同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件02抗單鏈脫氧核糖核酸抗體(SS-DNA)測(cè)定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書(shū)TJYYJYKMY/XMZ702第2版標(biāo)題：抗單鏈脫氧核糖核酸抗體(SS-DNA)測(cè)定第7章 第02號(hào)第 PAGE 3 頁(yè) 共 NUMPAGES 3 頁(yè)1. 目的：檢測(cè)血清標(biāo)本中的SS-DNA抗體。2. 適用范圍：檢驗(yàn)科免疫室。3. 項(xiàng)目名稱(chēng)：抗單鏈脫氧核糖核酸抗體(SS-DNA)測(cè)定。4. 方法：酶免疫分析法。5. 檢測(cè)原理：SS-DNA抗核抗體是一種抗“自身脫氧核糖核酸和核蛋白”的抗核抗體。采用EIA原理檢測(cè)。6. 試劑6.1 品牌：購(gòu)自上海玉蘭生物技術(shù)研究所。6.2 包裝規(guī)格：48人份。6.3 內(nèi)含物：6.3.1 包被板 12孔X4條;6.3

2、.2 陽(yáng)性對(duì)照 1支;6.3.3 陰性對(duì)照 1支;6.3.4. 標(biāo)本稀釋液 1瓶;6.3.5 酶結(jié)合物 1瓶;6.3.6 底物液A 1瓶;6.3.7. 底物液B 1瓶;6.3.8 濃縮洗滌液(使用蒸餾水稀釋至400ml) 1瓶;6.3.9 終止液 1瓶;7 儀器品牌、型號(hào): BIO RAD UV-3550酶標(biāo)儀，測(cè)定波長(zhǎng)為450nm；參考波長(zhǎng)為630nm；8 操作步驟：8.1 打印工作單:8.1.1 打開(kāi)電腦及打印機(jī)電源，8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)系統(tǒng)，登陸工號(hào)與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理，單擊標(biāo)本申請(qǐng)信息打開(kāi)標(biāo)本申請(qǐng)明細(xì)信息查詢(xún)，打開(kāi)左上角的所有信息，選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4 在檢驗(yàn)

3、項(xiàng)目處選擇SSDNA執(zhí)行查詢(xún)，點(diǎn)擊打印申請(qǐng)單，打印出工作單。8.2 排列待測(cè)標(biāo)本:根據(jù)工作單上的庫(kù)位號(hào)從標(biāo)本架中找出相應(yīng)標(biāo)本，并按工作單上的 順序排列在樣本架上。8.3 按以下步驟開(kāi)始操作:8.3.1 將試劑盒放在室溫30分鐘以上，使之與室溫平衡。8.3.2 將已包被的酶標(biāo)孔中，每孔加2滴（100l）標(biāo)本稀釋液，血清標(biāo)本用生理鹽水稀釋10倍后再取10l已稀釋的標(biāo)本，加入到100l標(biāo)本稀釋液中，另設(shè)陽(yáng)、陰對(duì)照，每孔（50l）（不用稀釋?zhuān)?，略微振蕩，放?7恒溫箱中反應(yīng)30分鐘。8.3.3 將濃縮洗滌液稀釋40倍（蒸餾水配），洗板4次，然后拍干。8.3.4 每孔加入酶標(biāo)抗體1滴置37反應(yīng)20分鐘。

4、8.3.5 洗滌6次拍干。8.3.6 每孔加入顯色劑A，B各1滴，反應(yīng)510分鐘，觀察結(jié)果。（如果室溫低于15則需放在37反應(yīng)5分鐘）。8.4 結(jié)果判斷：加入終止液1滴，在450nm讀數(shù)，OD0.2為陽(yáng)性，OD0.2為陰性。8.5 發(fā)送報(bào)告：詳見(jiàn)免疫報(bào)告發(fā)送程序。9 參考范圍：正常人陰性。10 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它體液標(biāo)本無(wú)特殊要求。11 臨床意義：快速測(cè)定系統(tǒng)性紅斑狼倉(cāng)SLE等結(jié)締組織病患者血清中SS一DNA抗體，具有特異性高，快速、敏感、操作簡(jiǎn)單，結(jié)果清晰，可替代傳統(tǒng)的LE細(xì)胞鏡檢法。12 注意事項(xiàng)：12.1 洗滌要徹底，否則要出現(xiàn)假陽(yáng)性。12.2 10分鐘后出現(xiàn)蘭色者作為陽(yáng)性。12.3 一次未能用完的酶標(biāo)板需裝入自封袋中并放入干燥劑，再放入冰箱保存。12.4 建議水浴箱中反應(yīng)，最好用即時(shí)