220505 Passive Lysis Buffer 2.0被動裂解液2.0使用手冊V1.0

1、天凈沙系列CAT#:220505-100低溫運(yùn)輸，-20保存被動裂解液2.0Passive Lysis Buffer 2.0使用手冊V1.0江蘇天凈沙基因診斷技術(shù)有限公司網(wǎng)址： HYPERLINK ；電話：400-6005850；電郵：order產(chǎn)品及特點(diǎn)被動裂解液2.0（Passive Lysis Buffer 2.0，PLB2.0）是本公司常規(guī)被動裂解液的升級版，專門用于裂解培養(yǎng)細(xì)胞，用于后續(xù)檢測裂解物中熒光酶活性。它具有下列特點(diǎn)：裂解力比常規(guī)被動裂解液更強(qiáng)，使用量只有1被動裂解液的1/5。以1濃度提供，不需要稀釋后再使用。裂解物不經(jīng)過任何處理可以直接進(jìn)行BCA蛋白濃度測定，而常規(guī)的被動裂

2、解液跟BCA濃度測定不兼容，裂解物必須稀釋10倍或者進(jìn)行蛋白沉淀后才能測定其濃度。原位對哺乳動物貼壁培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行快速裂解，無需對貼壁細(xì)胞進(jìn)行刮擦或凍融循環(huán)。 螢火蟲光素酶的底物熒光素和海腎熒光素酶的底物腔腸素在本產(chǎn)品中的自發(fā)光極其微弱，故用本產(chǎn)品得到的細(xì)胞裂解物可以直接用于后續(xù)的螢火蟲光素酶和海腎熒光素酶活性測定。跟多個廠家的熒光酶檢測試劑盒兼容，包括本公司的一管式雙熒光酶檢測試劑盒（CAT#220501），Promega的Dual-LuciferaseReagent Assay System（CAT#E1910）和Biotium的Firefly & Renilla Luciferase Si

3、ngle Tube Assay Kit（CAT#30081）。本產(chǎn)品只能用于科研。規(guī)格及成分本產(chǎn)品使用塑料管包裝成份編號規(guī)格包裝材料被動裂解液2.0（Passive Lysis Buffer 2.0）220505100 mL100mL本色瓶使用手冊220505sc1份無運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20保存，有效期一年。自備試劑雙蒸水，PBS 使用方法一、對6孔板和12孔板中的培養(yǎng)細(xì)胞裂解在多孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞生長到不超過95%的匯合度的時候，吸棄培養(yǎng)基，小心用自備的PBS洗滌細(xì)胞一次。離心干甩一次，小心去除多孔板中殘留的液體。每孔加入適量的本產(chǎn)品（1被動裂解液2.0），用移液槍吹打，打散細(xì)胞。不同多孔

4、板的被動裂解液2.0加入量請參考下表：多孔板最適被動裂解液2.0加入量6孔板100 uL12孔板50 uL室溫?fù)u床上緩慢搖15分鐘進(jìn)行細(xì)胞裂解。對過度生產(chǎn)的細(xì)胞，或少數(shù)沒有過度生產(chǎn)的細(xì)胞株，裂解時間可能需要延長1倍。由于熒光酶在被動裂解液2.0中比較穩(wěn)定，活性并不會降低。取2uL上步得到的裂解物，加入148uL雙蒸水，用于BCA法蛋白濃度測定。在多孔板中直接進(jìn)行后續(xù)的熒光酶檢測。如果需要長期保存，可以將細(xì)胞裂解液吸至1.5 ml離心管，412000 rpm （13200g）離心10 min，將上清液（含熒光酶）轉(zhuǎn)移到新的管子中。此上清液可以在常溫放置6小時，在冰上可以放置16小時，在-20可以

5、放置1月，在-80可以放置半年以上。用此上清液進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)時，凍融次數(shù)不要超過3次，否則熒光酶的活性會逐漸降低。二、對12孔板-培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)細(xì)胞裂解在多孔板或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的細(xì)胞生長到不超過95%的匯合度的時候，吸棄培養(yǎng)基，小心用自備的PBS洗滌細(xì)胞一次。離心干甩一次，小心去除多孔板或培養(yǎng)瓶中殘留的液體。每孔或每個培養(yǎng)瓶中加入適量的本產(chǎn)品（1被動裂解液2.0），用移液槍吹打打散細(xì)胞。不同多孔板或培養(yǎng)瓶的本產(chǎn)品加入量請參考下表：多孔板和培養(yǎng)瓶最適被動裂解液2.0加入量10020mm培養(yǎng)瓶200 uL6015mm培養(yǎng)瓶80 uL3512mm培養(yǎng)瓶50 uL6孔板100 uL12孔板50 uL用一次性細(xì)胞刮子充分刮落貼壁細(xì)胞。傾斜多孔板或培養(yǎng)瓶，待裂解物匯集后，再用移液搶充分吹打數(shù)次。將裂解物轉(zhuǎn)移到新的容器中，取2uL上步得到的裂解物，加入148uL雙蒸水，用于BCA法蛋白濃度測定。剩余樣品可直接用于后續(xù)熒光酶測試。如果需要長期保存，可以將細(xì)胞裂解液吸至1.5 ml離心管，412000 rpm （13200g）離心10 min，將上清液（含熒光酶）轉(zhuǎn)移到新的管子中。此上清液可以在常溫放置6小時，在冰上可以放