器官移植配型

1、關(guān)于器官移植配型第一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月基本概念廣義的器官移植：用自身或異體的正常器官、組織或細(xì)胞置換病變或功能缺失的器官、組織或細(xì)胞，以維持和重建機體的生理功能。影響移植成功的關(guān)鍵因素是可能發(fā)生的免疫排斥反應(yīng)；第二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月一. 基本概念人人豬相關(guān)概念同種異體移植異種移植同系移植移植自體移植第三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月引起排斥反應(yīng)的抗原ABO血型抗原；組織特異性抗原；主要組織相容性抗原(MHA, major histocompatibility antigen )，又稱人類白細(xì)胞抗原（HLA）;次要組織相容性抗原（mHA

2、, minor histocompatibility antigen ）H-Y抗原;第四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA的基因結(jié)構(gòu)、抗原結(jié)構(gòu)及特點由第6號染色體短臂21.31區(qū)編碼，按功能分為HLA-I,三個區(qū)域，其中I,區(qū)編碼抗原與移植關(guān)系密切。HLA-I類抗原主要由A、B、C位點編碼；HLA-類抗原由DR、DP、DQ位點編碼；第五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA-I類抗原是由第6號染色體相應(yīng)I類基因編碼的鏈與第15號染色體編碼的2微球蛋白非共價鍵結(jié)合的糖蛋白，主要表達(dá)在有核細(xì)胞表面；HLA-類抗原由第6號染色體相應(yīng)類基因編碼的鏈和鏈非共價鍵結(jié)合的糖蛋白，主要

3、表達(dá)在抗原遞呈細(xì)胞，胸腺上皮細(xì)胞表面；第六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA抗原的生物學(xué)功能1.參與蛋白質(zhì)抗原的處理與遞呈；2.調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答；3.參與T細(xì)胞分化過程；4.介導(dǎo)同種免疫應(yīng)答；第七張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA基因的遺傳特點1.高度多態(tài)性；HLA基因呈現(xiàn)多位點復(fù)等位的特點；2.共顯性遺傳：每對等位基因同時表達(dá)；3.單倍型遺傳：位于同一條染色體上的 HLA各位點的基因組合；4.連鎖不平衡：單倍型基因非隨機分布的現(xiàn)象；第八張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月2.傳統(tǒng)的HLA分型技術(shù)血清學(xué)分型:補體依賴的細(xì)胞毒實驗;待測淋巴細(xì)胞與已知抗體孵育，再加入

4、補體，若該抗體與淋巴細(xì)胞膜上HLA分子相匹配，則激活補體系統(tǒng)導(dǎo)致待測細(xì)胞膜的破壞，否則細(xì)胞膜完整不受影響。局限性：需要活的淋巴細(xì)胞；存在交叉反應(yīng)；隱蔽抗原無法識別；人為影響因素多質(zhì)控難做；第九張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月細(xì)胞學(xué)分型：混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)；受者淋巴細(xì)胞與已知類型的淋巴細(xì)胞或者供者淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，兩種細(xì)胞HLA分子表型如果相同則不能刺激淋巴細(xì)胞增殖，反之則刺激淋巴細(xì)胞增殖，分為單雙向兩種類型。局限性：需要活的純合子表型的淋巴細(xì)胞；增殖檢測方法要用到同位素；第十張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月分子生物學(xué)技術(shù)分型HLA抗原蛋白分子的多態(tài)性取決于相應(yīng)編碼基因的多

5、態(tài)性；RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP;PCR-SSCP;PCR-Sequencing；PCR-SSO/基因芯片技術(shù)；流式細(xì)胞儀技術(shù)；氨基酸殘基配型標(biāo)準(zhǔn)分析技術(shù)；第十一張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） 在多聚合酶，引物，底物和模板的參與下通過變性，退火，延伸三個循環(huán)步驟在短時間內(nèi)達(dá)到對目的片斷的大量擴增，是基因分型的基礎(chǔ)。第十二張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月RFLP/PCR-RFLP/PCR-SSP/基因組DNA 提取 酶切 電泳分析（RFLP） DNA 擴增（共性引物/特異性引物） (限制性內(nèi)切酶酶切) 電泳檢測(PCR-RFLP/PCR

6、-SSP) 第十三張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月PCR-SSCP（單鏈構(gòu)象多態(tài)性）提取基因組DNA PCR擴增（特異引物） 變性(雙鏈 單鏈) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 根據(jù)帶型可檢出基因的多態(tài)性又可檢出點突變，有利于發(fā)現(xiàn)新的等位基因第十四張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月PCR-sequencing提取基因組DNA PCR擴增（非特異/特異引物）DNA測序最可靠、直接、準(zhǔn)確的HLA分型方法；臨床上應(yīng)用限制了供體的來源；在確定等位基因的多態(tài)性、發(fā)現(xiàn)新位點、基因定位等研究領(lǐng)域應(yīng)用較多；第十五張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月PCR-SSO（序列特異性寡核苷酸探針雜交）/基因

7、芯片技術(shù)正向雜交：提取基因組DNA PCR擴增（共性引物） 將PCR產(chǎn)物固定在固相支持載體上并進(jìn)行變性處理 與標(biāo)記的特異性寡核苷酸探針變性雜交 根據(jù)雜交信號判斷HLA類型；反向雜交：將特異性寡核苷酸探針固定在固相載體上 與標(biāo)記的PCR產(chǎn)物（已經(jīng)變性處理）雜交 根據(jù)雜交信號判斷HLA類型；基因芯片技術(shù)是一種反向PCR-SSO方法，具有高通量、縮微化、自動化程度高、準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢；第十六張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月流式細(xì)胞儀技術(shù)提取基因組DNA 非特異性PCR擴增 變性處理 與包被了特異性HLA探針的微球結(jié)合 洗脫處理 通過流式細(xì)胞儀檢測利用流式細(xì)胞儀技術(shù)將反向的固相PCRSSO技術(shù)

8、變?yōu)橐合鄼z測分析技術(shù)；每種包被了不同類型HLADNA探針的微球?qū)?yīng)一種熒光染色能夠被流式細(xì)胞儀識別；具有高通量、準(zhǔn)確快速的優(yōu)勢；第十七張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基酸殘基配型標(biāo)準(zhǔn)分型技術(shù)根據(jù)HLA分子346個氨基酸殘基中對移植物排斥與存活率具有重要影響的關(guān)鍵氨基酸，當(dāng)供受者的關(guān)鍵氨基酸殘基相同，盡管接受HLA抗原部分錯配的供體，產(chǎn)生的免疫反應(yīng)性仍然是低反應(yīng)性或無免疫反應(yīng)性，從而使移植物得以長期存活。第十八張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA分型技術(shù)臨床應(yīng)用評價1.在器官移植中具有重要臨床意義； 六位點配型原則：HLA-A/B/DR2.合理選擇HLA基因分型技術(shù)； 各種方法相互補充，難以相互替代，根 據(jù)不同需求選擇不同方法第十九張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月方法血清學(xué)分型/細(xì)胞分型基因分型(SSP/SSOP/SB)識別位點HLA分子抗原特異性，某些氨基酸殘基位點DNA序列差異分辨率低（抗原特異性）HLA-A01低（抗原特異性）/中等（集團(tuán)特異性）/高（等位基因特異性）HLA-A*01；HLA-A*0101/0102/0103； HLA-A*01010203抗原法/基因法第二十張，PPT共二十二頁，創(chuàng)作于2022年6月字母HLA代表染色體上一段特殊的遺傳區(qū)域（人類白細(xì)胞表面抗原區(qū)域）；A/B/DR代表該區(qū)域某一具體的基因座位；數(shù)字代表該基因座