手把手教你如何進行柱層析分離

1、手把手教你如何進行柱層析別離常說的過柱子應(yīng)該叫柱層析別離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠 或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分的經(jīng)驗成分太多，就關(guān)于色譜 柱的使用，小代了一下資料，希望對您能有所幫助 1、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品提供的時間，但是會減低 柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時候，常壓柱是效率最高的，但 是時間也最長，比方，天然化合物的別離，一個柱子幾個月也是有的。 減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是， 由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)（有時在柱子外面有水汽凝 結(jié)），以及有些比擬易分解的東西可能得不到，而且還必須同時使

2、用 水泵抽氣（很大的噪音，而且時間長）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱， 對它有比擬深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過 減壓的念頭了。加壓柱是一種比擬好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗 劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚 缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的別離中適用。壓力不可 過大，不然溶劑走的太快就會減低別離效果。個人覺得加壓柱在普通 的有機化合物的別離中是比擬適用的。2、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是又粗又長的最好柱子長了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點就?。ǚ?映在柱子上就是樣品層比擬薄），這樣相對的減小了別離的難度。試 想如果柱子

3、十厘米，而樣品就有二厘米，那么別離的難度可想而知， 恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那 么各組分就比擬容易得到完全別離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比 較多的硅膠和溶劑了，不過這些本錢相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么 T （有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了局部浪費）。 現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1： 5-10,書中寫硅膠量是樣品量的 3040倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比擬 開（是指在所需組分rf在0.20.4,雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少 用硅膠，用小柱子（例如，200毫克的樣品，用50pxx500px的柱子）； 如果，相差不到0.1,

4、就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑， 比方，用75Px的，也可以減小淋洗劑的極性等等關(guān)于無水無氧柱， 適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品?？梢詽裰部梢愿芍?。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一 次，因為，溶劑和硅膠飽和時放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要 別離的是敏感的東東，小心不為過。也是因為別離的東西比擬敏感， 所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。3、關(guān)于濕法、干法上樣濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯 等。但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上 柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出， 這一般都是比擬大量的

5、樣品才會出現(xiàn)，是因為硅膠對樣品的吸附飽 和，而樣品本身又是比擬好的固體才會發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得 到大局部的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就 是了，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比方，DMF, DMSO 等，會隨著溶劑一起走，顯色是一個很長的脫尾），這時就必須用干 法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1： 1,我覺得是越少越好, 但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒 有吸附在硅膠上）。4、溶劑的選擇當(dāng)然是最廉價，最平安，最環(huán)保的了，所以，大多項選擇用石油醐，乙酸 乙酯。文獻中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需

6、要不要用不然銀 子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過，因為極性很小，有時還是非它 不可。乙醛也可以用，但是，就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑 流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是，要知道，它和硅膠的吸附是一個放熱過程, 所以，夏天的時候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時候會好一些。 甲醇，據(jù)說能溶解局部的硅膠，所以，產(chǎn)品如果想過元素分析的話要 留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比方，重結(jié)晶等。其他溶劑用的相對較少, 要依個人的不同需要選擇。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（廉價嘛），我們這里是 用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低 的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看

7、見有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想 而知了，所以在比擬嚴格的柱分時就要對溶劑重蒸。當(dāng)然，過原料時 就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外，溶劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能 節(jié)省局部經(jīng)費，缺點是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在 過柱同時進行的是減壓旋蒸，石油酸和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的 不同會導(dǎo)致極性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋洗時比擬合 適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓, 因為在減壓旋蒸時會有局部低沸點的雜質(zhì)一起出來，常壓時就會減少 這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反響那就慘了。5、關(guān)于操作問題1）裝柱:柱子下面的

8、活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以 采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝 實就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢）， 一定要均勻（不然樣品就會從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見 到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣 泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí) 了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響別離效 果，甚至作廢！2）加樣:用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞翻開，待溶劑層下降 至石英砂面時，再加少量的低極性溶劑，然后，再翻開活塞，如此， 兩三次，一般石英砂就基本是白色

9、的了。加入淋洗劑，一開始不要加 壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2100px就夠了），再 加壓，這樣防止了溶劑（如，二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。3）淋洗劑的選擇：感覺上要使所需點在Rf0.20.3左右的比擬好。不要認為在板上爬高 了分的比擬開，過柱子就用那種極性，如果Rf在0.6,即使相差0.2 也不容易在柱子上分開，因為柱子是一個屢次爬板的狀態(tài)?？梢酝ㄟ^公式的比擬：0.6/0.8 一次的別離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。4）樣品的收集：用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡，所以，如果 樣品與硅膠的吸附比擬強的話，就不容易流出。這樣就會發(fā)生，后面 的點先出，而前面的點后出。這時可以采用氧化鋁作固定相。另外，提供的試管大小要以樣品量而定，