原代培養(yǎng)細胞課件

1、動物的克隆“動物的細胞和組織培養(yǎng)” 是動物克隆的技術基礎“細胞培養(yǎng)”也是細胞生物學的主要技術基礎。將動物體內的一部分組織取出分散成單個細胞人工控制的培養(yǎng)條件下細胞得以生存并保持生命活動現象生長、分裂乃至接觸抑制和有規(guī)律的衰老、死亡性能等機械消化、胰酶消化（一）定義： P28一、動物細胞的培養(yǎng)原理：細胞增殖無菌、無毒 （消毒、滅菌 ；可添加抗生素；定期更換培養(yǎng)液，清除代謝廢物 ）營養(yǎng)： （液體培養(yǎng)基：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等） 溫度和pH ：（36.50.5，pH7.27.4 弱堿性）氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）（二）操作流程及過程解讀： 離體的動物細胞

2、如何才能保證其正常的生命活動？需要哪些條件？ 1、培養(yǎng)條件：CO2培養(yǎng)箱,維持培養(yǎng)的PH值可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質動物體內一部分組織分散成單個細胞 機械消化 或 胰蛋白酶酶解原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞懸浮液細胞株或細胞系動物培養(yǎng)液細胞形成生長暈并增大取樣剪碎分裝含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。2、過程：（P29圖）應選擇幼齡動物組織或胚胎使細胞與外界充分接觸；與外界物質交換更迅速高效；？取動物胚胎或幼齡動物器官和組織因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強機械消化：剪碎組織胰蛋白酶酶解消化分散成單個細胞，制成細胞懸浮液2、過程：（P29圖）消化分解動物組織間的膠原蛋白和

3、其他成分，獲取單個細胞轉入培養(yǎng)液中進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng) 貼滿瓶壁的細胞用胰蛋白酶處理使其從瓶壁上脫落下來，分散成單個細胞，制成細胞懸液？特點：貼壁生長、接觸抑制接觸抑制細胞膜上有糖類和蛋白質共同構成的糖蛋白,也叫做糖被,他在細胞上起識別作用。當細胞增殖到一定程度,也就是互相挨在一起的時候,糖蛋白識別了這種信息,就會使細胞停止繼續(xù)繁殖,這種現象就叫做接觸抑制。細胞系、細胞株原代培養(yǎng)細胞系（可傳代）原代培養(yǎng)物在首次傳代時就成為細胞系 連續(xù)細胞系 有限細胞系可連續(xù)傳代傳代培養(yǎng) 細胞株（具特殊性質）連續(xù)細胞株有限細胞株挑選細胞系：泛指可以傳代的細胞；細胞株：具有特殊性質的細胞系不可連續(xù)傳代原代

4、培養(yǎng)：即直接從體內取出細胞、組織和器官立即進行培養(yǎng)；沒有分瓶培養(yǎng)之前的細胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細胞分成若干份，接種到若干份培養(yǎng)基中（分瓶），使其繼續(xù)生長、增殖。即稱為傳代培養(yǎng)。強調幾個概念：細胞系:（2）連續(xù)細胞系:（1）有限細胞系：連續(xù)細胞株：連續(xù)多次有限細胞株：次數有限細胞株:泛指可傳代的細胞不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系、認為其發(fā)生了轉化：遺傳物質發(fā)生了改變 大多數具有異倍體核型；有的是惡性細胞系，具有異體致瘤性，不保留接觸抑制，有的獲得不死性（保留接觸抑制，不致癌）例：二倍體細胞通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)或細胞系中獲得的具有特殊性質的細胞具有恒定的染色體

5、組型、同功酶類型、病毒敏感性和生化特性。強調幾個概念：（1）生產蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾 素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質。（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。通過細胞培養(yǎng)檢測有毒物質動物細胞培養(yǎng)的應用：？如何獲得純系的細胞系？ “克隆培養(yǎng)法”或“細胞克隆 ” 把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之繁衍成一個新的細胞群體的技術。 概念：產物具備怎樣的特點？遺傳性狀均一、表現的性狀相似，稱為純系？一個細胞克隆培養(yǎng)法（細胞克?。┘兿颠m合于克隆的細胞： （原因？） 無限細胞系、轉化細胞系、腫瘤細胞 對環(huán)境有較大適應范圍和具有較強獨立生存能力的細胞？ 怎樣保證是純系？ 基本要求：必

6、須保證所建成的克隆來源于“單個細胞”。？原代培養(yǎng)細胞、有限細胞系 如何提高細胞克隆的形成率？選擇適宜的培養(yǎng)基添加血清 以滋養(yǎng)細胞支持生長激素刺激（如胰島素）使用CO2培養(yǎng)箱，調節(jié)pH ？(胎牛血清最好，可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質)維持培養(yǎng)的pH值促進對糖的利用液體培養(yǎng)基失去增殖能力的小鼠成纖維細胞 成纖維細胞：是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的中胚層的間充質細胞分化而來。胞體多突起，呈星狀，細胞質豐富、核較大從普通細胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細胞系。例如研究缺少某種特殊蛋白的細胞，可以發(fā)現正常細胞中這種蛋白的功能。作為科研材料，是研究遺傳規(guī)律和生理特性的重要材料。細胞克隆最主要

7、的用途？動物細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)嚴格來說，從單個細胞開始、從組織開始、從器官（器官的原基、器官的一部分或整個器官）開始的培養(yǎng)分別叫做細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)。但無論怎么樣，三種培養(yǎng)中主要的生命活動都是以“細胞”為單位的，且長期培養(yǎng)的結果通常只能使單一類型的細胞保存下來，最終成了簡單的細胞培養(yǎng)，這三種培養(yǎng)一般統稱為“組織培養(yǎng)”。4、 動物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展：1.1885年，雞神經板在生理鹽水中培養(yǎng)成活。2.1903年，將皮膚及白細胞培養(yǎng)于腹水及血清中，細胞存活達一個月，且觀察到細胞分裂3.1907年，將蛙胚神經管培養(yǎng)在蛙淋巴液中，成功看到神經末端的阿米巴運動。4.1912年，對雞胚心

8、臟組織塊進行培養(yǎng)。5. 1943年，獲得長期培養(yǎng)細胞系L-細胞系。書P29 1951年，獲得海拉細胞系?！敖M織培養(yǎng)”一詞產生真正的組織培養(yǎng)開始；創(chuàng)立了懸浮培養(yǎng)法成功進行了傳代培養(yǎng)；發(fā)明了卡氏瓶；研制了人工培養(yǎng)液大量細胞系的建成標志著組織培養(yǎng)工作進入了全新階段五、動物組織培養(yǎng)技術的發(fā)展：真正開始1885年雞神經板在生理鹽水中培養(yǎng)成活組織培養(yǎng)一詞誕生1903年 皮膚及白細胞培養(yǎng)于腹水和血清中，結果細胞的成活期達1個月，并且看到細胞分裂1907美國科學家將一部分蛙胚神經管培養(yǎng)在蛙淋巴液中，成功看到了神經纖維末端的阿米巴運動，解決了神經纖維起源問題，并創(chuàng)立了懸浮培養(yǎng)法萌芽1912年雞胚細胞的培養(yǎng)1943科學家在致癌物20-甲基膽蒽的誘導下培養(yǎng)小鼠結締組織，獲得了能在小鼠體內生長肉瘤的L-細胞系1951通過對黑人婦女的宮頸癌組織的體外連續(xù)培養(yǎng)，獲得腫瘤細胞系即不死細胞系-海拉細胞系組織培養(yǎng)工作進入了全