質(zhì)粒以及應(yīng)用

1、關(guān)于質(zhì)粒及應(yīng)用第一張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒是生物細(xì)胞內(nèi)固有的、能獨(dú)立于寄主染色體而自主復(fù)制、并被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子絕大多數(shù)的天然DNA質(zhì)粒具有共價(jià)、封閉、環(huán)狀的分子結(jié)構(gòu)，即cccDNA質(zhì)粒常見于原核細(xì)菌和真菌中,絕大多數(shù)的質(zhì)粒是DNA型的質(zhì)粒DNA的分子量范圍：1 - 300 kb質(zhì)粒的基本特征第二張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒的基本特征質(zhì)粒的自主復(fù)制性質(zhì)粒的不相容性質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性攜帶特殊的遺傳標(biāo)記第三張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒的自主復(fù)制性兩大復(fù)制類型：嚴(yán)緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒 1 - 3 拷貝 stringent plasmid松弛型復(fù)制控

2、制的質(zhì)粒 10 - 60 拷貝 stringent plasmid質(zhì)粒能利用寄主細(xì)胞的DNA復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行自主復(fù)制第四張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒的自主復(fù)制性：拷貝數(shù)的控制機(jī)制 質(zhì)粒DNA復(fù)制啟動控制控制復(fù)制引物與模板的結(jié)合oriE.coli ColE1 plasmid復(fù)制方向rop（+）RopRNA IIRNA I3553質(zhì)粒的自主復(fù)制性第五張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒的自主復(fù)制性：拷貝數(shù)的控制機(jī)制 質(zhì)粒DNA復(fù)制啟動控制控制復(fù)制起始因子與復(fù)制起始位點(diǎn)（ori）的結(jié)合PcopcopP/OrepreporiCopRep質(zhì)粒的自主復(fù)制性第六張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于

3、2022年6月任何兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時(shí)存在于一個(gè)細(xì)胞中，這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒的不相容性，不相容性的質(zhì)粒組成不相容性群質(zhì)粒的不相容性第七張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月接合型質(zhì)粒 能在天然條件下自發(fā)地從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一 個(gè)細(xì)胞（接合作用）非接合型質(zhì)粒 不能在天然條件下獨(dú)立地發(fā)生接合作用值得注意的是，某些非接合型質(zhì)粒（ColE1）在接合型質(zhì)粒的存在和協(xié)助下，也能發(fā)生DNA轉(zhuǎn)移，這個(gè)過程由 bom 和mob 基因決定20060421質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性第八張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月攜帶特殊的遺傳標(biāo)記野生型的質(zhì)粒DNA上往往攜帶一個(gè)或多個(gè)遺傳標(biāo)記基因，這使得寄主生物

4、產(chǎn)生正常生長非必需的附加性狀物質(zhì)抗性 抗生素、重金屬離子、毒性陰離子、有機(jī)物物質(zhì)合成 抗生素、細(xì)菌毒素、有機(jī)堿這些標(biāo)記基因?qū)NA重組分子的篩選具有重要意義第九張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月載體（vector） ，在基因工程重組DNA技術(shù)中將DNA片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的DNA分子。三種最常用的載體是細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒。 質(zhì)粒應(yīng)用運(yùn)送外源基因高效轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞為外源基因提供復(fù)制能力或整合能力為外源基因的擴(kuò)增或表達(dá)提供必要的條件載體的功能第十張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）具有復(fù)制起點(diǎn)（2）具有抗菌素抗生基因；（3）具若干限制酶單一識別位點(diǎn)

5、；（4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)克隆載體具備的條件：克隆載體：在載體上插入合適大小的外源DNA片段，并注意不能破壞載體的自我復(fù)制性質(zhì)，將重組后的載體引入到宿主細(xì)胞中，并在宿主細(xì)胞中大量繁殖。 克隆載體第十一張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月表達(dá)載體（Expression vectors）：在克隆載體基本骨架的基礎(chǔ)上增加表達(dá)元件（如啟動子、RBS、終止子等），使目的基因能夠表達(dá)的載體。 表達(dá)載體表達(dá)載體四部分：目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因 第十二張，PPT共十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(1)分子量盡量小，大于15kb時(shí)轉(zhuǎn)化效率低。(2)了解載體上基因位置/限制酶作用位點(diǎn)。(3)包含可供選擇的標(biāo)記性狀(基因) (4)應(yīng)有另一個(gè)遺傳標(biāo)記基因（抗生素常用），(5)最