獸醫(yī)流行病學(xué)血清流行病學(xué)revised

1、第十一章 血清流行病學(xué)第十一章 血清流行病學(xué)目的要求： 掌握血清流行病學(xué)的概念與主要用途 了解血清學(xué)試驗的解釋方法重點：血清流行病學(xué)的主要用途難點：血清學(xué)試驗的解釋方法 內(nèi)容提要第一節(jié) 概述第二節(jié) 血清抗體的測定第三節(jié) 血清學(xué)試驗的解釋第四節(jié) 血清庫1、概念：指用血清學(xué)（免疫學(xué)）和流行病學(xué)原理和方法來研究血清成分中出現(xiàn)和分布的規(guī)律，以闡明疾病在畜群中的分布和原因，并在采取相應(yīng)措施后，檢驗其效果血清中的成分： 特異性抗體、酶、微量元素、礦物質(zhì)、激素第一節(jié) 概述2、用途查明疾病的流行情況 未免疫動物 免疫動物疾病的地理分布檢查疫苗的免疫效果病因研究疫情預(yù)測和檢測3、方法（1）調(diào)查方法 A、短期調(diào)查

2、：確定診斷，暴發(fā)調(diào)查時測雙份血清 B、長期調(diào)查：種畜群的跟蹤，多次采樣（2）檢測的方法：HI，AGP，ELISA等（3）結(jié)果的分析 血清學(xué)結(jié)果：轉(zhuǎn)換成幾何均數(shù)，不用算術(shù)均數(shù)，利于t檢驗和F檢驗。 標準的采用：國際、國內(nèi)和地方第二節(jié) 血清抗體的測定一、抗體量的表示（一）滴度的對數(shù)轉(zhuǎn)換試驗檢測前往往將血清作倍比稀釋；2倍、10倍，兩者交叉應(yīng)用等；結(jié)果統(tǒng)計時必須轉(zhuǎn)換，常用倒數(shù)滴度和對數(shù)滴度；目的：保證滴度呈正態(tài)分布 1、算術(shù)平均數(shù) 對數(shù)滴度相加，除以樣本數(shù)； 2、幾何平均滴度 （GMT） 對數(shù)平均滴度的反對數(shù)，可通過查對數(shù)表或計算器計算。（二）平均滴度例如：對數(shù)平均滴度為 4.7 2 倍稀釋： 即2

3、GMT=4.7, GMT=2 4.7=26 換算成： 10GMT= 4.7x 102 10倍稀釋： 10GMT=4.7， GMT=10 4.7 先作10倍，后作2倍稀釋： 在取以2為底的對數(shù)前，應(yīng)除以10. 稀釋度為1/10，1/20，1/40，1/80，對數(shù)滴度為0,1,2,3表示平均滴度為1.5GMT/10=2 1.510 GMT/10=1.5x0.301=0.45取GMT/10 =0.45的反對數(shù) GMT/10=2.8 GMT=28結(jié)果的分析（1）感染率相同，但抗體滴度不同 表明，最近發(fā)生感染（2）滴度相同，但感染率不同二、抗體測定1、單系列稀釋測定： 本系統(tǒng)每稀釋度測定一次, 如，ND

4、V的HI測定2、多系列稀釋測定 本系統(tǒng)每稀釋度測定幾次，如中和試驗的抗體測定，一般要重復(fù)4次。多系列稀釋測定的指標LD50：半數(shù)致死量, 藥物毒性或病原微生物的毒力；TCID50：組織培養(yǎng)半數(shù)感染量ED50：半數(shù)有效量。防止50%的試驗組成員產(chǎn)生特定后果的血清稀釋度。 Reed-Muench二氏法 Spearman-K rber 二氏法 Spearman-K rber 二氏法計算實例公式： 10 ED50=L-d(p-0.5) L:所有單層都未出現(xiàn)病變的最高稀釋度對數(shù)； d:稀釋度的對數(shù)； p：從顯示全部陽性結(jié)果（所有單層都未出現(xiàn)病變）的最高稀釋度開始的各稀釋度試驗陽性比例總和。血清稀釋度10

5、稀釋度顯示細胞病變的單層數(shù)完整單層數(shù)陽性比例1-P1/10.0051.000.001/2-0.3051.000.001/4-0.6051.000.001/8-0.9140.800.201/16-1.2140.800.201/32-1.5320.400.601/64-1.8410.200.801/128-2.1500.001.00Spearman-K rber 二氏法計算過程L=-0.60 d= 10 2=0.3p=1.0+0.8+0.8+0.4+0.20=3.20帶入公式： 10ED50=-1.4ED50=1/25.1 0.1mL血清含有25.1個ED50三、畜群中血清抗體水平的估計和比較（一

6、）檢測抗體的存在 定性檢測結(jié)果與暴露水平、樣本含量和方法的敏感性有關(guān)。（二）抗體水平的比較 1、不同畜群的比較 抗體存在與否：離散數(shù)據(jù)，用卡方檢驗，需連續(xù)校正 抗體的頻率分布：參數(shù)檢驗。 2、同一畜群不同估計值的比較：t檢驗，使用對數(shù)滴度第三節(jié) 血清學(xué)試驗的解釋（一）精密性（refinement) 檢測微細抗原的能力，與不同方法的檢測能力有關(guān) 必須不斷改進診斷方法的敏感性（二）準確性(accuracy) 真陽性、假陽性 真陰性、假陰性血清學(xué)試驗中陽性和陰性結(jié)果的原因現(xiàn)象判定結(jié)果實際感染真陽性群交叉反應(yīng)、非特異抑制劑、非特異凝集假陽性缺乏感染、天然或誘發(fā)免疫耐受真陰性時間不當、試驗選擇不當、假陰

7、性非特異抑制物（抗補體、組織培養(yǎng)毒性）假陰性抗生素誘導(dǎo)的Ig抑制假陰性不全或封閉抗體、試驗不敏感假陰性（三）試驗的敏感性傳統(tǒng)的檢測方法 ELISA，免疫熒光和放射免疫 瓊脂擴散試驗：敏感性低，特異性強分子生物學(xué)方法 常規(guī)PCR 熒光（定量）-PCR特異性敏感性C下圖：疾病群體中一變量的頻率分布；C：確定健康與有病個體界線的分界點上圖：健康群體中一變量的頻率分布敏感性與特異性的相互關(guān)系敏感性與特異性的相互關(guān)系敏感性為真實有病的動物試驗陽性的比例特異性為真實無病的動物試驗陰性的比例敏感性與特異性的相互關(guān)系試驗狀態(tài)真實有病真實無病總計有病aba+b無病cdc+d總計a+cb+da+b+c+d敏感性特

8、異性a=da+cb+d（四）預(yù)測值真實陽（陰）性動物在試驗陽（陰）性動物中的比例陽性結(jié)果預(yù)測值陰性結(jié)果預(yù)測值a=da+bc+d預(yù)測值取決于方法的敏感性、特異性與群體的患病率敏感性、特異性是試驗本身的特征，不發(fā)生改變（五）可重復(fù)性可重復(fù)性是可靠性的表現(xiàn)，與多種因素有關(guān)：試劑的標準化程度操作者的技術(shù)熟練程度抗體滴度兩倍變化不被認為是顯著變化，幾何性4倍變化反映真正變化可重復(fù)性高是真實性的必要條件（六）真實性與可靠性Validity and Reliability真實真實可靠不可靠不真實四、抗體流行率抗體存在表明動物或其母體曾經(jīng)暴露于刺激產(chǎn)生該抗體的抗原物質(zhì)抗體持續(xù)時間與抗體的半衰期、持續(xù)感染等有關(guān)第四節(jié) 血清庫Serum bank: 有計劃地血清收集，代表一個群體的隨機樣本，編有目錄，并以保持免疫活性和生化特性的方式儲存。（一）用途1、確定主要的保健問題2、建立優(yōu)先進行預(yù)防接種的項目3、劃出疾病分布的界線4、調(diào)查新出現(xiàn)的疾病5、確定流行的周期性6、增加對病原學(xué)的了解7、評價疫苗接種工作8、估計疾病造成的經(jīng)濟損失（二）血清