結(jié)直腸癌血清Nup88及其它腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)

1、結(jié)直腸癌血清Nup88及其它腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)趙增仁，張麗靜，王園園，劉云 （河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院普外科，河北 石家莊 050031）摘要： 目的 觀察Nup88及CEA、CA19-9在結(jié)直腸癌患者血清中的表達(dá)水平，探討其在結(jié)直腸癌診斷中的臨床意義，并評價其價值。方法 采用化學(xué)發(fā)光法測定血清中CEA、CA19-9的表達(dá)，收集病例包括結(jié)直腸癌患者74例及正常對照組103例；從中隨機(jī)選取49例結(jié)直腸癌患者及40例對照人群采用雙抗體夾心ELISA法測定血清中Nup88蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果 結(jié)直腸癌組血清Nup88、CEA及CA19-9蛋白的表達(dá)明顯高于正常對照組；結(jié)直腸癌組血清CEA及CA19-9的陽

2、性率分別為40.54%和20.27%，明顯高于對照組的3.88%和8.74%；且血清CEA的表達(dá)與CA19-9的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.523，P0.05）。結(jié)論 結(jié)直腸癌患者血清Nup88 、CEA及CA19-9的表達(dá)水平增高；CEA檢測對于結(jié)直腸癌的診斷具有一定意義；結(jié)直腸癌血清Nup88 的高表達(dá)提示其可能可以作為評估結(jié)直腸癌的新的血清學(xué)標(biāo)記物。關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；腫瘤標(biāo)志物；核孔蛋白88；癌胚抗原；糖類抗原19-9中圖法分類號： R735.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：AExpression of Nup88 and other serum tumor markers in colorectal c

3、ancerZHAO Zengren, ZHANG Lijing, WANG Yuanyuan, LIU Yun (Department of General Surgery, First Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050031, China)Abstract: Objective To investigate the expression and the diagnostic value of serum Nup88, CEA and CA19-9 for colorectal cancer patients. Met

4、hods The levels of基金項目：國家自然科學(xué)基金面上項目（30772115） Supported by the National Natural Science Foundation of China (30772115)作者簡介：趙增仁，男，河北省樂亭縣人，漢族，博士，主任醫(yī)師，主要從事消化道腫瘤方面的研究。電話：(0311)85917259，E-mail: 收稿日期： 修回日期：CEA and CA19-9 were detected by electro-chemoluminescence immunoassay in 74 colorectal cancer patien

5、ts and 103 healthy people. Among of these , 49 colorectal cancer patients and 40 healthy people were randomly choosen to detect Nup88 expression by ELISA. Results The levels of Nup88, CEA, and CA19-9 in patients with colorectal cancer were significantly higher than those in normal controls. The sens

6、itivity of CEA, CA19-9 in colorectal cancer was higher than in normal controls and CEA showed the highest sensitivity of about 40.54% . Moreover, expression of CEA in colorectal cancer was positively correlated with CA19-9 .However, we didnt find any relationship between Nup88 and CEA, neither and C

7、A19-9. Conclusion Levels of Nup88, CEA, and CA19-9 in patients with colorectal cancer were elevated, the assay of CEA is useful for the diagnosis of colorectal cancer, serum Nup88 overexpression in colorectal cancer indicated us it might be a new serum tumor marker for colorectal cancer.Key words co

8、lorectal cancer; tumor marker; Nucleoporin 88(Nup88); CEA; CA19-9Supported by the General Program of National Natural Science Foundation of China結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是消化道最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。尋找早期有效的腫瘤標(biāo)志物可以大大降低病人的死亡率，改善病人的生存質(zhì)量。目前研究發(fā)現(xiàn)，許多惡性腫瘤中核孔蛋白88（nucleoporin 88, Nup88）呈高表達(dá)，推測可能參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。癌胚

9、抗原（carcino-embryonic antigen, CEA）為目前大腸癌診斷中最常用的腫瘤標(biāo)志物，是從結(jié)腸癌組織中分離出來的一種糖蛋白。CA19-9是腫瘤相關(guān)的糖類抗原，對消化道腫瘤的診斷亦有一定的臨床價值。本文通過檢測結(jié)直腸癌患者血清Nup88、CEA及CA19-9的表達(dá)水平，研究其在大腸癌診斷中作用及臨床價值。1 材料與方法1.1 研究對象結(jié)直腸癌組：隨機(jī)選取2008年10月至2010年8月就診于河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院及第四醫(yī)院的結(jié)直腸癌患者74例，其中男性49例，女性25例；年齡23-86歲，平均年齡60.1歲。所有病例均經(jīng)臨床、影像學(xué)檢查、手術(shù)探查及組織病理學(xué)等明確診斷。正常對照

10、組：隨機(jī)選取同期我院查體中心健康體檢者103例，其中男性47例，女性56例；年齡29-83歲，平均年齡為55.15歲；全組無心、肝、腎等重要器官疾患，且排除家族中有癌癥病史。 1.2 儀器與試劑CEA、CA19-9檢測采用美國Beckman 公司生產(chǎn)的DXI800全自動化學(xué)發(fā)光分析儀，試劑為Beckman公司的配套產(chǎn)品。Nup88 ELISA 試劑盒 購自美國GBD 公司，酶標(biāo)儀為美國Bio-Tek全自動酶標(biāo)儀，波長為450nm。1.3 標(biāo)本采集與檢測清晨空腹采集外周靜脈血3mL，離心后分離血清，分裝后，置于-20冰箱保存待檢，批量測定。CEA及CA19-9檢測采用電化學(xué)發(fā)光法，Nup88 檢

11、測采用雙抗體夾心ELISA法。每次檢測同時進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，結(jié)果在控。具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明常規(guī)進(jìn)行。1.4 統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS13.0醫(yī)學(xué)統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)資料用平均秩次表示。不同組間比較采用獨立樣本的非參數(shù)檢驗。分類變量計算腫瘤標(biāo)記物的陽性率，組間陽性率的比較用檢驗。血清Nup88和CEA及CA199 的相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 CRC與正常對照組Nup88表達(dá)的差異CRC組患者血清Nup88的表達(dá)水平為1.526 ng/mL69.084 ng/mL ，平均秩次為50.43，對照組Nup88的表達(dá)范圍為1.

12、689ng/mL5.766 ng/mL，平均秩次為38.35，CRC組Nup88的表達(dá)較對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.028），見表1。表1 CRC和對照組Nup88表達(dá)的差異組別例數(shù)Nup88（ng/ mL）ZP平均秩次秩和對照組4038.351534-2.1940.028CRC組4950.4324712.2 CRC與正常對照組CEA、CA19-9表達(dá)的差異CRC組患者血清CEA 的表達(dá)水平為0.56 ng/mL400.7ng/mL，CA19-9的表達(dá)水平為1.17 U/ mL1200 U/ mL，對照組的CEA的表達(dá)范圍為0.38 ng/mL36.8 ng/mL，CA19-9的

13、表達(dá)水平為1.8 U/ mL88U/ mL。CRC組與對照組相比，CEA的表達(dá)兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。表2 CRC和對照組CEA、CA19-9表達(dá)的差異組別例數(shù)CEAZPCA19-9ZP平均秩次秩和平均秩次秩和對照組10373.088258-7.860.0182.888454-1.850.064CRC組74138.311244897.3272992.3 CRC與正常對照組CEA、CA19-9陽性表達(dá)率間的差異CEA的陽性結(jié)果判定以血清CEA的正常高界值（5.0 ng/mL）為標(biāo)準(zhǔn)，高于此值判定為陽性，反之為陰性。CA19-9的判斷標(biāo)準(zhǔn)為35 U/ mL。CRC組 CEA及CA19-9的陽

14、性表達(dá)率分別為40.54%和20.27%，明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表3（P0.001，P =0.027）。表3 CRC和對照組 CEA、CA19-9 陽性表達(dá)率的差異組別例數(shù)CEA陽性率（%）PCA19-9 陽性率（%）P對照組1034（3.88）37.290.0019（8.74）4.880.027CRC組7430（40.54）15（20.27）2.4 CRC患者血清CEA、CA19-9敏感性的比較74例CRC患者中，血清CEA 陽性者30例，陽性率為40.54%，明顯高于CA19-9（20.27%）兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（=7.184，P=0.007）。聯(lián)合檢測血清CEA及CA

15、19-9的敏感性比單項檢測陽性率高，單項檢測CEA 的陽性率為40.54%，采用2項聯(lián)合檢測，其陽性率為44.59%，但統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果無顯著差異（=0.248，P=0.618），見表4。表4 CRC組不同腫瘤標(biāo)志物敏感性的差別項目例數(shù)陽性率CEA7440.54%CA19-97420.27%CEA+CA19-97444.59%2.5 CRC患者血清Nup88和CEA及CA199 的相關(guān)性分析49例CRC患者中，CEA和CA199檢測結(jié)果缺失者7例，對資料完整的42例患者進(jìn)行三者之間的相關(guān)性分析。Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示：血清CEA和CA19-9的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.523，P0.0

16、01）；Nup88與CEA（r= -0.141，P =0.372）、Nup88與CA19-9（r= 0.053，P =0.741）之間均無明顯相關(guān)性。3 討論Nup88作為NPC的重要組成成分，參與核質(zhì)轉(zhuǎn)運，在細(xì)胞周期、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、凋亡等過程中亦發(fā)揮重要作用1。研究發(fā)現(xiàn)，Nup88的高表達(dá)與腫瘤的關(guān)系非常密切。截至目前為止，已在多種腫瘤細(xì)胞系和原發(fā)的腫瘤組織如胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌等實體瘤中檢測到Nup88高表達(dá)2-4，且呈彌漫分布，而在對應(yīng)的正常組織、良性腫瘤或增殖性病變中，Nup88呈弱表達(dá)和散在分布，因此，Gould等5認(rèn)為Nup88可以作為腫瘤診斷的檢測指標(biāo)之一。此外，有報

17、道表明Nup88 的表達(dá)和結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移程度和死亡率密切相關(guān)，可作為評估預(yù)后的指標(biāo)6，同時和乳腺癌的侵襲性有關(guān)7。Nup88可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期影響細(xì)胞的生長及演變，同時Nup88的異常表達(dá)直接影響了原癌基因或抑癌基因產(chǎn)物以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子等穿梭蛋白的核質(zhì)轉(zhuǎn)運過程，這往往是導(dǎo)致細(xì)胞癌變的一個重要原因。然而，到目前為止，尚未見到Nup88的血清學(xué)結(jié)果。本研究比較了結(jié)直腸癌患者血清中Nup88的表達(dá)較正常對照人群顯著升高，考慮血清Nup88可能可以作為檢測結(jié)直腸癌的一項新的血清學(xué)標(biāo)志物。惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康，腫瘤標(biāo)記物在腫瘤普查、輔助診斷、判斷預(yù)后等方面均顯示出良好的應(yīng)用價值。CEA是目前研究最

18、廣泛的一種腫瘤標(biāo)記物，在多種消化系腫瘤中都有升高。作為結(jié)直腸癌相關(guān)的腫瘤標(biāo)記物，血清 CEA 具有早期輔助診斷和預(yù)后評估的價值。研究發(fā)現(xiàn)，CEA 水平與結(jié)直腸癌Dukes 分期呈正相關(guān)，約75%復(fù)發(fā)的結(jié)直腸癌患者CEA 水平升高8。術(shù)前CEA 水平可獨立的評估結(jié)直腸癌患者的預(yù)后9。CA19-9是一種粘蛋白型的糖類蛋白，主要用于檢測胰腺癌和消化道癌的腫瘤相關(guān)抗原。本研究結(jié)果顯示結(jié)直腸癌患者血清CEA、CA19-9的水平和陽性率較對照組明顯升高，提示CEA、CA19-9檢測在結(jié)直腸癌的診斷中有肯定的價值。本組結(jié)直腸癌患者血清CEA的敏感性為40.54%，與與多數(shù)文獻(xiàn)報道的敏感性（33.6%-70%

19、）相符10-11。CA19-9的敏感性為20.27%，低于文獻(xiàn)報道的25.2%-53.0%。分析其高低不一的原因可能與所檢測病例的病期相關(guān)，腫瘤分期越晚及伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)者，其靈敏度越高。將CRC中CEA與CA19-9的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者呈明顯正相關(guān)，表明二者有一定的一致性。由于單一的腫瘤標(biāo)志物對結(jié)直腸癌的檢測缺乏足夠的敏感度，不少研究致力于多種腫瘤標(biāo)志物的聯(lián)合檢測試圖提高其診斷的準(zhǔn)確性。文獻(xiàn)報道CEA、CA19-9、CA242聯(lián)合檢測是診斷結(jié)直腸癌的最佳組合，能夠較好的反映腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、估計治療效果、預(yù)測腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移12-13。本研究中CEA的敏感性明顯高于C

20、A19-9 ，兩項聯(lián)合檢測其敏感性雖有所提高，但與CEA 單項檢測的敏感性相比，差異并無統(tǒng)計學(xué)意義，和文獻(xiàn)報道不一致14。由此表明單純檢測CEA對于結(jié)直腸癌的診斷具有一定臨床價值。既然CRC患者血清中Nup88的表達(dá)增高，是否和CEA 或CA19-9的表達(dá)有關(guān)呢？隨后我們分析了結(jié)直腸癌患者血清中CEA、CA19-9和Nup88表達(dá)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)未存在顯著性差別；對Nup88與CEA及CA19-9進(jìn)行相關(guān)性分析，未發(fā)現(xiàn)存在明顯的相關(guān)性；因此我們推測Nup88可能為一獨立的評估結(jié)直腸癌的因素。Nup88在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與組織分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)，血清中Nup88的表達(dá)與臨床病理特

21、征的關(guān)系尚待進(jìn)一步研究?？傊錍EA及CA19-9對結(jié)直腸癌診斷及生物學(xué)行為的評估有一定臨床意義，CRC患者血清中Nup88的高表達(dá)提示Nup88 可能可以作為評估結(jié)直腸癌的新的血清學(xué)標(biāo)志物。參考文獻(xiàn)：Gould VE, Martinez N, Orucevic A, et al. A novel, nuclear pore-associated, widely distributed molecule overexpressed in oncogenesis and developmentJ. Am J Pathol, 2000, 157(5): 160513. Martinez N,

22、Alonso A, Moragues MD, et al. The nuclear pore complex protein Nup88 is overexpressed in tumor cellsJ. Cancer Res, 1999, 59(21):540811. Knoess M, Kurz AK, Goreva O, et al. Nucleoporin 88 expression in hepatitis B and C virus-related liver diseasesJ. World J Gastroenterol, 2006,12(36):58704.Zhang ZY,

23、 Zhao ZR, Jiang L, et al. Nup88 expression in normal mucosa, adenoma, primary adenocarcinoma and lymph node metastasis in the colorectum J. Tumour Biol, 2007, 28(2):939.Gould VE, Orucevic A, Zentgraf H, et al. Nup88 (karyoporin) in human malignant neoplasms and dysplasias: correlations of immunostai

24、ning of tissue sections, cytologic smears, and immunoblot analysisJ. Hum Pathol, 2002, 33(5):53644. Emterling A, Skoglund J, Arbman G, et al. Clinicopathological significance of Nup88 expression in patients with colorectal cancerJ. Oncology, 2003, 64 (4): 361-369.Agudo D, Gomez-Esquer F, Martinez-Ar

25、ribas F, et al. Nup88 mRNA overexpression is associated with high aggressiveness of breast cancerJ. Int J Cancer, 2004, 109(5):71720. Goldstein MJ, Mitchell EP. Carcinoembryonic antigen in the staging and follow-up of patients with colorectal cancerJ. Cancer Invest, 2005, 23 (4): 338-351.Park YJ, Park KJ, Park JG, et al. Prognostic factors in 2230 Korean colorectal cancer patients: analysis of consecutively operated