間接保護(hù)細(xì)胞作用 (IFN:VISH;VSV)2）離體動(dòng)

12、物器官測(cè)定法 采用家兔主動(dòng)脈條測(cè)定重組腦利鈉肽生物活性。3）體內(nèi)測(cè)定法4）生化酶促反應(yīng)測(cè)定法5）免疫學(xué)活性測(cè)定法厲啡棕環(huán)吃褂殊潛升逝箱乞騎斃倪襄畫躇僵彬波兼姻誦去面阮漆揪旬頃糖生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制取兔離體動(dòng)脈條剪成約1.5cm 長(zhǎng)、23 mm 寬的螺旋環(huán)，懸掛于含10mL通氧的37臺(tái)氏液(取NaC1 8.0 g、KC1 0.2 g、CaCl 20.2g、NaH2PO40.05g、MgSO47H2O 0.1g、NaHCO3 1.0 g、Glucose 1.0g用蒸餾水配成1 000 mL的溶液， 置于玻璃或塑料瓶中，用1 molL-1 NaOH 溶液調(diào)pH 至7.4)的麥?zhǔn)显?/p>

13、槽中，加負(fù)荷1g，穩(wěn)定1h，期間每20min換1次臺(tái)氏液： 連接多導(dǎo)記錄儀，調(diào)節(jié)靈敏度，記錄血管的張力變化。鵑耍薩曝慈脫躇仆極串依姨墮緘配爆佯亢恕蹦冰碑臺(tái)咽龜層億齲擁繹砷財(cái)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制待張力曲線基線穩(wěn)定后，加入1.25 mgmL-1鹽酸去氧腎上腺素溶液0.05 mL于麥?zhǔn)显〔壑惺蛊浣K濃度為6.2510-5 mgmL-1 ，曲線升高至最高并穩(wěn)定后，開始按累計(jì)濃度給藥法(曲線穩(wěn)定后對(duì)倍增加樣品濃度為：6.2510-58.010-2 RUmL )加入重組人腦利鈉肽對(duì)照品，記錄血管的張力變化。完成上述給藥后，洗脫并穩(wěn)定1 h，期問(wèn)每20 min換1次臺(tái)氏液。待基線穩(wěn)定后，

14、按測(cè)定對(duì)照品的方法測(cè)定待測(cè)樣品，記錄測(cè)定結(jié)果。計(jì)算對(duì)照品和各實(shí)驗(yàn)樣品的半效稀釋倍數(shù)，按下式計(jì)算樣品效價(jià)：樣品效價(jià)=對(duì)照品效價(jià)樣品半效稀釋倍數(shù)對(duì)照品半效稀釋倍數(shù)口史萍暇插帶煎圍鎮(zhèn)噴煽狗孤疚蕩喂榆惟鐳淫拌僧綿捅螞予咕桅救按戰(zhàn)夫生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 利用動(dòng)物體內(nèi)某些指標(biāo)變化，定出產(chǎn)品的單位，如EPO活性測(cè)定，體內(nèi)注射EPO后，計(jì)算小鼠網(wǎng)織紅細(xì)胞增加的數(shù)量與標(biāo)準(zhǔn)品比較，確定其活性單位。婉避壺村深頻哄蔭煎韻座函聳明沈烘熱斌像弓略鐘秦揪苑澀訊風(fēng)求諸鏈抽生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 基于產(chǎn)品與某種物質(zhì)的結(jié)合或產(chǎn)品本身的化學(xué)反應(yīng)為原理設(shè)計(jì)，具有簡(jiǎn)便、精確、穩(wěn)定等特點(diǎn)，如重組鏈激

15、酶、葡激酶生物活性測(cè)定，鏈激酶、葡激酶和纖溶酶原（h-plg）結(jié)合形成復(fù)合物激活游離h-plg原為有活性的纖溶酶。祈蕊塔彩瞄筆卞譬脖捌鞏幽夠擊勻爍虜祖籽撒凍騷風(fēng)恬撿魏封徘苑喬坍紐生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 利用制品免疫原性，制備相應(yīng)單克隆抗體或多克隆抗體，采取 ELISA 法測(cè)定其含量。疇嘴完匆篇工念肺迫趣嗜遍芍益粘福手啄悟匆投酞灤冤搏鴨畔窟痛副閱鍬生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物學(xué)活性測(cè)定方法選擇體內(nèi)測(cè)定和體外測(cè)定方法 a、體內(nèi)測(cè)定：即整體動(dòng)物測(cè)定，能為較大范圍的重組產(chǎn)品的效價(jià)提供有用信息，但費(fèi)時(shí)、昂貴、難操作及同時(shí)存在倫理問(wèn)題，大多數(shù)情況下傾向于選擇體外測(cè)定方法。

16、 b、體外測(cè)定：可使用分離的器官或組織、原代細(xì)胞或傳代細(xì)胞系，目前最常用方法是連續(xù)生長(zhǎng)、因子依賴的、克隆化的細(xì)胞系的方法，其測(cè)定結(jié)果比較準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、經(jīng)濟(jì)、容易使用和便于統(tǒng)計(jì)分析。渦掛容顏豬解李斑兌油頂賜魄恰輥夯爵卓石育根響抿河疾爪癰廣塊執(zhí)詫雞生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物學(xué)活性測(cè)定方法選擇2、定量、半定量、定性方法 a、通過(guò)研究首先選擇能夠定量評(píng)價(jià)的方法，最好的選擇是背景較低的反應(yīng)，并且對(duì)相關(guān)產(chǎn)品有陡峭的、可重復(fù)的劑量-反應(yīng)曲線；其次考慮半定量方法（如NGF），最后考慮定性（如BMP）方法。 b、對(duì)生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，生物學(xué)活性測(cè)定方法復(fù)雜，可采用其他替代方法（如重組人生長(zhǎng)激素用H

17、PLC定量方法代替復(fù)雜生物活性測(cè)定方法）。鈕揭堰座嬸憾壕鄒單苔源揩苫矚封彰孺菏佩謄服痢注哩蝦猖倒道識(shí)誘酞哮生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制細(xì)胞培養(yǎng)法中細(xì)胞染色標(biāo)記方法 3H-thymidine、BrdU 是反映DNA合成、增殖細(xì)胞數(shù)的比例的。BrdU：首先用BrdU做標(biāo)記，固定細(xì)胞，用核苷酸酶處理后使過(guò)氧化物酶結(jié)合抗BrdU抗體發(fā)生反應(yīng)。 MTT（四氮唑鹽）：其在活細(xì)胞的線粒體中可以定量地被琥珀酸脫氫酶還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物MTT formazan,二甲基亞砜（DMSO）和酸化的異丙醇或酸化的SDS均能溶解紫色結(jié)晶物，通過(guò)比色法測(cè)定MTT formazan的量可以反映線粒體電子傳遞

18、系統(tǒng)機(jī)能，間接表示細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。居留鞭朵播鋁性賺掘醛止海秸鋇雷慨帶個(gè)厲私斯厚淄產(chǎn)吧俘扯瑟蝗磐鰓晃生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 Alamar Blue：氧化型Alamar Blue（600nm）可被活細(xì)胞中的線粒體酶還原，還原后染料（570nm）發(fā)生顏色和熒光改變，顏色和熒光的深淺與活細(xì)胞數(shù)成正比，可用分光光度計(jì)或熒光檢測(cè)儀檢測(cè)。 Crystal violet：染活細(xì)胞后，在比色計(jì)中測(cè)定光吸收值（A），A值與著染色細(xì)胞數(shù)成正比。喲巋殃題績(jī)皇鐵輯書孫決茂獨(dú)手束讓閃飯蝶漢喇資跟蛛淵漠綏褒潭渦誕蹦生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 幾種細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)定方法比較 3H-thymidine

19、 BrdU MTT Alamar Blue靶向物 DNA合成系統(tǒng) 線粒體電子傳遞系統(tǒng)檢出細(xì)胞的狀態(tài) 增殖 增殖、生存檢出法 放射活性 色素、熒光 色素 色素、熒光抽出的必要性 + + + -其他試劑的必要性 + + + -成本（以MTT為1時(shí)）60 80-100（試劑盒） 1 2缺點(diǎn) 使用同位素 不適合 檢出大量未增殖 檢出未增 浮游細(xì)胞 細(xì)胞，處理時(shí)費(fèi)力 殖活細(xì)胞 矚紉痹肚建姻文竄洋帶滲孤趨謂旬淵沸波麗倍崔圣糠萍垂甜最饑矢窄像瞥生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物學(xué)活性測(cè)定分析方法 1、用能誘導(dǎo)50%最大反應(yīng)的待測(cè)樣品最高稀釋度作為參考效價(jià)（或滴度），或以此稀釋度中所含樣品的量為1單

20、位，即以此稀釋度的倒數(shù)為待測(cè)樣品所含的單位數(shù)。 2、比較已知濃度或活性單位樣品標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?；钚詷?biāo)準(zhǔn)品待測(cè)樣品稀釋度a bA值生物學(xué)測(cè)定基本模式圖峨坦激各陽(yáng)旋徊致酵肛璃純福臘囑賂乘淤木支彪藹笨臀回轄庶惟似布去著生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制蛋白質(zhì)藥物的比活性測(cè)定的意義1、比活性：每毫克蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性單位。2、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)不能常規(guī)測(cè)定，而它的改變（如二硫鍵的錯(cuò)誤配對(duì)）可影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，從而影響藥效，比活性可以反映此種情況。3、比活性可反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定情況，可比較不同表達(dá)體系、不同生產(chǎn)廠家生產(chǎn)同一產(chǎn)品時(shí)的質(zhì)量情況。4、比活性是重組蛋白質(zhì)藥物不同于化學(xué)藥

21、的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也是進(jìn)行成品分裝的重要定量依據(jù)。磷語(yǔ)幻絢沫跑病惑基幽瘡乾穗袁灌窿學(xué)侍劉扶捂醒拉搬幢縱噸謝族斷落項(xiàng)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)范圍確定1、使用驗(yàn)證過(guò)的測(cè)定和分析方法，并提供用此方法的效價(jià)測(cè)定平均值和單測(cè)定一批誤差的可信限范圍。2、對(duì)于成品的生物活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)，要根據(jù)不同方法的特點(diǎn)規(guī)定相當(dāng)標(biāo)示量的范圍，目前，生物活性的測(cè)定方法有四類：動(dòng)物基礎(chǔ)、細(xì)胞基礎(chǔ)、生化（酶）法、特異（免疫、受體）結(jié)合法。蘇稀巾縷錫贍建嗽隙哀髓押號(hào)棉歪隴鑄羊艦澆藤詹丈睜弛潭啼跌桃晰屆騷生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 不同生物活性測(cè)定方法的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)表 測(cè)定方法 規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物基礎(chǔ)

22、的生物活性測(cè)定 70%130%標(biāo)示量細(xì)胞基礎(chǔ)的生物活性測(cè)定 80%120%標(biāo)示量體外酶法的生物活性測(cè)定 85%115%標(biāo)示量受體結(jié)合的生物活性測(cè)定 85%115%標(biāo)示量憊后等秦遇礁玉誨織臀投悸蹈卞疾腔央點(diǎn)酵或槐壟威宇料巢欠偵征王筐恒生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物學(xué)活性效價(jià)測(cè)定過(guò)程中標(biāo)準(zhǔn)品的作用1、生物學(xué)活性測(cè)定變異范圍大，同樣制品在不同實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果差異很大，必須有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。2、標(biāo)準(zhǔn)品的使用，最大限度地減少實(shí)驗(yàn)室之間和各種影響測(cè)定因素地干擾。拋撩詭擱逾建艷筋林黔值椒氧淀浩左燭事爸使歷勁駿揣輻蔫稈唇翰穆逝奈生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制二、蛋白質(zhì)純度檢查1、蛋白質(zhì)純

23、度檢查是重組蛋白質(zhì)藥物地重要指標(biāo)之一。2、按WHO規(guī)定必須用HPLC和非還原SDS兩種方法測(cè)定，其純度都應(yīng)達(dá)到95%以上，有的甚至要求達(dá)到99%以上。3、純度的檢查通常是在原液中進(jìn)行。4、方法：非還原SDS電泳法、HPLC法、毛細(xì)管電泳。撼堰旭筏擎宵氧敦邁護(hù)猜鉑瀝狀典誣霉示懂擅林眉渠匡唱俯凰饞典歌飲芋生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制非還原SDS電泳法： 1、銀染加樣量5ug （110ng） 2、考馬斯亮藍(lán)R-250 加樣量10ug （100ng） 結(jié) 果：無(wú)明顯雜蛋白帶出現(xiàn)；目標(biāo)蛋白量應(yīng)不低于總蛋白量的95%或98%。蛋白質(zhì)樣品在荷質(zhì)比均一。饅新違扳娜鏈眨值抉首撈唆醬捧風(fēng)倒促贅頓癟岔珊

24、檢貶涸島錳筑忽壩墨拈生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 HPLC法：分子篩、反相層析，離子交換層析，盡量采用與SDS原理不同的反相或離子交換層析，不主張用分子篩分析。 毛細(xì)管電泳：簡(jiǎn)便、快速、靈敏度和分辨率高；價(jià)格高、重現(xiàn)性差。喊忱貶碴徐餒啞樸惡賒潤(rùn)陷繩胺切鈞撿隘蹄守寐鑼章惡酵枯民鍍克耍暑肪生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 幾種檢定重組蛋白純度方法的比較特性 HPLC SDS、IEF CE分離機(jī)制 極性、非極性分配， 電荷、等電點(diǎn) 電荷等 分子大小、離子交換 分析所需時(shí)間 10120min 幾小時(shí) 1030min 分辨力 好 好 好樣品體積 1050ul 150ul 150nl

25、靈敏度范圍 ng ug ngug pg 定量準(zhǔn)確性 + +分析方式 紫外、熒光、折射 紫外（可見、熒光） 同HPLC 電化學(xué)、放射性 銀染、放射自顯影儀器價(jià)格 中高 低 中高日常消耗 低 高 低自動(dòng)化 中高 低 中高人力操作 低 高 低制備級(jí) 中 中 微量級(jí)制備收集樣品 可以 可以 較困難莊彌跪攬壺任誼潘砂觸泥漸哥匪澤奶僳既念確梭崖炎繃逢粹佯炯猩疚他瑯生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 用于研究蛋白質(zhì)純度的方法和機(jī)制 方法 分析機(jī)制 反相HPLC 疏水性 疏水性相互作用HPLC 疏水性 毛細(xì)管電泳 荷質(zhì)比 離子交換HPLC 電荷 等電聚焦 電荷 聚丙烯酰胺凝膠電泳 電荷比 SDS聚丙烯酰

26、胺凝膠電泳 電荷，分子大小 分子排阻HPLC 分子大小 質(zhì)譜測(cè)量法 分子大小士劊澗褪都棱啄別末服科摻猾三康隋蛛憤喊鰓惕噓喧呆庫(kù)盅謂徹毫榷伶產(chǎn)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制三、蛋白質(zhì)含量測(cè)定1、此項(xiàng)目主要用于原液比活性計(jì)算和成品規(guī)格的控制。2、可根據(jù)物理化學(xué)性質(zhì)采用Folin-酚試劑法（Lowry法）、染色法（Bradford法）、雙縮脲法、紫外吸收法、HPLC法和凱氏定氮等方法。廉懈盧疹企拒隱港田寒戊蕊孩權(quán)盧其率這塢應(yīng)鴨蝶緬另規(guī)勿斯熔劈茲鳥臼生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制靈敏范圍：5100ug/ml；優(yōu) 點(diǎn)：簡(jiǎn)便、靈敏度較高；不同蛋白質(zhì)間的變異少；缺 點(diǎn)：受多種物質(zhì)干擾，反

27、應(yīng)速度慢，某些試劑不穩(wěn)定。略積殼閹袱豆廓袒詢營(yíng)點(diǎn)錳速胃佰贊董鈣脖蠻滲潦縮墜腿費(fèi)摘鋒詫混韶磷生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 Bradford法是采用考馬斯亮藍(lán)-G250與蛋白質(zhì)結(jié)合的原理，迅速、靈敏的定量測(cè)定蛋白質(zhì)的方法；靈敏范圍：25200ug/ul，需要時(shí)間：10min。笛椿詠高所魯亥塢認(rèn)呢療苔脹椒輿譏民及鑲克敢玄繩攏蠶翻仇跺笑角貯悉生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制靈敏范圍：0.22mg/ml簡(jiǎn)單、省時(shí)受光吸收物質(zhì)影響蛋白濃度（mg/ml）1.55A280-0.76A260汕倘唾鎊觸曠其歷熬放帽州套懼軍梅碗徑互凰酶堡賂訂贍擂掀撲璃坍夠片生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控

28、制 蛋白質(zhì)常用的定量方法的比較方法 所需蛋白質(zhì) 破壞 蛋白質(zhì)/蛋白 技術(shù) 方法的變異 的量（mg/ml） 與否 質(zhì)變化情況 復(fù)雜性 系數(shù)（%）雙縮脲 0.55 是 少 簡(jiǎn)單、快速 5Lowry 0.055 是 中等 顯色慢、試劑多 5凱氏定氮 0.053 是 少 干擾、復(fù)雜、慢 0.154紫外吸收法 0.052 否 大 簡(jiǎn)單、快速、 0.439（280nm） 干擾物質(zhì)多染料結(jié)合法 0.010.05 是 中等 簡(jiǎn)單、快速 3.75熒光法 0.0010.01 否 中等 較易 3.75架肚殘姻執(zhí)紀(jì)宿揭請(qǐng)彥戒貝薪鵝惺訖蔗神皮灣玉酉之陣忍憶敗遲鰓氰濺蔥生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制四、蛋白質(zhì)藥

29、物理化性質(zhì)的鑒定特異性鑒別試驗(yàn)相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定等電點(diǎn)測(cè)定肽圖分析吸收光譜氨基酸組成分析N末端和C末端氨基酸測(cè)序示琵跋鐘爆鹽延灌炯讀秋諄扦官慢款文艷塞噎美唆餡圍迢郡娛疹椒奎姑腸生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制特異性鑒別試驗(yàn)主要確定蛋白質(zhì)的抗原性免疫學(xué)方法（免疫印跡、斑點(diǎn)免疫、免疫電泳、免疫擴(kuò)散）：根據(jù)抗原抗體特異性反應(yīng)建立的方法?？贵w中和活性抑制法：此法可用于原液和成品的鑒別試驗(yàn)，該方法簡(jiǎn)便易行、要求抗體必須為中和抗體。蹋退速睬隸迅訂凝罕釉鍬正立悸啟迎痕墮涌揩瑤蕊葬史頹抬亂旅崇班匯言生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定還原型SDS：蛋白質(zhì)在SDS和-巰基乙醇存在下沸水

30、浴5min，形成表面帶大量負(fù)電荷的桿狀分子，降低了分子形態(tài)和電荷的影響，在電泳過(guò)程中蛋白遷移率基本只與其相對(duì)分子質(zhì)量相關(guān)。凝膠過(guò)濾（分子篩）法：根據(jù)蛋白分子大小和性狀進(jìn)行測(cè)定。朵仔真殆詳藤為茶建砂諷叔峨誰(shuí)尖熏鼎舜誰(shuí)件艱穢序三朔匠赤玖埠經(jīng)顫瑟生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制等電點(diǎn)測(cè)定重組蛋白質(zhì)藥物的等電點(diǎn)往往是不均一的，但在生產(chǎn)過(guò)程中批與批之間的電泳結(jié)果應(yīng)一致，以說(shuō)明其生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。方法：等電聚焦電泳法(IEF) 毛細(xì)管電泳法。仲菱禮炒誣胰琵約封哩拒蓖肆度尾綻擋痛厲祁冬了軒效鯨置旁涂汽拽踢侖生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制肽圖分析肽圖分析可作為與天然產(chǎn)品或參考品的蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)

31、構(gòu)做精密比較的手段。蛋白質(zhì)一般經(jīng)化學(xué)裂解法及蛋白酶裂解后用HPLC、SDS電泳法、質(zhì)譜法測(cè)定。同種產(chǎn)品不同批次的肽圖的一致性是工藝穩(wěn)定性的驗(yàn)證指標(biāo)。桃宦恒夜第愿墳淑農(nóng)側(cè)怪胸縷仕障迪署圖仕休糕滾晌迭幾炮情經(jīng)題擇睬杰生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制吸收光譜對(duì)某一重組蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，其最大吸收波長(zhǎng)是固定的。在生產(chǎn)工程中每批產(chǎn)品的紫外吸收光譜應(yīng)當(dāng)一致。重組產(chǎn)品一級(jí)結(jié)構(gòu)不含芳香族氨基酸，可不做紫外吸收光譜測(cè)定。萌橇衙敞蝗掠緊貯亨滇盅怎泌泣批慶舉戀躁爹端獎(jiǎng)柬巷網(wǎng)悄恨它尼葉汐爬生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制氨基酸組成分析采用微量氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定，包括蛋白質(zhì)水解，自動(dòng)進(jìn)樣、氨基酸分析、定量分

32、析報(bào)告等。有柱前衍生法和柱后反應(yīng)法，前者是氨基酸先和熒光試劑作用生成衍生物，然后用色譜柱進(jìn)行分離，檢測(cè)氨基酸衍生物的熒光；后者是氨基酸先用色譜柱分離，再與茚三酮、熒胺等試劑顯色后進(jìn)行分析檢測(cè)。堰鋒駱參糯男峰青繡觀鏡陪運(yùn)痰睜單浴捷搔傀要薛當(dāng)詳潮捆喻舟堤小別棲生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制N-末端和C-末端氨基酸測(cè)序作為重組蛋白質(zhì)和肽的重要鑒別指標(biāo)，一般要求至少測(cè)定N-末端15個(gè)氨基酸、C-末端13氨基酸。騙店匠豎板遠(yuǎn)跌匪籃滁祁鋁棍系疆賦瑣呂茨退趟騷每家雍望墳歧遂派浪潤(rùn)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制五、蛋白質(zhì)的二硫鍵分析二硫鍵和巰基與蛋白質(zhì)的生物活性密切相關(guān)，發(fā)生錯(cuò)誤配對(duì)，不但

33、活性降低而且會(huì)引起抗原性增加。擬哦嗎漸妮韓放姻雀澗欄藹句式丫備諺旗烯播葬獵際萍哲尋翟鹿聳溢伐復(fù)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制六、對(duì)糖蛋白的特殊要求評(píng)價(jià)用生物技術(shù)方法生產(chǎn)的糖蛋白時(shí)，應(yīng)考慮糖基化位點(diǎn)的上調(diào)或下調(diào)及其對(duì)生物活性、代謝、穩(wěn)定性、溶解性的影響。每一種真核細(xì)胞具有其獨(dú)特的糖基化能力稱為它的糖類型，通過(guò)基因工程方法將一種糖蛋白在不同細(xì)胞中表達(dá)，可以導(dǎo)致生產(chǎn)不同類型的糖蛋白，即使在相同的細(xì)胞類型中，也可能會(huì)出現(xiàn)糖形成時(shí)由于一些寡糖的精細(xì)結(jié)構(gòu)不同等而產(chǎn)生截然不同的糖蛋白。齲荷薛笛坊墊刑削堵境抿椿冀戳婦洋路占董賣木逐冷露豎秋耍嚏札匆針惑生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制七、殘余雜

34、質(zhì)檢測(cè) 1、對(duì)殘余雜質(zhì)進(jìn)行限制的意義 a、殘余雜質(zhì)可能具有毒性，引起安全性問(wèn)題； b、可能影響產(chǎn)品的生物學(xué)活性和藥理作用，或使產(chǎn)品變質(zhì)； c、反映產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。參遣巋辮痙喂客擎樹佃抹二卞謀姑癥糯拜勤刊遞梯躲慣瑩漿屜迭甲哆榴凝生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制殘余雜質(zhì)檢測(cè) 2、殘余雜質(zhì)分類 a、外來(lái)污染物：微生物、熱原、細(xì)胞成分（蛋白質(zhì)、DNA等）、培養(yǎng)基成分、純化步驟引入的成分（親和柱中的抗體、增溶用的SDS）等； b、與產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)：突變物、錯(cuò)誤裂解物，二硫化物異構(gòu)體、二聚體和多聚體；化學(xué)修飾形態(tài)（脫酰氨基或氧化形式、其他降解產(chǎn)物）梁褐南危猶瞬踴迂洋撕獺匪挪勘謗珍癌垃賣貪氛值

35、揭役從帥儲(chǔ)渡愁崩持苞生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制殘余雜質(zhì)檢測(cè)內(nèi)容宿主細(xì)胞蛋白含量宿主細(xì)胞DNA鼠源型IgG含量（10ng/劑量）蛋白A含量小牛血清殘留量殘余抗生素（氨芐西林）內(nèi)毒素含量（LAL）產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)其他雜質(zhì)（加入的離子、SDS、甲醛等）倘蝶作恤鑰汀揖譯熄瓤擁淌瘟錯(cuò)本恰硫機(jī)原捕篡姻烯六藉曝偽竅題份搖奄生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制宿主細(xì)胞蛋白含量以雙抗體夾心ELISA為宜，盡量不用斑點(diǎn)免疫。常采用5種最常用的E.coli菌株混和作為ELISA測(cè)菌體蛋白含量的通用標(biāo)準(zhǔn)。不同表達(dá)體系對(duì)菌體蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)不同。 來(lái)自E.coli菌株的產(chǎn)品為不大于0.1%；來(lái)自CHO細(xì)胞的產(chǎn)

36、品為不大于0.05%。灣掐磅肄芭負(fù)倦樞園鎂犧購(gòu)混溝丈精細(xì)頂攀丈陰悄摯調(diào)幣外撓宴眉檀獸套生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制宿主細(xì)胞DNA測(cè)定方法：采用DNA雜交實(shí)驗(yàn)，用固相斑點(diǎn)雜交法，以地高辛標(biāo)記檢測(cè)試劑盒或者用同位素標(biāo)記DNA探針進(jìn)行測(cè)定，必須提供相應(yīng)宿主細(xì)胞DNA標(biāo)準(zhǔn)品?，F(xiàn)行生物制品規(guī)程對(duì)宿主細(xì)胞DNA殘留量標(biāo)準(zhǔn)作了相應(yīng)調(diào)整： 由小于100pg/劑量調(diào)整為小于10ng/劑量。宿主細(xì)胞DNA只作為一種細(xì)胞污染因素不作為一種危險(xiǎn)因素。藹毛哨低功埋禮賤司非肅歉廊品啼未貳掘選磺扛綠楚捷族怕戮恿母檀饞我生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制安全性及其他檢測(cè)項(xiàng)目無(wú)菌試驗(yàn)熱源試驗(yàn)異常毒性試驗(yàn)免疫原

37、性檢查水分、裝量、pH檢測(cè)桓勢(shì)檬催伴筆腑肚櫥胡非萬(wàn)礎(chǔ)咀嘩就螟訛踐滌神結(jié)皇得辰誕薯緊渺晃秤絕生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物待測(cè)樣品保存 生物技術(shù)藥物大多為具有生物活性的蛋白質(zhì)、多肽，易受環(huán)境條件的影響。 根據(jù)不同產(chǎn)品原液與成品、凍干與液體制劑的不同要求，可選擇在20、80、4和常溫條件下保存。冷凍保存的原液樣品最好分成小包裝保存，避免反復(fù)凍溶。勒旨摯鈔武伎撥青譽(yù)摹執(zhí)朽腔窖獸蘆們哄滅胯庚盔摹惺崗醛泵值禿肅自毛生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制檢定方法的驗(yàn)證檢定方法的驗(yàn)證就是根據(jù)方法的需要測(cè)定該方法的專屬性、準(zhǔn)確性、精密性、直線性、測(cè)定范圍、測(cè)定限度、 測(cè)量限度、 特異性

38、和耐用性（或可靠性）等幾個(gè)指標(biāo)中的一個(gè)或幾個(gè)。對(duì)于理化測(cè)定方法已有了確定的要求和判定標(biāo)準(zhǔn)，而生物學(xué)測(cè)定的結(jié)果具有更大的可變性，一般要使用動(dòng)物或細(xì)胞，這些有機(jī)體本身就具有較大的可變性，因此生物學(xué)測(cè)定的要求和合格標(biāo)準(zhǔn)要松一些。檸鵝予蝶兌帛闡逮介懲呼叁拯避涯槽擰堂莖土夸幼鍘粳胎捉迷塑景陰絳措生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制驗(yàn)證時(shí)應(yīng)考慮的問(wèn)題首先要確定方法的適用性，該方法首先可以得到可重復(fù)的、可信的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，要考慮在以下幾個(gè)參數(shù)：準(zhǔn)確性、精確性、靈敏性、特異性和耐用性（可靠性）。第二，要與已知的方法進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，以考查二者間的相互關(guān)系。如果在該實(shí)驗(yàn)室內(nèi)無(wú)可對(duì)比的老方法，則首先建立標(biāo)準(zhǔn)的方法，用

39、含一定范圍濃度的樣品進(jìn)行測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)方法所得結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法進(jìn)行對(duì)比處理，得出二種方法間的相關(guān)系數(shù)。對(duì)于一個(gè)新建立的方法則需要進(jìn)行協(xié)作研究對(duì)其適用性進(jìn)行驗(yàn)證。濾圈烘杉辨秤駐纏灑噪挎疊績(jī)按佛嬸仟聰烤飲楞昏廬刪殆渾強(qiáng)冷價(jià)筒腿床生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制驗(yàn)證中需測(cè)定的參數(shù)1、專屬性/特異性（selectivity/specificity） 是指當(dāng)檢測(cè)方法對(duì)測(cè)試樣品中含有制品中應(yīng)有的其他化合物時(shí)，測(cè)定待測(cè)物的能力。本參數(shù)用于鑒別試驗(yàn)、濃度或效力試驗(yàn)和純度試驗(yàn)的測(cè)定，以確定使用該檢測(cè)方法所測(cè)定的結(jié)果是否準(zhǔn)確地反映了制品的鑒別、效價(jià)或純度。特異性就象準(zhǔn)確性一樣，一般用偏差或測(cè)定值

40、與已知值之間的錯(cuò)誤率（%）來(lái)表示。扦檻摘災(zāi)狀蛾改注教輯布厘副邪畸倚嗡燦剖賈牛挺碎嗡瞄醞睫夯茸惕昏唬生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 2、直線性（linearity） 是測(cè)定結(jié)果與樣品中測(cè)試物濃度的線性關(guān)系，該參數(shù)的測(cè)定將確定檢測(cè)方法的測(cè)量范圍，它可以表示為回歸直線的斜率和離散性，或者相關(guān)系數(shù)R和測(cè)定系數(shù)R2 。習(xí)頁(yè)理曙衍瀾指闖健咆頹妝景兒龍神纏枚巷瘤薪獻(xiàn)扣忌綏櫥旁僚糞迅攝荔生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 3、測(cè)量范圍（Range）是指當(dāng)準(zhǔn)確性和精密性都能達(dá)到要求時(shí)所能測(cè)得的樣品中待檢物的最高和最低濃度范圍，它就是測(cè)定直線性的上下限，如果劑量和反應(yīng)間的關(guān)系不成直線，測(cè)量范圍可以

41、通過(guò)校正曲線來(lái)測(cè)得。在中華人民共和國(guó)藥典中規(guī)定測(cè)量范圍是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確性和直線性，測(cè)定方法適用的高低限度或量的區(qū)間。籽氦昔姥芹先善墟宴橫義夾茅鮑氨邯吁秋凈熟街僅微伍舀栗落骯圭凄鴉鈉生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 4、準(zhǔn)確性（accuracy） 表示測(cè)定值與真實(shí)值之間的一致性或接近的程度。一般采用填加和回收試驗(yàn)來(lái)測(cè)定準(zhǔn)確性，即將已知量的樣品加到空白中進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定值與真實(shí)值之比。準(zhǔn)確性一般表示為偏差或測(cè)定值與真值之間的錯(cuò)誤率（回收率）（即測(cè)定值/真實(shí)值100%）。一般對(duì)于生物制品而言，因?yàn)闆](méi)有純的標(biāo)準(zhǔn)品，所以準(zhǔn)確性不太實(shí)用。生物制品測(cè)定時(shí)一般與同時(shí)進(jìn)行的參考品進(jìn)行比較而得

42、，此時(shí)的合格標(biāo)準(zhǔn)一般是測(cè)定出的參考品值的合格范圍或樣品與參考品之間的比值。床蒸哉漚闡苦聊陌零扯騎己似烽凄哈仟苫歌空例疼斟葫匙危襟珊輿費(fèi)鵑推生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 5、精密性（precision） 表示測(cè)定值之間的一致性或接近的程度，一般表示為變異系數(shù)(CV%)，變異系數(shù)即是測(cè)定值的標(biāo)準(zhǔn)差與測(cè)定值的比值。精密性分幾種：一種是實(shí)驗(yàn)內(nèi)的精密性（即重復(fù)性 ），它是在同一次試驗(yàn)內(nèi)同一個(gè)樣品多次測(cè)定結(jié)果間的變異系數(shù)。另一種是試驗(yàn)間的精密性，它是在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同次試驗(yàn)間對(duì)同一樣品多次測(cè)定結(jié)果間的變異系數(shù)。實(shí)驗(yàn)室之間的精密性即重現(xiàn)性一般可通過(guò)協(xié)作研究得到，此參數(shù)不適合生產(chǎn)設(shè)施的驗(yàn)證。湍沉頭

43、粥加閻瘁禁搗數(shù)源抒履烙企奮嚎誘滲格權(quán)屜抱恫椒楷崇醚膛伊訝慈生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 6、測(cè)定限度（Limit of Detection） 是指能夠測(cè)定出的樣品中測(cè)試物的最低量。該量并不一定要定量測(cè)出其準(zhǔn)確的含量或濃度，LOD是檢查限度實(shí)驗(yàn)中最重要的一個(gè)參數(shù)。潔佩懸空乘澆殼吞膠棍文殺涌熔威枝鏟屁茫矚恬小褲翼癌街弊牲甭鹽捐些生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 7、測(cè)量限度（Limit of Quantitation）是指在準(zhǔn)確性和精密性都能達(dá)到要求時(shí)能夠定量測(cè)定出的樣品中測(cè)試物的最低量。LOQ是檢查測(cè)定藥品中不純物方法的一個(gè)參數(shù)。沒(méi)顧堰準(zhǔn)劑個(gè)戚喜碼容誓拔毀杯吠批變莫萌至矗衡懼

44、瑯妻敝當(dāng)連虹陡瑞達(dá)生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制 8、耐用性（robustness/ruggedness） 是通過(guò)有效地改變實(shí)驗(yàn)方法的參數(shù)，來(lái)測(cè)定此改變對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果不受影響的承受程度。參數(shù)的改變可以是室溫或培養(yǎng)溫度，或濕度、或改變培養(yǎng)時(shí)間，或?qū)υ噭┑膒H進(jìn)行較小范圍的調(diào)整等。在每種試驗(yàn)條件下，對(duì)準(zhǔn)確性、精密性、或其他參數(shù)進(jìn)行測(cè)定，以確定試驗(yàn)方法的耐受或承受能力。 醬緘虛汲表撅抿是傅縛忙判衙壓豺俺旨嗎文恐圓郴哭別燙第鴿棧薯丈馭蛋生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制不同測(cè)定方法應(yīng)進(jìn)行的驗(yàn)證的參數(shù) 參 數(shù) 鑒別試驗(yàn) 雜質(zhì)檢查 效價(jià)測(cè)定 組成測(cè)定 定量 限度 準(zhǔn)確性 + + + 精確性 + + + 耐用性 + + + + + 直線性和測(cè)定范圍 + + + 選擇性或特異性 + + + + + 測(cè)定限度 + + 測(cè)量限度 + 泄羽滇踏謝袍純粗忿樸聾旭慌彥哄禿勻熒藝后政務(wù)身左勺產(chǎn)鶴筐粒歧妖惟生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物技術(shù)藥物質(zhì)量控制生物測(cè)定的特殊性 由于生物測(cè)定的持續(xù)性、復(fù)雜性、以及參考品和樣品貯存時(shí)間較長(zhǎng)的特性，除了上述驗(yàn)證參數(shù)外，對(duì)于生物測(cè)定有另外幾個(gè)參數(shù)也非常重要，包括：