菠菜色素提取和分離

1、關于菠菜色素的提取與分離第一張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗目的1、學習從植物中提取色素的方法。2、學習薄層色譜和柱色譜的原理及其操作方法。 第二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理 綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素(綠色) 、胡蘿卜素(橙黃色)和葉黃素(黃色)等多種天然色素。 通過柱色譜和薄層色譜對菠菜葉中的上述幾種色素進行分離。 第三張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理 薄層色譜，常用TLC表示，屬于固液吸附色譜?；衔镌诒影迳系奈絼ü潭ㄏ啵┖腿軇┱归_劑（流動相）之間進行分離，由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開劑上移時，它們進行不同程度的解

2、吸，從而達到分離的目的。也就是在反復的吸附解析吸附過程中，吸附能力較弱的溶質，首先被展開劑解析下來，隨展開劑推向前去；而吸附能力強的溶質解析較慢，被展開劑推移不愿，從而達到分離的目的。第四張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理展開前展開后吸附解析吸附解析第五張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理在色譜法中，展開劑移動的速率與溶質移動的速率的比值，常用比移值Rf來表示: 第六張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月溶劑的洗脫能力按下列次序遞增：石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、乙酸。吸附劑 常用吸附劑有氧化鋁、

3、硅膠等。吸附劑對化合物的吸附能力與分子的極性有關，極性越強，吸附能力越大，分子中含有極性較大的基團，其吸附能力也越強。實驗原理第七張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理前沿線色斑起始線第八張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理薄層色譜的用途： 1、化合物的定性檢驗2、快速分離少量物質3、跟蹤反應進程4、化合物純度的檢驗第九張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理 柱色譜是通過色譜柱來實現(xiàn)分離的。在色譜柱內裝有固體吸附劑(固定相)如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當液體流經(jīng)吸附劑時，由于吸附劑表面對液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫

4、劑(流動相)，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據(jù)不同顏色分段收集。第十張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗原理第十一張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗裝置第十二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗步驟1、菠菜色素的提取 2、薄層層析 3、柱層析 第十三張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月菠菜色素的提取1、研磨 在研缽中放入10 g新鮮并剪碎的菠菜葉，加入15 mL3：2(體積比)石油醚一乙醇混合液，適當研磨(不要研成糊狀，否則會給分離造成困難)，將提取液用滴管轉移到分液漏斗中。反復三次，合并提取液。第十四張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2

5、022年6月2、洗滌和干燥 向提取液中加入l0 mL飽和NaC1溶液，棄去水層，再用l0 mL蒸餾水洗滌兩次。將有機層轉入干燥的小錐形瓶中，加無水硫酸鈉干燥半小時。菠菜色素的提取第十五張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3、蒸餾 將干燥后的液體過濾至圓底燒瓶中，進行蒸餾，直至燒瓶中濃縮液1mL左右。菠菜色素的提取第十六張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月薄層層析1、點樣 先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細管吸取樣品，在起始線上小心點樣，斑點直徑一般不超過2mm。若在同一板上點幾個樣，樣點間距離應為1-1.5cm。第十七張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于202

6、2年6月2、展開 在層析缸中加入配好的展開劑，使其高度不超過1cm。將點好的薄層板小心放入層析缸中，點樣一端朝下，浸入展開劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開劑前沿上升到一定高度時取出，盡快在板上標上展開劑前沿位置。薄層層析第十八張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月薄層層析色素種類胡蘿卜素葉黃素葉綠素a葉綠素b展開劑1abRf展開劑2abRf薄層層析結果展開劑：（1）石油醚-丙酮，體積比為4:1 （2）石油醚-乙酸乙酯，體積比為3:2第十九張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月柱層析1、裝柱 在層析柱中加入60mL石油醚，稱取30g中性氧化鋁緩緩加入層析柱中。打開下端活塞，放出溶劑，直至氧化鋁表

7、面剩下12mm高，關閉活塞。 第二十張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月柱層析2、過柱 將菠菜色素的濃縮液用滴管小心滴加到層析柱頂部。加完后打開下端活塞，讓液面下降到柱面以下1mm左右，關閉活塞。加數(shù)滴石油醚，打開活塞，使液面下降經(jīng)過幾次反復，使色素全部進入柱體。 第二十一張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月柱層析3、洗脫 從柱頂加入石油醚-丙酮溶液（9:1），層析即開始進行，用錐形瓶收集。當?shù)谝粋€有色成分即將滴出時，取另一錐形瓶收集。接收完后用石油醚-丙酮溶液（ 7:3 ）洗脫，換錐形瓶接收。 第二十二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項1、點樣不能戳破薄層板面，各樣點間距1-1.5cm，樣點直徑應不超過2mm。2、展開時，不要讓展開劑前沿上升至底線。否則，無法確定展開劑上升高度，即無法求得Rf 值和準確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄層板上的相對位置。 3、層析