2022年體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則-生物芯片類試劑生產(chǎn)

1、體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量掌握技術(shù)指導(dǎo)原就 生物芯片類試劑生產(chǎn)及質(zhì)量掌握技術(shù)指導(dǎo)原就（報批稿）本指導(dǎo)原就所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個生物探針（包括DNA片段,寡核苷酸、抗原、抗體,組織,細(xì)胞等）按預(yù)先設(shè)計的排列方式固定在特制的基質(zhì)（包括玻璃 片,尼龍膜,硝酸纖維素膜等）上,用特定的方法提取生物靶分子并進行標(biāo)記,然后與固 定在基質(zhì)上的生物探針特異性的結(jié)合,再用相應(yīng)的檢測設(shè)備（如激光掃描儀、CCD 檢測儀 等）和分析方法（包括軟件）進行檢測、記錄、分析,實現(xiàn)對生物靶分子的定性或定量檢測的試劑；依據(jù)芯片制作的主要原料和方法,生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片、組 織芯片等；本指導(dǎo)原就是針對

2、核酸和蛋白為檢測靶分子生物芯片的生產(chǎn)及質(zhì)量掌握技術(shù)指 導(dǎo)原就,其它類型靶分子檢測的芯片診斷試劑可參考本指導(dǎo)原就；國家食品藥品監(jiān)督治理部門將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要,適時組織修訂；一、基本原就（一）試劑研制、生產(chǎn)用各種原料、輔料等應(yīng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并符合有關(guān)法規(guī)的要求；（二）試劑生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具備相應(yīng)的專業(yè)技術(shù)人員、儀器設(shè)備以及相宜的生產(chǎn)環(huán)境,獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時,應(yīng)依據(jù)體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)就（試行）的要求 建立相應(yīng)的質(zhì)量治理體系,形成文件和記錄,加以實施并保持有效運行；仍應(yīng)通過體外 診 斷 試 劑 生 產(chǎn) 企 業(yè) 質(zhì) 量 管 理 體 系 考 核 評 定 標(biāo) 準(zhǔn) （ 試 行 ） 的 考

3、核 ；（三）生物芯片類試劑在研制時,應(yīng)當(dāng)依據(jù)科學(xué)、規(guī)范的原就組織研發(fā),各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理；（四）試劑研制、生產(chǎn)過程中所用的物料及工藝,應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜；（五）生產(chǎn)和質(zhì)量掌握的總體目標(biāo)：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)固、工藝可控、檢測有效二、原材料質(zhì)量控；制（一）核酸檢測芯片核酸芯片檢測時,從生物樣本中提取的核酸可用熒光標(biāo)記、金標(biāo)記和酶標(biāo)記；檢測方法 包括光譜學(xué)方法和化學(xué)顯色；下面為熒光標(biāo)記芯片技術(shù)指導(dǎo)原就,采納金標(biāo)記和酶聯(lián)顯色等 的 生 物 芯 片 診 斷 試 劑 可 參 照 核 酸 芯 片 和 蛋 白 芯 片 相 關(guān) 部 分 ；1、主要生物原料核酸檢測芯

4、片的主要生物原料包括模板DNA 、dNTPs、引物、探針、標(biāo)記物等；主要生物原料如為企業(yè)自己生產(chǎn),其工藝必需相對穩(wěn)固,企業(yè)應(yīng)依據(jù)工藝要求對這類生物原料進 行質(zhì)量檢驗,以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；如購買,其供應(yīng)商要求相對固定,不能隨便 變更供應(yīng)商,同時,供應(yīng)商應(yīng)供應(yīng)相應(yīng)的質(zhì)量保證證明和相應(yīng)的質(zhì)檢報告,達(dá)到生產(chǎn)規(guī)定 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；假如主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更,應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進重組行變更申請；（1）模板DNA DNA ：經(jīng)測序驗證,關(guān)鍵堿基或序列沒有錯誤；1TE 溶解,濃度為100ng/ l以上 , -20 保 存 ； 作 為 陽 性 參 考 品 時 , 其 稀 釋 度 由 企

5、業(yè) 根 據(jù) 產(chǎn) 品 標(biāo) 準(zhǔn) 確 定 ；1 / 6 （2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）HPLC 純 , PCR 級 , 無 DNase 、 RNase 污 染 , -20 以 下 保 存 ；（3）引 物生產(chǎn)中的引物原材料為凍干粉,PAGE 純或 HPLC 純；用標(biāo)準(zhǔn) DNA 模板擴增,電泳檢測,譜帶單一,大小正確,與對比引物比較,產(chǎn)物量一樣；符合視為合格引物,-20以下保 存；（4）探 針（用 于 陣 列 制 備）重組 DNA, 凍干粉（或 1TE 溶解液）：至少滿意一個批次的用量,酶切鑒定分析圖譜；PCR 產(chǎn)物,凍干粉（或 1TE 溶解液）：至少滿意一個批次的

6、用量,PCR 電泳鑒定圖譜；合成寡核苷酸：PAGE 純或 HPLC 純,至少滿意一個批次的用量,供應(yīng)當(dāng)產(chǎn)品的 PAGE電 泳 分 析 圖 譜 或 HPLC 分 析 圖 譜；探 針 序 列 的 正 確 性 ： 應(yīng) 用 克 隆 鑒 定 的 標(biāo) 準(zhǔn) DNA 雜 交 鑒 定 或 測 序 鑒 定 ；純度和濃度檢測：采納電泳方法,電泳圖譜沒有雜帶,目的條帶的強度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn) DNA 條帶進行參比運算其強度；純度較高的DNA ,可用紫外分光光度計進行定量；檢驗合格后入庫5,避光、-20標(biāo)以下保存；（）記物含 有 激 發(fā) 光 波 長 和 發(fā) 射 光 波 長 介 于280.680nm 的 所 有 熒 光 分

7、 子 , HPLC 純 ；（6）Taq DNA 聚 合 酶SDS檢測,純度95%,具有 DNA 聚合酶活性,無核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)固性 , 94 保 溫 1 小 時 后 仍 保 持 50 活 性 ； 產(chǎn) 品 -20 保 存 ；（7）尿 嘧 啶 糖 基 化 酶（UNG）具尿嘧啶糖基化酶活性,無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性；1U UNG 37處理 3 分鐘后 , 103 拷 貝 以 下 含 U 模 板 被 降 解 后 不 能 產(chǎn) 生 擴 增 產(chǎn) 物 ； 產(chǎn) 品 -20 保 存 ；（8）RT 酶具 有 逆 轉(zhuǎn) 錄 活 性,無 核 酸 內(nèi) 切 酶 活 性,-20保 存；（9）RT-PCR 酶具逆轉(zhuǎn)錄酶

8、活性和 DNA 聚合酶活性,無核酸內(nèi)切酶活性,具熱穩(wěn)固性,94 1 小時后仍 保 持 50% 活 性；產(chǎn) 品-20保 存；（10）緩 沖 液各 類 酶 制 品 所 需 的 反 應(yīng) 緩 沖 液 由 廠 家 隨 酶 制 品 提 供 , -20 保 存 ；2、主要生物輔料主要生物輔料包括酶類（蛋白酶、核酸酶等）、核酸提取試劑、魚精DNA 、封閉用蛋白、雜交液等,企業(yè)應(yīng)建立相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；主要生物輔料如為企業(yè)自己生產(chǎn)（配制）,其工藝必需相對穩(wěn)固,并依據(jù)工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗,以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；如購買,其供應(yīng)商要求相對固定,不能隨便變更供應(yīng)商,同時,供應(yīng)商應(yīng)提供 相 應(yīng) 的 質(zhì) 量

9、 保 證 證 明 和 相 應(yīng) 的 質(zhì) 檢 報 告 , 達(dá) 到 生 產(chǎn) 規(guī) 定 的 質(zhì) 量 標(biāo) 準(zhǔn) ；3、主要化學(xué)殘原輔料化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2022 年版）分析純級別進行檢驗；主要的檢測指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類檢測、溶液pH 值、溶解情況、干燥失重、熾灼渣等；主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定,不得隨便發(fā)生變更；化學(xué)原材料在購入時,原材料的生產(chǎn)商必需供應(yīng)當(dāng)批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報告,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生2 / 6 產(chǎn)所4需、的質(zhì)量他標(biāo)物準(zhǔn)；其料（1）載玻片外 觀 ： 明 亮 處 用 肉 眼 觀 察 無 缺 刻 , 無 劃 傷 等 ； 規(guī) 格

10、按 設(shè) 計 要 求 ；激 光 掃 描 儀 掃 描 （ 波 長 為 芯 片 檢 測 波 長 ） ： 包 被 層 基 本 均 勻 ；（2）試管、吸頭、試劑瓶等一 次 性 使 用 , 由 生 產(chǎn) 廠 家 提 供 質(zhì) 量 保 證 , 達(dá) 到 設(shè) 計 要 求 ；（3）其他：包括試劑瓶標(biāo)簽、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等,應(yīng)參 照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原就和醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識 管理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) ；（二）蛋要白生檢物測芯片1主原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最親密相關(guān)的生物原料包括各種自然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科

11、；這類原料可用于點膜、標(biāo)記相關(guān)酶、納米金、光學(xué)基團及中和反應(yīng)用抗原或抗體等；使用前應(yīng)依據(jù)工藝要求對這類生物原料進行質(zhì)量檢驗,以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；主要生物原料如為企業(yè)自己生產(chǎn),其工藝必需相對穩(wěn)固；如購買,其供應(yīng)商要求相對固定,不能隨便變更供應(yīng)商,假如主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更,應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求變更申請；主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：外觀肉眼觀看,大部分生物原料為澄清均一液體,不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或 者 為 白 色 粉 末 , 不 含 其 他 顏 色 雜 質(zhì) ； 特 殊 生 物 原 料 應(yīng) 具 備 相 應(yīng) 外 觀 標(biāo) 準(zhǔn) ；純度和分子量生物原料經(jīng)SD

12、S電泳后,利用電泳掃描儀進行分析；也可用其他相宜的方法,如高效液相法等進行分析；依據(jù)所檢測生物原料的分子量挑選相宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳；一般每個電泳道加樣量為5 g；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色；染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量,純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),分子量大小應(yīng)在正確的條帶位置；蛋白濃度蛋白濃度可通過Lowry 法、 280nm 光吸取法、雙縮脲法或其它相宜方法進行檢測；價效效價的測定一般依據(jù)蛋白含量測定結(jié)果,通過倍比稀釋法進行；效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求功能性實；驗功能性試驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情形,一般考查使用該原料的試劑的 靈 敏 度 、

13、特 異 性 和 穩(wěn) 定 性 等 , 并 比 較 其 與 上 批 次 原 料 的 相 關(guān) 性 ；2主要生物輔料生物輔料指的是在生產(chǎn)過程中作為蛋白愛護劑用途的一類生物原料,主要包括小牛血 清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等；這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（2022 年版）規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求,并且要適合于企業(yè)生產(chǎn)；異：建議作以下檢驗牛血清或羊血清外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體,無溶血或物3 / 6 無菌試驗：將血清直接 37放置 7 天,放在光明處觀看,不得顯現(xiàn)混濁或沉淀；總 蛋 白 含 量： 用 雙 縮 脲 法 測 定, 標(biāo) 準(zhǔn) 為 不 小 于 32mg/ml；球蛋

14、白含量：取待測血清 1ml,采納飽和硫酸銨法進行沉淀；沉淀溶于 0.85%NaCl 溶液至 1ml,用 Lowry 法 測 定 蛋 白 含 量 不 能 大 于 2mg/ml； 牛 血 清 白 蛋 白：外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末,無吸潮,無結(jié)塊,無肉眼可見的其它雜質(zhì) 顆 粒；溶解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液,溶解時間在 18-26時應(yīng)不大于 15 分鐘； p值 應(yīng) 為 6.5.7.1；總 蛋 白 含 量 ： 用 雙 縮 脲 法 測 定 , 其 標(biāo) 準(zhǔn) 為 不 小 于 干 重 的 95 ；總蛋白中的 BSA 含量：采納硝酸纖維素膜電泳法,其標(biāo)準(zhǔn)為不小于總蛋白含量的 95%；BS

15、A 的 凈 含 量 ： 總蛋白 含 量 乘 總 蛋 白 中的 BSA 含 量 ,其 標(biāo) 準(zhǔn) 為 不小 于 90% ； 酪 蛋 白：應(yīng) 符 合 生 產(chǎn) 所 需 的 質(zhì) 量 標(biāo) 準(zhǔn)； 標(biāo) 記 用 酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）,同時應(yīng)依據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗,酶的純度3.0RZ 值（OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于；對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等,仍應(yīng)進行功能性試驗,即以其為 原 料 配 制 一 定 濃 度 的 稀 釋 液 作 為 樣 品 , 進 行 測 定 , 均 不 得 出 現(xiàn) 非 特 異 性 反

16、應(yīng) ；生 物 輔 料 的 供 應(yīng) 商 同 樣 要 求 相 對 固 定 , 不 得 隨 意 變 更 供 應(yīng) 商 ；3化學(xué)原輔料參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（的檢測指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類、溶液2022 年版）分析純級別進行檢驗；主要 pH 值、溶解情形、干燥失重、熾灼殘渣等；主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定,不得隨便發(fā)生變更；化學(xué)原材料在購入時,原材料的生產(chǎn)商必需供應(yīng)當(dāng)批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報告,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)4所需的其質(zhì)量基標(biāo)物準(zhǔn)；他料質(zhì)以硝酸纖維素膜為例：孔徑符合設(shè)計要求（0.45 m、0.22 m等）、均一性（厚度及毛細(xì)遷移速度20）、尺寸（與標(biāo)識吻合）由產(chǎn)

17、廠家試供劑瓶,和干燥求劑生提質(zhì)量保證達(dá)到規(guī)定要；其他：說明書、包裝外盒等應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督治理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原就和醫(yī)療 器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識治理規(guī)定建立相應(yīng)質(zhì)量掌握標(biāo)準(zhǔn),如數(shù)量、規(guī)格等；三、試劑盒各組分的生產(chǎn)生物芯片主要包括DNA 芯片、蛋白芯片、組織芯片和細(xì)胞芯片等；生物芯片診斷試劑產(chǎn)品基本可分成二個部分,一部分是芯片,另一部分檢測用工作液；假如有配套的檢測儀器,仍需對儀器及處理芯軟件的應(yīng)用加以說明；（一）片的生產(chǎn)芯 片 生 產(chǎn) 的 基 本 過 程 包 括 探 針 的 獲 取 方 法 , 純 化 , 點 樣 , 固 定 ；1探針獲取4 / 6 不同芯片,主要是探

18、針不同,生物芯片的探針主要包括以下幾類,其它探針可參考制定相應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；指（1）DNA探針的獲取探針的形式包括PCR 產(chǎn)物、克隆DNA 、人工合成DNA 片段等；要求有生產(chǎn)程序和質(zhì)量；標(biāo)及檢測方法,要進行純化,有固定的純化程序（2）抗原的生產(chǎn)抗原獲得方法包括細(xì)胞培育、從生物材料中分別提取、基因工程表達(dá)以及合成肽等；基因工程表達(dá)產(chǎn)物又分3為純抗原蛋白、融合蛋白等；（）抗體抗體分單克隆抗體和多克隆抗體；抗體制備包括細(xì)胞培育,動物腹水,基因工程表達(dá)等方（4）式胞和組；細(xì)織包 括 細(xì) 胞 或 組 織 類 型 , 固 定 方 法 ； 組 織 材 料 包 括 固 定 , 包 埋 , 切 片 等 ；

19、2陣列的排列設(shè)計陣列的排列可以是依次排列、隨機排列、對角線排列以及其它排列方式,但設(shè)計時需考慮重3復(fù)次數(shù)點和對照等因制素；陣的作使 用 儀 器 的 需 要 確 定 型 號 , 程 序 ； 手 工 制 作 的 也 應(yīng) 有 標(biāo) 準(zhǔn) 操 作 程 序 ；4固定：包括固定方式,固定條件等；應(yīng)對芯片生產(chǎn)的過程進行相應(yīng)的質(zhì)量掌握,如點樣和固定過程的監(jiān)控、點樣均一性檢驗等（二）工作液配；制1芯片生產(chǎn)所需試劑,包括細(xì)胞培育基,探針制備試劑,陣列制作和固定試劑等； 2樣品處理試劑,芯片檢測靶分子分為核酸和蛋白質(zhì)；檢測核酸的樣品處理試劑包括臨床取樣, DNA 提取或RNA 提取試劑,逆轉(zhuǎn)錄試劑,PCR 擴增試劑,核

20、酸標(biāo)記試劑等；檢測 蛋 白 的 處 理 試 劑 包 括 取 樣 試 劑 , 蛋 白 稀 釋 液 以 及 特 殊 試 劑 等 ； 3反應(yīng)液：檢測核酸時的反應(yīng)液包括預(yù)雜交液,雜交液,洗脫液等；檢測蛋白時,包括封 閉 液 , 抗 原 / 抗 體 反 應(yīng) 液 , 洗 脫 液 , 顯 色 液 , 顯 色 終 止 液 等 ；1（標(biāo)三依據(jù)）包括數(shù)off據(jù)的確判依據(jù)；讀判斷準(zhǔn)及,Cut 值定2數(shù)據(jù)判讀方式：人工仍是軟件判讀； 3假如是軟件判讀,應(yīng)供應(yīng)軟件判定的科學(xué)依據(jù)（包括生物學(xué)原理、數(shù)據(jù)獵取原理和判斷 實 驗 是 否 成 立 的 依 據(jù) ） 以 及 實 驗 測 試 的 原 始 報 告 （ 或 數(shù) 據(jù) ） ,

21、 并 需 要 說 明 ： 軟 件 的 來 源 ：購 買 或 自 己 編 制, 是 否 獲 得 注 冊 等 ； 軟 件 的 用 途 ： 包 括 對 數(shù) 據(jù) 的 分 析 、 存 儲 、 解 讀 、 含 義 等 ； 軟 件 的 使 用：基 本 的 使 用 程 序；四、半 成 品 質(zhì) 量 控 制（一）抽 樣檢 驗 人 員 按 批 號 抽 取 檢 驗 需 要 數(shù) 量 的 半 成 品 , 作 好 標(biāo) 記 , 待 檢 ；（二）半成品檢驗利用上一批檢驗合格的試劑盒的相應(yīng)組分,對本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進行檢驗,檢驗結(jié)果達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；半成品檢驗,一般使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進行；如某類試劑沒