《醫(yī)用合成藥物分析》教學(xué)課件

1、合成藥毒物第1頁(yè)，共79頁(yè)。合成藥毒物 概念 合成藥毒物指那些通過(guò)人工化學(xué)合成，用于臨 床治療，但如果使用不當(dāng)或過(guò)量也可造成中毒 甚至死亡的化合物。 種類 此類化合物非常多，常見(jiàn)的有：安眠鎮(zhèn)靜藥、 抗精神病藥、解熱鎮(zhèn)痛藥、興奮藥以及麻醉藥 等。 性狀 純品多為白色固體粉末，易溶于有機(jī)溶劑，分 離提取以有機(jī)溶劑提取為主，屬于非揮發(fā)性有 機(jī)毒物或有機(jī)浸出毒物。第2頁(yè)，共79頁(yè)。第3頁(yè)，共79頁(yè)。非揮發(fā)性毒物的分離提取方法第4頁(yè)，共79頁(yè)。有機(jī)溶劑提取法（萃取法extraction)原理 利用非揮發(fā)性有機(jī)毒物在有機(jī)溶劑中有較大溶解度的性質(zhì)，通過(guò)振搖浸泡和過(guò)濾或通過(guò)萃取，將檢材中的毒物轉(zhuǎn)移到有機(jī)溶劑中

2、去，從而達(dá)到分離提取的目的。故非揮發(fā)性有機(jī)毒物又稱“有機(jī)浸出毒物”。方法 直接提取法 液液萃取法 第5頁(yè)，共79頁(yè)。直接提取法（浸取法）方法 檢材加有機(jī)溶劑浸泡或振搖，過(guò)濾，濾液直接或濃 縮后供檢。特點(diǎn) a.簡(jiǎn)便、快速、提取率較高。 b.提取雜質(zhì)較多。適用檢材 a.固體或半固體檢材 b.成分簡(jiǎn)單 （復(fù)雜的需凈化） 第6頁(yè)，共79頁(yè)。液液萃取法（1） （liquid-liquid extraction,LLE) 原理 利用溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解度大小的差異，可使之從一種溶劑中轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中去。通常將溶質(zhì)從水相轉(zhuǎn)移到有機(jī)相的過(guò)程稱為“萃取”；將溶質(zhì)從有機(jī)相轉(zhuǎn)移到水相的過(guò)程稱為“反萃取”

3、。 利用萃取或反萃取可將毒物從檢材中分離提取出來(lái)或?qū)μ崛∫哼M(jìn)一步凈化，還可對(duì)混合毒物進(jìn)行分離。 萃取 反萃取 乙醚 酸水 水相 氯仿 第7頁(yè)，共79頁(yè)。液液萃取法（LLE)（2）分配比（distribution coefficient,D) 一種毒物是否能被萃取或反萃取，主要由其在兩相中的分配比決定。 CO (W W1) / VO CO VO 有機(jī)相D = = W-W1 CA W1/ VA CA VA W1 水相D值隨溫度、濃度、酸堿性變。在一定條件下，D值可看成定值。同一溶劑中，D值越大，在有機(jī)溶劑中的溶解度越大。一種毒物在不同溶劑系統(tǒng)中的D值不同（選提取溶劑 ）。第8頁(yè)，共79頁(yè)。液液萃取

4、法（LLE)（3） VA n 萃取率 fn = 1 - VA+ DVO D值越大，越有利于萃??；反之，越利于反萃取。 D值一定時(shí)，增加萃取溶劑體積可提高萃取率。 萃取溶劑體積一定時(shí)，增加萃取次數(shù)可提高萃取率第9頁(yè)，共79頁(yè)。液液萃取法（LLE)（4）萃取方式 適用 情況 裝置一次萃取 含量高 D值大 定性 分液漏斗 試管多次萃取 含量較低 D值較小 定量 分液漏斗 試管連續(xù)萃取 D值特別小 易乳化 連續(xù)萃取裝置第10頁(yè)，共79頁(yè)。連續(xù)液液萃取法 連續(xù)萃取原理 利用萃取溶劑自身的重力和靜壓力，在無(wú)需振搖的情況下，使兩種比重不同、互不相溶的的液體充分接觸，通過(guò)溶質(zhì)在兩相中的重新分配達(dá)到萃取的目的。

5、 特點(diǎn) 無(wú)需振搖，避免乳化。 節(jié)約溶劑，引入雜質(zhì)少，易濃縮。 省力不省時(shí)。 適用于D值特別小的毒物。第11頁(yè)，共79頁(yè)。連續(xù)液液萃取裝置 輕液提取器 重液提取器 1檢材 2萃取溶劑 3冷凝管第12頁(yè)，共79頁(yè)。液液萃取法的應(yīng)用應(yīng)用 a. 直接從液體檢材中分離提取有機(jī)毒物。 b. 對(duì)直接提取法所得的有機(jī)提取液進(jìn)行凈化，方 法有反提法（反萃?。┖拖礈旆ā?c. 根據(jù)極性或酸堿性不同，可分離混合毒物。第13頁(yè)，共79頁(yè)。提高溶劑提取率的措施關(guān)鍵 增大毒物在提取溶劑中的分配比。方法 A. 調(diào)節(jié)酸堿性 a. 增大毒物在提取溶劑中的溶解度。 b. 應(yīng)注意避免毒物分解。 B. 無(wú)水硫酸鈉脫水 a. 增加毒物

6、在提取溶劑中的溶解量（半流體檢材 固化）。 b. 減少有機(jī)萃取液中水溶性雜質(zhì)的引入。 c. 避免乳化。 C.選擇合適的提取溶劑 a. 對(duì)毒物的溶解度大，對(duì)雜質(zhì)的溶解度小。 b. 分析目的不明確時(shí)，選溶解范圍寬的。 c. 毒性小，易濃縮。第14頁(yè)，共79頁(yè)。酸堿性的調(diào)節(jié)用有機(jī)溶劑提取毒物時(shí)酸性藥毒物酸性堿性藥毒物堿性中性藥毒物各種pH均可兩性藥毒物等電點(diǎn)對(duì)含酯、酰胺等不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的化合物，調(diào)酸堿性不可過(guò)強(qiáng)，以免分解。第15頁(yè)，共79頁(yè)。分離提取前處理方法 用有機(jī)溶劑提取法或固相萃取法分離提取生物檢材中的有機(jī)毒物時(shí)，為了避免雜質(zhì)干擾以后的分析工作或提高分離提取效率，常在提取之前，先對(duì)檢材進(jìn)行適當(dāng)處理

7、，最常用的方法有除去蛋白和水解結(jié)合物。第16頁(yè)，共79頁(yè)。除去蛋白質(zhì)檢材 血、肝勻漿等含蛋白質(zhì)較多的檢材。目的避免對(duì)后續(xù)檢測(cè)方法產(chǎn)生干擾，影響分析結(jié) 果的可靠性和準(zhǔn)確性。 保護(hù)儀器，減少對(duì)儀器的污染和損壞。 減輕液液萃取時(shí)產(chǎn)生的乳化現(xiàn)象。方法 使蛋白質(zhì)變性、凝聚或生成不溶性鹽而沉 淀，通過(guò)過(guò)濾或離心除去。 其它超速離心、微孔濾膜超濾、平衡透析等。第17頁(yè)，共79頁(yè)。常用沉淀蛋白試劑 試 劑 常 用 機(jī) 理 適 用 強(qiáng)極性 甲醇 乙醇 強(qiáng)親水作用，破壞蛋白 應(yīng)用范圍廣，有機(jī)溶劑 乙腈 表面水化膜，同時(shí)抑制 絕大多數(shù)毒物 蛋白解離，使蛋白凝聚 可直接進(jìn)儀器 三氯醋酸 低于等電點(diǎn)pH，帶正電 酸、中

8、性毒物 無(wú)機(jī)酸 高氯酸 荷的蛋白與酸根形成不 堿性毒物慎用 鎢酸 溶性鹽。 對(duì)ECD有干擾 硫酸鋅 高于等電點(diǎn)pH，帶負(fù)電 避免用于可能金屬離子 汞、銅鹽 荷的蛋白與金屬離子形 含金屬毒物的 成不溶性鹽。 檢材 高濃度 硫酸銨 鹽析作用，蛋白脫水 各類毒物 無(wú)機(jī)鹽 硫酸鈉 加熱可促進(jìn)蛋白沉淀 對(duì)熱不穩(wěn)定的慎 用第18頁(yè)，共79頁(yè)。沉淀蛋白反應(yīng)與酸根成鹽 COO- 2H+ COOH WO42- COOH 2Pr 2Pr ( Pr )2 WO4 NH3+ NH3+ NH3+與金屬離子成鹽 COO- OH- COO- Zn2+ COOZn/2 2Pr Pr Pr NH3+ NH2 NH2第19頁(yè)，共

9、79頁(yè)。水解結(jié)合物 檢材 毒物與體內(nèi)蛋白質(zhì)、葡萄糖醛酸、硫酸等 結(jié)合率較高、提取率低的生物檢材。 目的 使結(jié)合的藥毒物解離，提高提取率。 方法 利用強(qiáng)酸或酶對(duì)結(jié)合物進(jìn)行水解。第20頁(yè)，共79頁(yè)。常用水解方法方法 酸 水 解 酶 水 解 葡萄糖醛酸甙試劑 鹽酸 加熱 硫酸酯酶 胃蛋白酶 胰蛋白酶等 溫度低 作用溫和 優(yōu)點(diǎn) 試劑價(jià)廉 簡(jiǎn)便快速 水解專一 毒物破壞少 水解液凈化度好 水解專一性不強(qiáng) 水解時(shí)間較長(zhǎng)缺點(diǎn) 有些毒物可被破壞 水解液雜質(zhì)多適用 性質(zhì)穩(wěn)定、目的明確 各種毒物第21頁(yè)，共79頁(yè)。分離提取液的凈化目的 進(jìn)一步除去提取樣品液中的脂肪、蛋 白質(zhì)、色素等雜質(zhì)，盡可能排除雜質(zhì) 對(duì)后續(xù)檢測(cè)的

10、干擾，減少對(duì)儀器的污 染和損害。方法 液液萃取法（反提法和洗滌法） 吸附柱法 薄層色譜法第22頁(yè)，共79頁(yè)。反提法方法 用酸水液或堿水液對(duì)有機(jī)提取液進(jìn)行反萃取，使藥毒物轉(zhuǎn)變成極性較大的鹽而溶于水相，將極性相對(duì)較小和中性的雜質(zhì)留在有機(jī)溶劑中。適合毒物 酸性藥毒物堿水液反提 堿性藥毒物酸水液反提注意事項(xiàng) 對(duì)有些有機(jī)堿性毒物，不宜從氯仿溶劑中反萃取。 酸堿液濃度不宜過(guò)高，以免毒物分解。第23頁(yè)，共79頁(yè)。洗滌法 方法 用稀酸液或稀堿液對(duì)有機(jī)提取液進(jìn)行處理，使極性較大 或具有酸堿性的雜質(zhì)溶于水相而除去，使有機(jī)相中的藥 毒物得到凈化。適用毒物 一般用于中性藥毒物注意事項(xiàng) 酸性毒物不能用堿水液洗滌，堿性毒

11、物不能用酸水液 洗。 經(jīng)堿水液或酸水液洗滌后的有機(jī)相，應(yīng)用蒸餾水洗滌， 并用無(wú)水硫酸鈉脫水。第24頁(yè)，共79頁(yè)。吸附柱凈化方法 用對(duì)雜質(zhì)吸附力較強(qiáng)的吸附劑作為柱填料，對(duì) 有機(jī)提取液進(jìn)行處理，使雜質(zhì)被吸附于柱上， 而藥毒物隨溶劑或洗脫劑流出柱子。吸附劑 三氧化二鋁色素、蠟質(zhì)、脂肪等 硅鎂吸附劑蠟質(zhì)、脂肪等 活性炭色素 無(wú)水硫酸鈉水第25頁(yè)，共79頁(yè)。薄層板凈化方法 將有機(jī)提取液點(diǎn)于薄層板上，展開，使藥毒物 分離，定位后將疑是藥毒物的斑點(diǎn)刮下，用有 機(jī)溶劑溶解洗脫。適用 少量樣品第26頁(yè)，共79頁(yè)。改良Stas-otto法 利用乙醇溶解范圍寬且具有沉淀蛋白質(zhì)的性質(zhì)，先用乙醇作為提取溶劑，從檢材中將

12、毒物分離提取出來(lái)，同時(shí)沉淀除去檢材中的蛋白質(zhì)。然后再用其它溶劑進(jìn)行萃取和反萃取處理，使提取的樣品溶液進(jìn)一步凈化，并使檢材中可能存在的各類毒物得以分離。第27頁(yè)，共79頁(yè)。改良Stas-otto法的流程 檢 材 酸化 95%乙醇浸泡 過(guò)濾 乙醇浸出液 水浴蒸發(fā) 加無(wú)水乙醇 過(guò)濾 無(wú)水乙醇濾液 水浴蒸干 酸性水溶解 酸性水溶液 乙醚萃取 乙醚液 酸性水溶液 1molNaOH反提 NaOH堿化,乙醚萃取 乙醚液 堿水液 乙醚液 堿水液 HCl酸化 5%HCl中和 乙醚萃取 弱堿堿化 有機(jī)溶劑萃取 乙醚液 萃取液 中性毒物 酸性毒物 堿性毒物 兩性毒物第28頁(yè)，共79頁(yè)。改良Stas-otto法的優(yōu)缺

13、點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)提取范圍寬，適用于系統(tǒng)分離。對(duì)腐敗檢材的凈化度較好?？芍苯佑糜谟靡掖冀莘栏４娴臋z材。缺點(diǎn)操作費(fèi)時(shí)、費(fèi)工。溶劑消耗量大。回收率低，所需檢材量大。第29頁(yè)，共79頁(yè)。液固萃取法（liquid-solid extraction)固相萃取法 利用藥毒物與檢材中其它成分在吸附、分配、分子大小以及酸堿性等性質(zhì)方面的差異，使用經(jīng)特殊制備的固相材料和溶劑對(duì)檢材進(jìn)行處理，使藥毒物和雜質(zhì)分離的方法。 常用柱式，將固相材料填于柱中。 方式 將固相材料懸于檢材中。第30頁(yè)，共79頁(yè)。固相萃取管(Disk)第31頁(yè)，共79頁(yè)。固相萃取過(guò)程 選柱 活化 加樣 洗脫第32頁(yè)，共79頁(yè)。 固相萃取法分類 方法反相固

14、相萃取法正相固相萃取法離子交換固相萃取法吸附固相萃取法第33頁(yè)，共79頁(yè)。固相材料分類 親酯型 親水型 離子交換型類型 鍵合硅膠 交聯(lián)樹脂 分配型 吸附型 陽(yáng)離子型 陰離子型 氧化硅膠 XAD系列 硅膠 三氧化二鋁 -COOH N(CH3)3X材料 C18 C8 苯乙烯和 硅藻土 硅鎂吸附劑 -SO3H -NR2 氰基 氨基 二乙烯苯 活性炭 -PO3H NHR-NH2 聚合物機(jī)理 分配為主 網(wǎng)孔阻礙 分配 吸附 形成離子對(duì) 吸附為輔 吸附 吸附 吸附適用 水性基質(zhì) 水性基質(zhì) 水性基質(zhì) 有機(jī)基質(zhì) 水性或有機(jī)基質(zhì) 憎水性的 極性較大 極性較小 雜質(zhì) 堿性毒物 酸性毒物 藥毒物 的藥毒物 的藥毒物

15、 應(yīng)用廣 不受pH 回收率較高 凈化效果好特點(diǎn) 具濃縮作用 限制 凈化效果較好 回收率高 簡(jiǎn)便省時(shí) 省時(shí) 洗脫劑量大 操作麻煩費(fèi)時(shí) 價(jià)昂吸附堿性毒 較方便 反相 正相 吸附 離子交換第34頁(yè)，共79頁(yè)。固相微萃取( solid phase miacro extaction,SPME )原理 將用高分子材料做成的萃取頭(或纖維頭)直接伸入檢樣中（浸入 式）或置于檢樣上方（頂空方式）,保留一段時(shí)間,待毒物吸附于其 上后,取出用于GC或HPLC 分析.過(guò)程 吸附藥毒物 進(jìn)樣 解吸特點(diǎn) 簡(jiǎn)便、快速，集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣為一體。成本較高。進(jìn)樣口GC熱解吸附HPLC 溶解洗脫第35頁(yè)，共79頁(yè)。分離提

16、取凈化方法的選擇 以下幾方面綜合考慮: 毒物 a. 分析目的物是否明確？單一毒物還是多種毒物？（溶劑 選擇 b. 毒物的性質(zhì)（溶解度、酸堿性、穩(wěn)定性等） c. 中毒量大?。ㄈ〔牧俊饪s體積、檢測(cè)方法） d. 體內(nèi)代謝情況（是否需水解？是否需檢驗(yàn)代謝物？） 檢材 a. 毒物含量（取材量、檢測(cè)方法） b. 毒物的存在狀態(tài)（分離方法、檢測(cè)方法） c. 組成(分離凈化方法） 檢測(cè)方法 a. 原理（應(yīng)除去哪些雜質(zhì)、溶劑選擇） b. 選擇性（有無(wú)分離能力） c. 靈敏度（取樣量、濃縮體積）第36頁(yè)，共79頁(yè)。安眠鎮(zhèn)靜藥內(nèi)容一般介紹檢材處理檢測(cè)方法結(jié)構(gòu)性質(zhì)種類中毒情況取材第37頁(yè)，共79頁(yè)。安眠鎮(zhèn)靜藥一般介

17、紹常見(jiàn)種類 苯馬并二氮雜卓類、吩噻嗪類、巴比妥類、眠爾通 等。中毒可能性大，種類多，價(jià)廉；應(yīng)用廣，易得；城市居多。中毒原因 自殺（較多） 投毒(他殺、麻醉?yè)尳?、制造假象掩蓋死因） 濫用（多屬于國(guó)際公約二類精神藥物管制品種） 意外中毒方式 口服（多見(jiàn)自殺） 投于飲食中（多見(jiàn)他殺或其它麻醉目的） 注射（多見(jiàn)職業(yè)殺人）中毒癥狀 癥狀相似，缺少特征性；病理上無(wú)明顯特征性改 變。中毒結(jié)果 與用藥者的職業(yè)、文化程度、目的等有關(guān)。 致死 長(zhǎng)時(shí)間昏迷 嗜睡第38頁(yè)，共79頁(yè)。安眠鎮(zhèn)靜藥檢驗(yàn)的取材體外檢材 * 現(xiàn)場(chǎng)遺留的藥物制劑 * 剩余的飲食物（飲料、水果等） * 現(xiàn)場(chǎng)可能裝過(guò)藥物的容器（杯子、注射器、藥瓶等

18、） * 胃內(nèi)容或洗胃液 （一般成分比較簡(jiǎn)單、含量較高，利于尋找檢驗(yàn)方向）體內(nèi)檢材 * 活體材料（血、尿） * 尸體材料（胃內(nèi)容、血、肝、腦脊液等） （成分較復(fù)雜，含量相對(duì)較低。定量結(jié)果利于確定死因。第39頁(yè)，共79頁(yè)。苯駢二氮雜卓類(benzodiazepines)母體結(jié)構(gòu) 1，4-苯駢二氮雜卓類的母體結(jié)構(gòu) 三唑侖苯駢二氮雜卓類的母體結(jié)構(gòu) 第40頁(yè)，共79頁(yè)。常見(jiàn)苯駢二氮雜卓類藥物的結(jié)構(gòu)及常見(jiàn)劑型與規(guī)格 母體結(jié)構(gòu)與名稱 常用別名 取代基 常用劑型與規(guī)格1，4-苯駢二氮雜卓類地西泮（diazepam） 安定 1-CH3，7-Cl，R1= -H 白色片劑，2.5mg或5mg。氟西泮（fluraze

19、pam） 氟安定 1-CH2CH2N(C2H5)2， 片劑，15mg。 7-Cl，R1= -F硝西泮（nitrazepam） 硝基安定 7-NO2，R1= -H 白色或微黃色片劑，5mg。氯硝西泮（clonazepam） 氯硝安定 7-NO2，R1= -Cl 類白色片劑，0.5mg,或2mg。奧沙西泮(oxazepam) 去甲羥基安定 3-OH，7-Cl， R1= -H 白色片劑，15mg。氯氮卓（chlordiazepoxide 利眠寧 2-NHCH3，4O,7-Cl， 微黃色片劑，5mg或10mg。 2,3位雙鍵，R1= -H三唑侖苯駢二氮雜卓類三唑侖（triazolam） 三唑安定 R2

20、= -CH3，R3= -Cl 淺藍(lán)色片劑，0.25mg。 艾司唑侖（estazolam） 舒樂(lè)安定 R2= -H，R3= -H 白色片劑，1mg或2mg。阿普唑侖（alprazolam） 甲基三唑安定 R2= -CH3，R3= -H 白色片劑，0.4mg。第41頁(yè)，共79頁(yè)。苯駢二氮雜卓類的性質(zhì)多為白色或黃色結(jié)晶，無(wú)臭，味苦。弱堿性，可與強(qiáng)酸成鹽；奧沙西泮（去甲羥基安定）為兩性。游離化合物的極性差異較大，一般難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；氟西泮（氟安定）極性較大可溶于水。與酸形成的鹽可溶于水，略溶于氯仿，不溶于乙醚。七元環(huán)在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿中加熱，可水解開環(huán)。第42頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類(phenoth

21、iazines) 母體結(jié)構(gòu)以吩噻嗪環(huán)為母體結(jié)構(gòu)，又稱苯駢噻嗪或硫氮雜蒽。R1多為堿性側(cè)鏈；R2多為電負(fù)性較大的基團(tuán)。泰爾登結(jié)構(gòu)與吩噻嗪的相似，但不含氮原子。第43頁(yè)，共79頁(yè)。幾種常見(jiàn)吩噻嗪類藥物的結(jié)構(gòu)及藥物性狀第44頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類藥物的性質(zhì)多為油狀液體或低熔點(diǎn)的固體；堿性較強(qiáng)，可與多種酸成鹽；藥用制劑多為其鹽酸鹽；游離態(tài)難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；鹽可溶于水，也可溶于有機(jī)溶劑乙醇、氯仿等；有熒光；性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光、氧化劑等易變色；藥物制劑多為糖衣片或注射液。第45頁(yè)，共79頁(yè)。巴比妥類結(jié)構(gòu)母體結(jié)構(gòu)為丙二酰脲；藥用的多在5位碳上有兩個(gè)取代基，稱5，5二取代巴比妥，取代基為氫時(shí)，稱巴比妥酸

22、；少數(shù)在1位氮上有取代基的稱1，5，5三取代巴比妥；2位碳上的氧被硫取代時(shí)，稱硫代巴比妥，如硫噴妥。取代基一般為烷基、不飽和烴基、芳香烴基等。第46頁(yè)，共79頁(yè)。常見(jiàn)巴比妥類藥物取代基和制劑第47頁(yè)，共79頁(yè)。巴比妥類的性質(zhì)除硫噴妥為淺黃、略帶蒜臭外，多為白色結(jié)晶，無(wú)臭、有苦味；有固定熔點(diǎn)，可升華；極性中等，易溶于極性有機(jī)溶劑，微溶于水，難溶于石油醚；二酰亞胺互變異構(gòu)成烯醇式時(shí)，具弱酸性，可與氫氧化鈉等強(qiáng)堿成鹽而熔于堿水液；內(nèi)酰亞胺結(jié)構(gòu)不很穩(wěn)定，在強(qiáng)堿性溶液中長(zhǎng)時(shí)間放置，可開環(huán)，并放出二氧化碳；導(dǎo)眠能性質(zhì)與巴比妥類的相似，在強(qiáng)堿液中更不穩(wěn)定，很快分解。第48頁(yè)，共79頁(yè)。安眠鎮(zhèn)靜藥的檢材處理體

23、外檢材 成分簡(jiǎn)單，藥片、藥粉等固體檢材一般可直接用乙醇溶解或提取后 檢測(cè)；注射液、飲料等液體檢材，可適當(dāng)調(diào)酸堿性后液液萃取。體內(nèi)檢材血和肝勻漿，提取時(shí)一般需先經(jīng)過(guò)沉淀蛋白。提取吩噻嗪類藥物時(shí)，無(wú)機(jī)酸類沉淀蛋白劑應(yīng)慎用。苯駢二氮卓類的用藥量較小，體內(nèi)結(jié)合率較高，必要時(shí)可先行水解再提取。用有機(jī)溶劑萃取時(shí)，應(yīng)先調(diào)節(jié)檢材的酸堿性，使被提取的藥物處于游離狀態(tài)。苯駢二氮雜卓類弱酸性到弱堿性；吩噻嗪類堿性；巴比妥類酸性。氟西泮游離堿的水溶性較大，不宜用萃取法提取。吩噻嗪類提取時(shí)應(yīng)避光。有機(jī)提取液可通過(guò)吸附柱或反提法凈化。巴比妥類不宜在堿液中久置。血尿也可直接用固相萃取小柱提取凈化。第49頁(yè)，共79頁(yè)。安眠鎮(zhèn)

24、靜藥的檢測(cè)方法體外檢材預(yù)試化學(xué)反應(yīng)、UV 定性鑒別TLC、HPLC、GC、GC-MS、IR等定量UV、HPLC、GC體內(nèi)檢材第50頁(yè)，共79頁(yè)?；瘜W(xué)法檢識(shí)安眠鎮(zhèn)靜藥方法 微量顏色反應(yīng)和微量結(jié)晶反應(yīng)操作 瓷反應(yīng)板、載玻片或試管適用 體外檢材中安眠鎮(zhèn)靜藥的預(yù)試篩選 和檢識(shí)鑒別第51頁(yè)，共79頁(yè)。苯馬并二氮卓類的化學(xué)檢識(shí)反應(yīng) 方法 結(jié)果 適用 偶氮色素反應(yīng) 芳伯胺結(jié)構(gòu)亞硝酸鹽重氮鹽 檢識(shí)利眠寧、硝基 +鹽酸萘基乙二胺紫紅偶氮色素 安定、舒樂(lè)安定等 堿性萘酚橙紅色偶氮色素 地西泮、氟西泮陰性 穩(wěn)定、靈敏，定量 甘氨酸反應(yīng) 水解物甘氨酸 茚三酮藍(lán)紫色 鑒別 定量 其他 可與碘-碘化鉍鉀、甲醛-硫酸、硅鎢

25、酸等顯色；多數(shù)酸性條件 下有熒光,一般用于預(yù)試，薄層顯色。 第52頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類藥物的化學(xué)檢識(shí)機(jī)理：此類藥物易被氧化劑氧化成醌類化合物而顯色，或與 試劑生成有色絡(luò)合物。 濃硫酸 硫酸FeCl3 FPN試劑 氯化鈀 機(jī)理 氧化 氧化 氧化 絡(luò)合 氯丙嗪 紅 紅紫（較慢） 紅紫 橙紅異丙嗪 紅 紅紫（較慢） 紅紫 紫奮乃靜 紅 紅紫（較慢） 桃紅 橙紅三氟拉嗪 橙 不明顯 橙 橙黃泰爾登 橙黃 不明顯 橙 淺黃 特點(diǎn) 易褪色 靈敏度較低 敏度較高、顯色穩(wěn)定FPN試劑：5%三氯化鐵 + 20%高氯酸 +11硝酸（54550） 第53頁(yè)，共79頁(yè)。巴比妥類的化學(xué)反應(yīng) 方 法 結(jié) 果 適 用堿性

26、硝酸鈷反應(yīng) 巴比妥類、導(dǎo)眠能 紫色絡(luò)合物。 類別預(yù)試 純品結(jié)晶 堿水液酸化，放置，析出結(jié)晶。 巴比妥長(zhǎng)方形片狀 檢識(shí)鑒別 苯巴比妥針狀簇晶 I-KI磷酸結(jié)晶 巴比妥棕黑色棒狀和針狀 苯巴比妥深棕黑色細(xì)針狀簇晶 巴比妥類的檢識(shí)和鑒別 異戊巴比妥棕黃色片狀 戊巴比妥黑色花束狀 司可巴比妥無(wú)銅鹽-吡啶反應(yīng) 巴比妥淡紫色小十字結(jié)晶 苯巴比妥淡紫色不規(guī)則小結(jié)晶 巴比妥的檢識(shí) 硫噴妥綠色氨性硝酸銀結(jié)晶反應(yīng) 巴比妥 透明卵形小結(jié)晶 巴比妥的確證 汞鹽二苯卡巴腙 巴比妥類及導(dǎo)眠能汞鹽白色 可用于TLC顯色 二苯卡巴腙 紫堇色 或比色測(cè)定 異羥月虧酸鐵反應(yīng) 導(dǎo)眠能羥胺鐵離子紫色 酰亞胺或酯類第54頁(yè)，共79頁(yè)。

27、巴比妥和苯巴比妥的結(jié)晶第55頁(yè)，共79頁(yè)。紫外分光光度法除眠爾通外，絕大部分的安眠鎮(zhèn)靜藥都有明顯的紫外吸收光譜,對(duì)一些成分簡(jiǎn)單的體外檢材,如藥片、注射液、剩余飲食物或胃內(nèi)容物和洗胃液中的藥物殘?jiān)?，?jīng)簡(jiǎn)單處理后即可用紫外光譜預(yù)試或篩選。三類安眠鎮(zhèn)靜藥的紫外光譜完全不同，可用于鑒別。 在定性的基礎(chǔ)上，常用于定量。常用于HPLC方法的檢測(cè)。第56頁(yè)，共79頁(yè)。苯馬并二氮卓類的紫外光譜 因取代基不同，光譜相同者甚少，不宜用做一類藥物的預(yù)試篩選，但可用于本類藥物的鑒別。第57頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類藥物的吸收 此類藥物吸收光譜相似，一般在250 260、300310nm范圍有兩個(gè)吸收帶，可用于預(yù)試，但不能

28、鑒別。因易氧化分解，分解產(chǎn)物氧化亞砜有四個(gè)吸收砜，且吸收較原藥長(zhǎng)移；所測(cè)的光譜常因混合物的比例不定，難有固定光譜，不易對(duì)照；為使光譜相對(duì)固定，便于對(duì)照，可將樣液先用硫酸氧化或用鋅還原后再進(jìn)行檢測(cè)。第58頁(yè)，共79頁(yè)。巴比妥類的紫外光譜因解離情況不同，光譜隨樣品溶液的pH而變。5,5二取代巴比妥的解離如下：第59頁(yè)，共79頁(yè)。巴比妥類和導(dǎo)眠能的吸收波長(zhǎng) nm 酸性 弱堿性 強(qiáng)堿性 pH2 pH910 pH13145,5-二取代巴比妥 211 240 2551, 5,5-三取代巴比妥 222 244 244 硫噴妥 238，287 304 304 導(dǎo)眠能 251.5 257.5 263.5(醇）

29、235（強(qiáng)，很快消失） 第60頁(yè)，共79頁(yè)。適用性5，5二取代巴比妥類藥物結(jié)構(gòu)相似，在同一酸堿性條件下，光譜相似，不能鑒別，但可用于預(yù)試和篩選。1， 5，5三取代巴比妥類藥物，因1位被占，不存在二級(jí)解離，故樣品在pH10和pH14的條件下，紫外光譜基本不變，可與5，5二取代巴比妥類藥物區(qū)別。導(dǎo)眠能光譜與巴比妥類的完全不同，可以資區(qū)別。第61頁(yè)，共79頁(yè)。紅外光譜法的應(yīng)用可反映物質(zhì)結(jié)構(gòu)的細(xì)微差別,可鑒別結(jié)構(gòu)非常相似的化合物, 如戊巴比妥和異戊巴比妥，后者因取代基末端有同碳二甲基 ，使C- H彎曲振動(dòng)的吸收峰1370cm-1分裂成1355cm-1和1378cm1兩個(gè)峰。因受樣品純度和樣品量的限制,

30、紅外在毒物分析中直接應(yīng)用的機(jī)會(huì)較少,僅用于一些含量和純度都較高的體外檢材.第62頁(yè)，共79頁(yè)。熒光分光度法的應(yīng)用吩噻嗪類有較強(qiáng)的熒光，苯馬并二氮卓類加稀硫酸也可產(chǎn)生熒光?？捎糜陬A(yù)試、薄層顯色、高效液相色譜檢測(cè)等。因吩噻嗪類分解產(chǎn)物較復(fù)雜，不宜直接用光譜定性，如需定量可先加過(guò)氧化氫氧化，而后測(cè)定氧化產(chǎn)物的熒光。 藥物 熒光顏色鹽酸氯丙嗪 黃綠色 鹽酸異丙嗪 藍(lán)色 奮乃靜 黃綠色 三氟拉嗪 黃色 泰爾登 藍(lán)色 第63頁(yè)，共79頁(yè)。薄層色譜法的特點(diǎn)和適用性特點(diǎn)簡(jiǎn)單、快速、成本低分離度和檢測(cè)靈敏度有限適用體外檢材成分較簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單且含量較高，經(jīng)提取凈化、濃縮后，一般都可用此法檢驗(yàn)。因此類毒物毒性較小，中毒

31、死亡往往需要較大量，故有時(shí)體內(nèi)檢材也可用此法檢出。第64頁(yè)，共79頁(yè)。薄層色譜法檢驗(yàn)苯馬并二氮卓類吸附劑 硅膠G展開劑苯:丙酮: 28氨水（50 : 10 : 5）丙酮: 28氨水（99 : 1）叔丁醇: 1mol/L氨水（27 : 3）需氯仿:乙醇:丙酮（8 : 1 : 1）顯色劑 碘化鉍鉀（橙色）；50% 硫酸和乙醇混合液（熒光） 說(shuō)明此類藥物為弱堿性，一般堿性展開劑的效果較好。此類藥物較多，單一條件很難將所有藥物完全分開，需通過(guò)不同的條件分離。第65頁(yè)，共79頁(yè)。薄層色譜法檢驗(yàn)吩噻嗪類吸附劑和展開劑硅膠板 a.甲醇:水（7 : 3） b.環(huán)己烷:二乙胺（9 :1） c.苯:環(huán)己烷:二乙胺

32、（15 :75 : 20）堿性板 a.甲醇:氯仿（1 : 9） b.甲醇:濃氨水（100 : 1.5）顯色劑 熒光、硫酸、氯化鈀試劑說(shuō)明堿性較強(qiáng)，常因硅膠吸附而使斑點(diǎn)拖尾，可通過(guò)鋪堿性硅膠板或于展開劑加入適量堿來(lái)改善分離效果 。在展開劑中加入適量堿，可拉開幾種藥物斑點(diǎn)的Rf值的距離。此類藥物易氧化分解，常出現(xiàn)多個(gè)斑點(diǎn)，不宜對(duì)照，可先將樣品在原點(diǎn)氧化或分解后再行展開；第66頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類藥物薄層的Rf值第67頁(yè)，共79頁(yè)。吩噻嗪類藥物薄層斑點(diǎn)顯色第68頁(yè)，共79頁(yè)。薄層色譜法檢驗(yàn)巴比妥類展開劑氯仿:丙酮（41）乙酸乙酯:甲醇:濃氨水（80 :10 :5）異丙醇:氯仿:濃氨水（9 :9 :

33、2）顯色劑硫酸汞-0.2%二苯卡巴腙醇液, 白色紫堇色;N，2，6-三氯對(duì)苯醌亞胺（ NCBI） ，藍(lán)色；高錳酸鉀，司可巴比妥褪色。說(shuō)明 硫噴妥易分解成戊巴比妥，故常顯兩個(gè)斑點(diǎn)。第69頁(yè)，共79頁(yè)。氣相色譜法檢驗(yàn)安眠鎮(zhèn)靜藥特點(diǎn)靈敏度高、分離能力強(qiáng)。要求被分析物易揮發(fā)、對(duì)熱穩(wěn)定。適用體內(nèi)、成分復(fù)雜、含量低的檢材。苯馬并二氮卓類 部分適用。有些熱穩(wěn)定性差或極性太大的效果不好，如去甲羥基安定。多數(shù)易被固定相吸附而造成拖尾或難出峰，宜選OV-1、DB-!等弱極性固定液吩噻嗪類 受熱易分解，效果不好。巴比妥類一般選用中等極性柱，如OV-17；FID檢測(cè)器。極性較大，普通條件下峰形不佳，可通過(guò)甲基衍生化可

34、改善峰形，并提高檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性。第70頁(yè)，共79頁(yè)。GC法檢測(cè)苯馬并二氮卓類藥毒物實(shí)例 取1mL血液檢材，加入50L內(nèi)標(biāo)液，1mL飽和NaHCO3溶液，混合均勻，然后加入0.5gNaCl，混合后加入3mL甲苯，在振蕩器上混合15min，離心分層，分出有機(jī)層并在氮?dú)饬飨麓蹈?，殘?jiān)?0L甲苯溶解，取2L進(jìn)樣。色譜條件為：DB-1毛細(xì)管柱（15m 0.53mm i.d.，膜厚1.5m），ECD檢測(cè)器，初始柱溫為150（1min），經(jīng)程序升溫（16/min）至300（10min），進(jìn)樣口280，檢測(cè)器300，載氣為氦氣（1mL/min）。幾種藥物在此色譜條件下的保留時(shí)間見(jiàn)表5-3。 表5-3 幾

35、種常見(jiàn)苯駢二氮雜類藥物的GC保留時(shí)間 名稱 保留時(shí)間(min) 名稱 保留時(shí)間(min) 氯硝西泮 10.45 地西泮 8.60 艾司唑侖 10.50 硝西泮 10.00 三唑侖 11.30 氟西泮 10.10 第71頁(yè)，共79頁(yè)。高效液相色譜法檢驗(yàn)安眠鎮(zhèn)靜藥特點(diǎn)靈敏度較高、分離能力強(qiáng)。應(yīng)用體內(nèi)檢材、樣品有紫外吸收的。三類藥物均可適用，特別對(duì)熱穩(wěn)定性差或極性大的，效果較GC 好。一般采用C18反相液相色譜法；紫外或熒光檢測(cè)。三類藥物均具有酸堿性，常通過(guò)在流動(dòng)相中加入適量酸抑制解離或形成離子對(duì)可改善分離效果。第72頁(yè)，共79頁(yè)。HPLC法檢測(cè)苯駢二氮卓類藥物實(shí)例 取2mL血液或血清檢材，加入20L內(nèi)標(biāo)溶液及2mL丙酮，充分?jǐn)嚢杌旌虾箅x心分離，取上清液在減壓下?lián)]干溶劑，殘?jiān)?.2mol/L硼酸緩沖溶液（pH9）溶解，將溶解液通過(guò)C18固相萃取柱，先用1mL水沖洗，再用1mL 15%甲醇水溶液沖洗，然后用甲醇將藥物洗脫，洗脫液50下在氮?dú)饬髦写蹈桑瑲堅(jiān)?0L甲醇溶解，取10L