（母種轉(zhuǎn)管技術(shù)）學(xué)習(xí)資料單

1、第二章菌種的來(lái)源第四節(jié)：母種轉(zhuǎn)管技術(shù)在食用菌生產(chǎn)過(guò)程中，由于分離或引進(jìn)的原始母種數(shù)量有限，不能滿(mǎn)足生產(chǎn) 所需，因此，需要進(jìn)行母種的擴(kuò)大繁殖。首先我們先了解一下什么是母種轉(zhuǎn)管，母種轉(zhuǎn)管是指將分離培養(yǎng)成的母種菌 絲體，無(wú)菌操作移接到空白試管培養(yǎng)基上，這個(gè)操作過(guò)程叫做轉(zhuǎn)管或轉(zhuǎn)代。母種轉(zhuǎn)管是食用菌制種工作中的一項(xiàng)最基本的操作，無(wú)論是菌種的繼代、分 離、鑒定還是食用菌形態(tài)、生理、生化等方面的研究都離不開(kāi)母種轉(zhuǎn)管操作。轉(zhuǎn)管后的母種叫再生母種或移接母種。一支斜面母種可轉(zhuǎn)接60100支試 管，母種轉(zhuǎn)管次數(shù)不可太多，一般母種可轉(zhuǎn)接34次，不能超過(guò)4次，以免造 成污染、生活力降低或退化現(xiàn)象的發(fā)生。再生母種（移接母

2、種）：一支斜面母種可轉(zhuǎn)接60100支試管，母種轉(zhuǎn)管次 數(shù)不可太多，一般母種可轉(zhuǎn)接34次，不能超過(guò)4次，以免造成污染、生活力 降低或退化現(xiàn)象的發(fā)生。母種轉(zhuǎn)管所需要用到的設(shè)備與用具主要有超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種鉤、接 種鏟、75%酒精棉球、95%酒精、工具支架、PDA斜面培養(yǎng)基、平皿、口取紙、恒 溫培養(yǎng)箱等。為避免有害微生物的活動(dòng)而造成污染，確保母種轉(zhuǎn)管操作過(guò)程順利完成及菌 絲體進(jìn)行純培養(yǎng)，母種轉(zhuǎn)管需要在無(wú)菌的環(huán)境中以無(wú)菌操作方法完成，必須遵循 無(wú)菌操作規(guī)程，有5點(diǎn)要求：1、接種前對(duì)接種室要提前2天用煙霧消毒劑進(jìn)行熏蒸消毒。2、提前30分 鐘打開(kāi)超凈工作臺(tái)，使用75%酒精棉擦拭超凈工作臺(tái)面，將培養(yǎng)

3、基放入接種室工 作臺(tái)上，并準(zhǔn)備好用具。打開(kāi)紫外線殺菌燈消毒30分鐘。3、換好清潔的工作服, 同時(shí)清洗雙手，然后將菌種帶入接種室內(nèi)。4、關(guān)閉紫外線殺菌燈，取少許75% 酒精棉擦拭雙手、菌種容器表面、及接種工具。5、酒精燈火焰屬外焰區(qū)域溫度 最高，火焰周?chē)?10厘米范圍內(nèi)的空間為無(wú)菌區(qū)，所有操作過(guò)程必須靠近火焰 周?chē)?0厘米范圍內(nèi)進(jìn)行，但要注意不要離火焰太近以免燙傷菌種。轉(zhuǎn)管操作時(shí) 動(dòng)作要快，轉(zhuǎn)管時(shí)間不易太長(zhǎng)。母種轉(zhuǎn)管的具體操作過(guò)程。母種轉(zhuǎn)管操作流程我們可以分3個(gè)步驟來(lái)完成.首先，取少許酒精棉擦拭雙 手、接種工具及母種容器表面，點(diǎn)燃酒精燈，右手拿起接種鉤、接種鏟沾取酒精 在火焰上灼燒后放在工具支架

4、上冷卻備用。2拿起母種試管放到左手，用拇指與食指握在手中，斜面向上，右手小指與 手撐握住棉塞拔掉，拔出的棉塞勿觸及任何地方。試管口在酒精燈火焰上灼燒 一下，右手拿起接種鉤將母種菌絲面前端1cm勾出去除掉。更換接種鉤，在培養(yǎng)基表面橫向左右切割，切割寬度為2 mm左右，切透菌 絲表面至培養(yǎng)基內(nèi)側(cè)，但不能切斷培養(yǎng)基，切好后接種鉤灼燒冷卻備用。3拿起空白培養(yǎng)基放置于左手母種試管外側(cè)平行握住，斜面向上。右手無(wú)名 指與小指夾住棉塞拔掉，拿起接種鏟伸入母種試管內(nèi)，接種鏟垂直于菌絲面向內(nèi) 切割兩次，之間距離為2 mm左右，使用接種鏟水平鏟取接種塊，帶少許培養(yǎng)基, 迅速移接到空白斜面培養(yǎng)基內(nèi)，接種塊要接種于斜面

5、培養(yǎng)基的中間位置上。抽出 接種鏟，灼燒試管口，將棉塞在火焰上輕輕灼燒一下，并在火焰旁將棉塞塞上, 注意轉(zhuǎn)接過(guò)程中不要使接種塊沾在試管壁上。轉(zhuǎn)管操作完成。如果需要轉(zhuǎn)接多支試管或多個(gè)品種，重復(fù)以上操作步驟即可。整個(gè)操作過(guò)程 要快速、準(zhǔn)確、熟練。當(dāng)母種轉(zhuǎn)管操作結(jié)束后，要將母種的棉塞在火焰上輕輕灼 燒一下，重新塞到母種試管上，放回原位。轉(zhuǎn)管結(jié)束后，試管用皮筋每7支或10支一捆扎好，貼上標(biāo)簽，注明品種名 稱(chēng)及日期等，注意標(biāo)簽貼的位置不要遮擋棉塞及培養(yǎng)基，以避免后期菌絲生長(zhǎng)及 污染情況的觀察。使用牛皮紙將棉塞端包好，置于恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，根據(jù) 不同菌類(lèi)對(duì)生長(zhǎng)溫度的要求，設(shè)置最適合菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)溫度。一般培養(yǎng)3天后, 要檢查菌絲的生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)污染或生長(zhǎng)不良的情況，要及時(shí)挑出處理，以免蔓 延。培養(yǎng)10-15天，母種菌絲即可長(zhǎng)滿(mǎn)。污染的試管要經(jīng)過(guò)高壓滅菌后，方可進(jìn) 行清洗處理。在母種轉(zhuǎn)管過(guò)程中有6點(diǎn)需要注意的事項(xiàng)：1、原母種培養(yǎng)基內(nèi)的老接種塊因培養(yǎng)進(jìn)間過(guò)長(zhǎng)，生活力下降，不易接入新 培養(yǎng)基內(nèi)。母種轉(zhuǎn)管時(shí)切割的接種塊不易太大。2、母種轉(zhuǎn)管時(shí)切勿使試管口離開(kāi)酒精燈火焰的無(wú)菌區(qū)范圍。3、操作時(shí)試管口盡量向下輕斜，以減少雜菌污染機(jī)會(huì)。4、母種轉(zhuǎn)管前要準(zhǔn)備好一些無(wú)菌棉塞，一起放入接種室內(nèi)，以便更換受潮 的棉塞。5