鄭州市動物園東北虎細小病毒病的診斷

1、幼齡貓科動物犬細小病的李同義，450008鄭州市動物園 鄭州摘要：細小病是常見的傳染病，可以多種肉食動物，特別是幼齡動物高，率高。犬科病的技術(shù)已經(jīng)很成熟，通過臨診檢查、試劑盒檢測、病理解剖學(xué)檢查和 PCR 檢測即可確動物細小診。貓科動物（東北虎、非洲獅）細小稱為貓瘟熱，較常見，而貓科動物犬細小的目前分析和 PCR 檢測，尚未見。對動物園幼東北虎、幼非洲獅犬細小病例發(fā)病情況進行全面確診為犬細小病。：貓科動物；犬細??；PCRThe young feline animal diagnosis of canine parvodiseaseTong-yi Li, Jian-tang Wang, Chao

2、-jun Li , CZhengzhou zoo Zhengzhou 450008-pu PeiAbstract:Parvodisease is the common infectious disease, can infect a variety of predators, espelly highincidence of young animals, high mortality. Canine parvodisease diagnosis technology is already very mature,through clinical examination, detection k

3、it, pathological anatomy examination and PCR detection can be diagnosed.Cats (Siberian tiger, African lion) infection parvosaid to feline panleukopenia, more common, and cats ofcanine parvoinfection has not been reported. The young tiger, young African lion in zoo infected canineparvodisease.illness

4、 of comprehensive diagnosisysis and PCR detection, diagnosed with canine parvoKey words: feline; canine small; diagnosis; PCR肉食動物細小屬于細小科細小屬，可以多種動物，臨以幼齡動物的發(fā)燒、性腸炎、脫水、白細胞減少和心肌炎等癥狀為主要特征。在我國，無論是家養(yǎng)動物還是野生動物均有細小病的流行，對我國犬科、貓科和鼬科等家養(yǎng)、圈養(yǎng)、野生和經(jīng)濟動物的危害十分嚴重1。近年來，隨著的接種，家養(yǎng)寵物尤其是犬貓的細小病得到良好的控制，而非家養(yǎng)的可動物該疾病也時有發(fā)生。目前，臨對于犬貓細小

5、病的主要通過臨診檢查和試劑盒檢測，野生動物細小病沒有的試劑盒檢測。文章對動物園貓科野生動物犬細小病的過程進行論述。1 臨床資料2014 年 2 月動物園診治幾只發(fā)病東北虎、非洲獅，5-10 月齡，開始表現(xiàn)為精神沉郁，厭食，病初表現(xiàn)發(fā)熱，軟便或輕微，鼻鏡干燥；結(jié)膜前期、后期蒼白；初期嘔和劇烈腹瀉。起吐物為肉塊，之后為粘液狀（圖 1）及黃綠色液體，隨后發(fā)展成為頻繁初糞便帶果凍狀粘液，后糞便呈番茄醬色或咖啡色甚至血便（圖 2），味腥臭，排便次數(shù)不定，有里急后重的癥狀。血便后病虎表現(xiàn)為眼球下陷，全身無力，體重明顯下降，后期出現(xiàn)噴射狀腹瀉，帶有特別難聞的腥臭味。迅速消瘦、脫水，眼窩塌陷，毛細再充盈時間延

6、長。被毛凌亂，皮膚無彈性，四肢發(fā)涼，精神高度沉郁，休克，于腹瀉后 3-5 天左右從病初癥狀輕微到嚴重一般超過 2 天，整個病程一般不超過二周。有的出現(xiàn)呼吸。，走路搖擺，甚至站立。圖 1 粘液狀物圖 2 血便2方法2.1 臨診檢查部分患病動物體溫升高 40以上，嚴重者體溫低于正常值。心區(qū)聽診有心內(nèi)性雜音，有的肺部聽診有溫進行細胞計數(shù)。患病虎血液 1ml 至真空肝素抗凝管中，混勻后用血常規(guī)分析儀2.2 犬細小CPV 試劑盒快速法將試劑盒取出平放，用棉簽取患病虎直腸糞便放入配套稀釋液中，充分混勻后用吸管吸取上清液，加 2-3 滴至板條一端加樣，可見有紫色條帶向試紙窗口另一端移動，5min左右判定結(jié)果

7、。反應(yīng)槽內(nèi)只出現(xiàn) C 線出現(xiàn)為2.3 病理解剖學(xué)檢查，C 線、T 線均出現(xiàn)為陽性。眼觀病變尸體消瘦，皮膚缺乏彈性，可視黏膜蒼白，嚴重脫水,剖檢可見心肌松軟，顏色變淡，肺充血、；膽囊充盈，肝質(zhì)脆易碎；腹腔積液，漿膜面有素性滲出物；胃底部有性炎癥，呈深紅色；小腸中段腸管擴張，腸內(nèi)容物水樣并混有血液，腸黏膜嚴重脫落、呈暗紅色，空腸、回腸黏膜面充血、，腸內(nèi)容物為淡紅色枯液；直腸內(nèi)膜也較多；腸系膜淋病料 PCR 檢測病料處理腫大、充血、，切面。采取東北虎全血，4 3000r/min 離心 5min 收集，4保存?zhèn)溆?。東北虎糞便加入 PBS 緩沖液充分研磨，反復(fù)凍融 3 次，4 12000r/min 離心

8、 10min 收集上清液。2.4.2 主要試劑DNA 提取試劑盒、MarkerDL2000、2Taq P公司。2.4.3 主要儀器ix 酶、蛋白酶 K、瓊脂糖凝膠購自 TakaraPCR 儀（Thermo）、凝膠成像系統(tǒng)（ProteinSimple）、電泳儀（DYCZ-28A）。2.4.4 PCR 方法應(yīng)用 Primremier 5.0，參照 Genb中登錄的 CPV VP2 蛋白（GenB引物由登錄號：M38246）設(shè)計一對特異性引物，擴增 CPV VP2部分片段 630 bp，生工生物工程技術(shù)服務(wù)。上游引物：5-ACCGTTACTGACATTCGCT -3，下游引物：5-GTTAAAGTC

9、ACCCA-3。取 100L 臨床樣品，按 DNA 提取試劑盒提取總 DNA 做為 PCR 反應(yīng)模板。在 20L 反應(yīng)體系中，各組分含量為：上下游引物各 20mol/L，模板 2L，2Taq Pix 酶 10 L，ddH2O補足 20L，擴增參數(shù)為 94 5 min； 95 10 s、58 10 s、72 30 s，循環(huán) 35 次，同時做對照。PCR 產(chǎn)物經(jīng) 1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測。3結(jié)果3.1 臨床結(jié)果此次發(fā)病呈性，且出現(xiàn)高燒、血便，高度懷疑為傳染性疾病?；疾游锒嗨烙诿撍㈦娊赓|(zhì)紊亂、酸個/mm3），淋巴細胞增多。和心肌炎。血液結(jié)果顯示白細胞顯著減少（4 0008 0003.2 犬細小

10、用犬細小劑盒檢測為CPV、貓瘟熱、弓形蟲試劑盒快速結(jié)果CPV 試劑盒檢測發(fā)病動物的糞便，結(jié)果為弱陽性（如圖 3-1）；貓瘟熱試（圖 3-2）；弓形蟲試劑盒檢測為（圖 3-3）。圖 3-1 CPV 試劑盒圖 3-2 FPV-Ag圖 3-3 Toxopl.Ab結(jié)果結(jié)果結(jié)果3.3 病理解剖學(xué)檢查結(jié)果眼觀病變尸體消瘦，皮膚缺乏彈性，可視黏膜蒼白，嚴重脫水,剖檢可見心肌松軟，顏色變淡（圖 4-1），肺充血、（圖 4-2）；膽囊充盈，肝質(zhì)脆易碎；腹腔積液，漿膜面有素性滲出物（圖 4-3）；胃底部有性炎癥，呈深紅色；小腸中段腸管擴張，腸內(nèi)容物水樣并混有血液，腸黏膜嚴重脫落、呈暗紅色，空腸、回腸黏膜面充血、，

11、腸內(nèi)容，切面物為淡紅色枯液；直腸內(nèi)膜也較多（圖 4-4）；腸系膜淋。腫大、充血、圖 4-1 心肌松軟、顏色變淡圖 4-2 肺充血、圖 4-3 腹腔積液、圖 4-4 腸道充血、素性滲出物3.4 PCR 檢測結(jié)果利用設(shè)計的引物進行 PCR 擴增 ，經(jīng) 1.0 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，結(jié)果顯示，從糞便和中擴增均出約 630 bp 的片段(圖 5)。圖 5 CPV VP2綜合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變及。的 PCR 擴增檢測方法將該病例確診為貓科動物犬細小分析細小犬細小同屬于細小流行特點（Canines parvo,CPV）和貓細?。‵eline parvo,FPV）科細小屬，無囊膜單鏈 DNA，許多

12、研究證實，兩者之間具有共同的抗原組成，能發(fā)生交叉性學(xué)反應(yīng)。迄今為止，CPV 只有一個抗原型，即 CPV-2，并有新亞型 CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c 出現(xiàn)2-5。CPV 除能科動物，新亞型還能貓、豹、熊、虎等動物6，此為國外犬外，還能，國內(nèi)野生貓科動物是全身性的，狐貍、狼等犬FPV野生貓科動物的較多，而 CPV此次病倒證實了 CPV 也可不是腸腔到達腸黏膜，主要家貓已有7，目前未見野生貓科動物。細小CPV 的，通過血流而兩種類型的細胞：腸上皮細胞和心肌細胞，導(dǎo)致腸腺上皮細胞脫落，出現(xiàn)腸道癥狀和心肌炎癥狀。同時可引起淋巴壞死，破壞骨髓增殖細胞，導(dǎo)致淋巴細胞和白細胞減少8-10。4.2

13、 細小的臨床確診目前已經(jīng)建立的細小檢測方法有很多種，如血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗、電鏡、分離（VI）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）等方法11，就臨床而言，犬用細小（膠體金）快速測試條測試操作簡便快速，結(jié)果易于分析判定，但是卻沒有針對虎、獅等野生動物的快速測試條。本次從動物園東北虎、非洲試劑盒檢測，測試線不十分明獅臨床表現(xiàn)癥狀嚴重疑似細小病，使用犬 CPV 快速顯，表現(xiàn)弱陽性。為進一步確診，采用 PCR 檢測，顯示為強陽性，PCR 具有較好的特異性，靈敏度遠遠高于試劑盒4.3 致病性觀察本次貓科動物發(fā)病方法，為該疾病的提供最有力的。均在 5-10 月齡，相鄰的

14、成年動物未見發(fā)病，說明犬細小感染貓科動物幼齡動物敏感性強，而成年動物未見發(fā)病癥狀，是否帶毒未做檢測（采樣原因）。幼年發(fā)病動物從率看，首次發(fā)病率約 50%。1 年后，再次有發(fā)病動物癥狀有所減輕，病程縮短，率明顯下降，因此次發(fā)病僅一只動物，經(jīng)治療很快痊愈。4.4 幼年貓科動物犬細小病的預(yù)防野生動物東北虎、非洲獅屬于保護動物，數(shù)量較少，近年來頻有貓科野生動物細小，危性，首(FPV)的12-14，因其特殊的生活習(xí)性不宜采取預(yù)防措施，進行及時治療較害極大，亟待引起重視。本次動物園貓科動物發(fā)病(為 CPV 而非 FPV)即呈次發(fā)病率極高，約為 50%，且病獸的物、唾液、糞便和尿液中含毒量最高，病獸不斷向外

15、排毒而其他健康動物及易感的野生貓科動物。犬細小很難徹底清除，對患病動物進行并對其居住環(huán)境進行全面有效，來預(yù)防健康動物的是非常有必要的。臨犬細小犬貓細小病可以對犬貓細小起到良好的控制作用，對野生貓科動物病尚未用過，是否有效有待考究。參考文獻：1楊,夏咸柱. 肉食獸細小研究概述A. 中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)外科學(xué)分會、中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會小動物醫(yī)學(xué)分會.獸醫(yī)外科學(xué)第 13 次學(xué)術(shù)研討會、小動物醫(yī)學(xué)第 1次學(xué)術(shù)研討會暨奶牛疾病第 3 次學(xué)術(shù)會小動物醫(yī)學(xué)分會:,2006:7.集C.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)外科學(xué)分會、中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2345,. 犬細小VP2的遺傳變異分析J.學(xué)報,2009,06:452-459.

16、,. 犬細小,. 犬細小:從到進化J. 微生物學(xué)報,2011,07:869-875.的分離鑒定、序列分析及VP2的融合表達D.中國農(nóng)業(yè),2008.,郭冬春,. 虎源細小的分離鑒定及其VP2分析J. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報,2015,09:721-724.6Decaro N, Desario C, Addie D D, Mar la V ,Vieira M J, Elia G, Zicola A, Davis C ,Thompson G, Thiry E,Truyen U,Buonavoglia C. 2007. The study molecular13(8):1222-1224.demiology of canine parvo, Europe. Emerg Infect Dis,78910，師志海.貓瘟熱的與防治J. 獸醫(yī)導(dǎo)刊,2007,02:55-56.，. 犬細小病的病理學(xué)觀察J. 動物醫(yī)學(xué)進展,2009,08:125-128