指南2無菌工藝模擬試驗(yàn)指南

1、 附件2無菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無菌原料藥）目的為指導(dǎo)和規(guī)范無菌原料藥生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬驗(yàn)證，充分評(píng)價(jià)無菌原料藥生產(chǎn)過程的無菌保障水平，確保無菌原料藥的安全性，依據(jù)藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）及附錄，制定本指南。定義本指南所述的無菌工藝模擬試驗(yàn)，是指采用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基或其他介質(zhì)，模擬原料藥生產(chǎn)中無菌操作的全過程，評(píng)價(jià)該工藝無菌保障水平的一系列活動(dòng)。范圍本指南涵蓋了無菌工藝模擬試驗(yàn)的基本要求、不同工藝模式的相應(yīng)要求、試驗(yàn)的基本流程和結(jié)果評(píng)價(jià)等內(nèi)容，適用于無菌原料藥的無菌工藝驗(yàn)證。本指南所述條款是在現(xiàn)有無菌工藝技術(shù)基礎(chǔ)上提出的相關(guān)要求，旨在規(guī)范企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗(yàn)活動(dòng)。在科學(xué)的基礎(chǔ)

2、上，鼓勵(lì)新技術(shù)、新設(shè)備的引入，進(jìn)一步提高無菌原料藥的無菌保障水平。原則在對(duì)無菌生產(chǎn)工藝充分認(rèn)知和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)累積的基礎(chǔ)上，應(yīng)結(jié)合工藝、設(shè)備、人員和環(huán)境等要素定期開展無菌工藝模擬試驗(yàn)，以確認(rèn)無菌生產(chǎn)過程的可靠性。同時(shí)也為企業(yè)及時(shí)識(shí)別風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而改進(jìn)無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持。開展無菌工藝模擬試驗(yàn)應(yīng)遵循以下原則：4.1 基于無菌工藝設(shè)計(jì)，對(duì)無菌生產(chǎn)全過程實(shí)施風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，識(shí)別生產(chǎn)過程風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，評(píng)估現(xiàn)有控制措施的有效性。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)充分考慮風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果。4.2 應(yīng)充分考慮硬件裝備水平與無菌風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性，結(jié)合無菌生產(chǎn)過程所涉及到的工藝、設(shè)備、人員以及操作時(shí)限等因素針對(duì)性開展模擬試驗(yàn)，盡可能模擬實(shí)際無菌生

3、產(chǎn)全過程，應(yīng)特別關(guān)注暴露操作、人工干預(yù)等高風(fēng)險(xiǎn)過程。4.3 如生產(chǎn)線有多種無菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)采用風(fēng)險(xiǎn)管理的模式，在綜合評(píng)價(jià)不同無菌生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案，以評(píng)價(jià)每種無菌工藝過程的可靠性。4.4 如無菌生產(chǎn)工藝存在顯著差異，宜對(duì)每種工藝開展模擬試驗(yàn)。無菌原料藥生產(chǎn)工藝及模擬范圍無菌原料藥的無菌生產(chǎn)工藝通常為：原料藥進(jìn)一步精制和無菌操作的結(jié)合，作為無菌原料藥生產(chǎn)工藝的開始，多采用除菌過濾或其他除菌技術(shù)將物料中的微生物去除，之后采取無菌操作技術(shù)的工藝單元，最終獲得免受微生物污染的原料藥。無菌工藝模擬試驗(yàn)應(yīng)從第一步無菌操作開始，即經(jīng)除菌過濾或其他方法獲取無菌藥液，直至無菌產(chǎn)品完全密封結(jié)束。與無

4、菌制劑工藝相比，無菌原料藥的生產(chǎn)工藝一般更復(fù)雜，工藝設(shè)備選型呈現(xiàn)出非標(biāo)化和功能設(shè)計(jì)差異化等特點(diǎn)。即使是同一無菌工藝過程，因設(shè)備選型和系統(tǒng)密閉程度的不同，無菌風(fēng)險(xiǎn)也存在著顯著差異。目前，無菌原料藥常用無菌工藝包括：無菌結(jié)晶工藝、無菌冷凍工藝和無菌噴霧干燥工藝。5.1 無菌結(jié)晶工藝典型的無菌結(jié)晶工藝流程是從非無菌物料開始，經(jīng)除菌過濾進(jìn)入無菌結(jié)晶罐內(nèi)，通過調(diào)整物料溫度或加入其他溶劑使物料中有效活性成分結(jié)晶或沉淀析出，該過程會(huì)因控制晶體生長的需要而引入晶種。養(yǎng)晶結(jié)束后進(jìn)入固液分離設(shè)備，去除母液獲得濕品，必要時(shí)對(duì)濕品進(jìn)行洗滌，濕品在固液分離設(shè)備內(nèi)進(jìn)行干燥或通過輔助密閉系統(tǒng)轉(zhuǎn)移至其他干燥設(shè)備內(nèi)進(jìn)行干燥，之

5、后根據(jù)產(chǎn)品特性和最終質(zhì)量要求進(jìn)行必要的整粒（或微粉化），以控制產(chǎn)品粒度大小和分布，混粉也是常用的工藝單元，主要解決產(chǎn)品均一性的問題。最后產(chǎn)品經(jīng)分裝、密封，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。5.2 無菌凍干工藝常見的無菌凍干工藝流程包括：液體物料經(jīng)除菌過濾得到無菌料液，在無菌防護(hù)下使用加料槍將無菌料液注入凍干機(jī)托盤內(nèi)，按照規(guī)定程序進(jìn)行冷凍真空干燥，干燥結(jié)束后經(jīng)除菌級(jí)呼吸器釋放凍干機(jī)內(nèi)的真空。在無菌防護(hù)下打開凍干機(jī)門，將干品由托盤轉(zhuǎn)移至無菌料倉內(nèi)，或在無菌防護(hù)下通過真空密閉吸料系統(tǒng)將干品轉(zhuǎn)移至下一工序，干品通常需要整粒和混粉工藝，以得到質(zhì)量均一的干品，最后經(jīng)分裝、密封，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。5.3 無菌噴霧干燥工

6、藝無菌噴干工藝適用于耐熱性好的無菌原料藥，工藝流程通常包括：液體物料經(jīng)除菌過濾后持續(xù)穩(wěn)定地注入干燥塔內(nèi)，在無菌高壓空氣的作用下瞬間霧化成液滴，并與流動(dòng)的無菌熱空氣發(fā)生傳質(zhì)傳熱，液滴因水分迅速蒸發(fā)而變?yōu)榉勰罡善罚@得的干品經(jīng)氣固分離器收集至無菌料倉內(nèi)，或直接分裝至最終市售包裝內(nèi)。產(chǎn)品在料倉內(nèi)可實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步混粉操作，隨后經(jīng)分裝機(jī)完成干品的分裝、密封等過程，將產(chǎn)品嚴(yán)封于容器內(nèi)。5.4 密閉與開放系統(tǒng)通常無菌工藝由一系列的無菌單元操作組成，單元操作分為“密閉”或“開放”系統(tǒng)，采用“密閉”系統(tǒng)可更好的保障無菌水平。5.4.1 “密閉”系統(tǒng)“密閉”系統(tǒng)是通過物理隔離的方式，阻止環(huán)境中微生物進(jìn)入系統(tǒng)內(nèi)部，保

7、護(hù)藥品免受外界的污染。因“密閉”系統(tǒng)設(shè)計(jì)上的優(yōu)越性，在無菌操作過程提供了可靠的無菌保護(hù)措施。企業(yè)進(jìn)行無菌原料藥工藝設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)盡量考慮采用“密閉”系統(tǒng)的可行性?！懊荛]”系統(tǒng)至少具備以下特征：5.4.1.1 能夠?qū)崿F(xiàn)在線滅菌（SIP）或系統(tǒng)在使用前進(jìn)行密閉和滅菌。5.4.1.2 能夠在一個(gè)生產(chǎn)周期內(nèi)保持系統(tǒng)的完整性。且在與其他密閉系統(tǒng)連接時(shí)，能夠保持系統(tǒng)完整性不受破壞。5.4.1.3 在實(shí)施預(yù)防性維護(hù)過程中，有相應(yīng)措施保護(hù)系統(tǒng)的完整性。5.4.2 “開放”系統(tǒng)“開放”系統(tǒng)是不符合“密閉”系統(tǒng)規(guī)定的一項(xiàng)或多項(xiàng)特征的系統(tǒng)，“開放”系統(tǒng)條件下進(jìn)行的操作是影響最終藥品無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的

8、無菌連接、分裝過程容器的更換等，是引入微生物污染的高風(fēng)險(xiǎn)過程。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)重點(diǎn)考察以上過程中無菌保障措施的有效性。模擬試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)及實(shí)施過程要求模擬試驗(yàn)是一個(gè)系統(tǒng)性工程，通過模擬無菌生產(chǎn)工藝全過程，證實(shí)生產(chǎn)過程中無菌保障措施的有效性。因此，模擬試驗(yàn)實(shí)施應(yīng)關(guān)注以下幾方面：開展模擬試驗(yàn)的前提條件開展無菌工藝模擬試驗(yàn)之前，應(yīng)確認(rèn)與無菌工藝相關(guān)的支持性系統(tǒng)和滅菌系統(tǒng)等驗(yàn)證已完成，并達(dá)到了可接受的標(biāo)準(zhǔn)。工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)和輔助設(shè)施按照預(yù)期要求完成了設(shè)計(jì)、安裝、運(yùn)行確認(rèn)及與無菌生產(chǎn)有關(guān)的性能確認(rèn)。已對(duì)工藝設(shè)備、公用系統(tǒng)、輔助設(shè)施等的滅菌方法完成了相應(yīng)的驗(yàn)證，物料及廠房、設(shè)施所用消毒劑及消毒方式完

9、成了相關(guān)的驗(yàn)證。藥液及與產(chǎn)品接觸的氣體、設(shè)備組件、容器具滅菌工藝完成了相應(yīng)的驗(yàn)證。無菌生產(chǎn)區(qū)域的氣流及環(huán)境達(dá)到了設(shè)計(jì)要求，并能穩(wěn)定運(yùn)行。依據(jù)規(guī)定的消毒方法和頻次進(jìn)行環(huán)境消毒，應(yīng)避免消毒劑的過度使用。根據(jù)無菌生產(chǎn)工藝要求建立了相關(guān)文件。參與無菌工藝模擬試驗(yàn)的人員接受了藥品GMP、無菌更衣、無菌操作、微生物知識(shí)和模擬試驗(yàn)方案的培訓(xùn)。進(jìn)入無菌潔凈區(qū)的全部人員通過了更衣程序的確認(rèn)，并采取文件或其他措施，確定了每位參與者可進(jìn)入的區(qū)域和允許的無菌操作項(xiàng)目?；跓o菌風(fēng)險(xiǎn)的模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)應(yīng)結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝，盡量與實(shí)際無菌操作過程保持一致，以求試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)反映生產(chǎn)過程的無菌保障水平。無菌生產(chǎn)工

10、藝的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估無菌生產(chǎn)工藝的設(shè)計(jì)基于對(duì)產(chǎn)品特性、工藝技術(shù)和無菌保證措施的認(rèn)知和經(jīng)驗(yàn)的累積，設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)方案前應(yīng)對(duì)無菌生產(chǎn)工藝開展系統(tǒng)性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，以充分識(shí)別無菌生產(chǎn)過程中潛在風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)，方案設(shè)計(jì)時(shí)充分考慮風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)重點(diǎn)考察和評(píng)估高風(fēng)險(xiǎn)無菌操作過程，如溶媒結(jié)晶工藝中引入晶種的過程。無菌生產(chǎn)工藝的暴露操作是影響最終原料藥無菌特性的重要環(huán)節(jié)，如設(shè)備（或管道）的無菌連接、無菌容器的轉(zhuǎn)運(yùn)和更換、灌裝等關(guān)鍵操作。證實(shí)人員的無菌操作能力能夠滿足無菌生產(chǎn)要求，是實(shí)施模擬試驗(yàn)的目的之一。模擬試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)結(jié)合工藝過程中的開放系統(tǒng)，重點(diǎn)考察人員的無菌操作過程，評(píng)價(jià)人員無菌操作素養(yǎng)和防護(hù)措施

11、的可靠性。6.3 模擬介質(zhì)的選擇與評(píng)價(jià)6.3.1 模擬介質(zhì)的選擇應(yīng)考慮模擬介質(zhì)與無菌工藝的適宜性，結(jié)合被模擬產(chǎn)品的特點(diǎn)以及模擬介質(zhì)的可過濾性、澄清度、滅菌方式等方面選擇模擬介質(zhì)，以盡可能模擬無菌生產(chǎn)全過程。不應(yīng)選擇明顯具有抑菌性的模擬介質(zhì)，以確保模擬試驗(yàn)結(jié)果的可信度。通常可采用的模擬介質(zhì)包括：促進(jìn)微生物生長的培養(yǎng)基和安慰劑。6.3.2 培養(yǎng)基的選擇6.3.2.1 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對(duì)無菌工藝環(huán)境中源自人體的細(xì)菌、芽孢和真菌有良好的促生長效果，是無菌工藝模擬試驗(yàn)常用的培養(yǎng)基。6.3.2.2 如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲(chǔ)存在無氧條件，無菌操作在嚴(yán)格的厭氧環(huán)境中進(jìn)行

12、時(shí)（即氧氣濃度低于0.1%），應(yīng)考慮采用厭氧培養(yǎng)基，如硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基（FTM），也可選擇其他適宜的培養(yǎng)基。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時(shí)，應(yīng)考慮增加厭氧培養(yǎng)基開展模擬試驗(yàn)。6.3.2.3 用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，如有必要需評(píng)估抑菌性產(chǎn)品殘存對(duì)其促生長能力及模擬試驗(yàn)結(jié)果的影響。6.3.2.4 包含動(dòng)物來源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源污染的風(fēng)險(xiǎn)。如BSE（可傳染性海綿腦?。?、TSE（瘋牛?。┑蕊L(fēng)險(xiǎn)，亦可選用植物來源的培養(yǎng)基。6.3.3 培養(yǎng)基的配制6.3.3.1 模擬試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)在適宜區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)備，需注意培養(yǎng)基粉塵在環(huán)境中的擴(kuò)散、殘

13、留及去除，防止其殘存于環(huán)境及設(shè)備表面而造成微生物滋生。通常按照藥典要求或廠商提供的配制方法配制培養(yǎng)基。配制后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快滅菌或除菌過濾。6.3.3.2 培養(yǎng)基在模擬試驗(yàn)前應(yīng)恢復(fù)至室溫，即用型無菌液體培養(yǎng)基儲(chǔ)存和使用條件應(yīng)遵循生產(chǎn)商要求。6.3.4 培養(yǎng)基的除菌與滅菌6.3.4.1 除菌過濾由于培養(yǎng)基的特性與藥液有差異，培養(yǎng)基除菌過濾的濾器型號(hào)可與產(chǎn)品使用的過濾器不同。如因培養(yǎng)基顆?；蛏镓?fù)載較大等原因引起除菌過濾器堵塞時(shí)，可增加預(yù)過濾。應(yīng)考慮降低非無菌培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌生長的風(fēng)險(xiǎn)，以避免微生物生長導(dǎo)致培養(yǎng)基過濾性能的降低。此外除菌過濾的方式無法避免支原體污染，濕熱滅菌或輻照滅菌有助于降低該潛

14、在風(fēng)險(xiǎn)，必要時(shí)可配合除菌過濾聯(lián)合使用。針對(duì)以上情況應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并采取合理應(yīng)對(duì)措施。6.3.4.2 濕熱滅菌在濕熱滅菌過程中應(yīng)考慮避免受熱不均勻或滅菌不充分現(xiàn)象。應(yīng)對(duì)該滅菌方式進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和驗(yàn)證，也可使用無菌干粉或液體成品培養(yǎng)基。滅菌過程應(yīng)遵循生產(chǎn)商推薦的滅菌時(shí)間和溫度的建議，并對(duì)滅菌過程予以驗(yàn)證。確保滅菌后培養(yǎng)基的促生長能力，避免過長時(shí)間及過熱滅菌使培養(yǎng)基碳化造成其促生長性能的降低，應(yīng)進(jìn)行促生長能力試驗(yàn)。6.3.4.3 輻照滅菌使用輻照滅菌的培養(yǎng)基粉末，應(yīng)在適宜環(huán)境下進(jìn)行配制等操作。輻照滅菌過程應(yīng)經(jīng)過驗(yàn)證，并在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證所用的菌種和劑量等信息。6.3.5 培養(yǎng)基促生長能力試驗(yàn)6.

15、3.5.1 應(yīng)在無菌工藝模擬試驗(yàn)前及14天培養(yǎng)后按照現(xiàn)行中國藥典方法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行促生長能力試驗(yàn)。6.3.5.2 按照中國藥典要求，培養(yǎng)基促生長能力試驗(yàn)使用的菌種包括：白色念珠菌（CMCC98001）、黑曲霉（CMCC98003）、枯草芽孢桿菌（CMCC63501）、金黃色葡萄球菌（CMCC26003）、銅綠假單胞菌（CMCC10104）和生孢梭菌（CMCC64941）等。除標(biāo)準(zhǔn)菌株之外，還可考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長試驗(yàn)接種量應(yīng)小于100CFU。按照中國藥典要求進(jìn)行培養(yǎng)，證明培養(yǎng)基能夠支持微生物的生長。6.3.6 其他模擬介質(zhì)的選擇及評(píng)價(jià)6.3.6.1 其他模擬介質(zhì)的選擇

16、對(duì)于無菌粉末及特殊產(chǎn)品，可根據(jù)產(chǎn)品特性、無菌工藝、生產(chǎn)設(shè)備及模擬介質(zhì)特點(diǎn)，也可選用其他模擬介質(zhì)，如安慰劑。模擬介質(zhì)的流動(dòng)性應(yīng)盡可能類似于被模擬產(chǎn)品，易于灌裝/分裝等無菌操作。模擬介質(zhì)還應(yīng)具有易于滅菌，無抑菌性，易溶解等特性。常用模擬介質(zhì)有聚乙二醇、乳糖、甘露醇、氯化鈉、凡士林等。模擬介質(zhì)的滅菌過程應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證并提供相關(guān)報(bào)告，其內(nèi)容包括滅菌方式對(duì)模擬介質(zhì)特性有無不良影響，滅菌后的無菌性。模擬介質(zhì)的包裝形式應(yīng)與被模擬產(chǎn)品的包裝形式保持一致。6.3.6.2 其他模擬介質(zhì)的評(píng)價(jià)在使用模擬介質(zhì)前應(yīng)對(duì)其適用性進(jìn)行確認(rèn)，包括抑菌試驗(yàn)、溶解度試驗(yàn)等，如選用無菌模擬介質(zhì)還應(yīng)進(jìn)行無菌試驗(yàn)。抑菌試驗(yàn)通常使用枯草芽孢桿菌

17、（CMCC63501）和白色念珠菌（CMCC98001）。除此之外，還應(yīng)考慮加入環(huán)境和無菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。無菌模擬介質(zhì)用無菌水分散后，加入到無菌培養(yǎng)基中，達(dá)到模擬工藝選用的濃度范圍，然后每份培養(yǎng)基中接種10100CFU。陽性對(duì)照接種到不含無菌模擬介質(zhì)的試管中，按照現(xiàn)行中國藥典要求培養(yǎng)7天，所有試管應(yīng)明顯微生物生長。6.4 模擬灌裝的數(shù)量和持續(xù)時(shí)間6.4.1 無菌工藝模擬灌裝的數(shù)量應(yīng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性及完成模擬方案中設(shè)計(jì)的各種干預(yù)活動(dòng)，通常模擬灌裝的數(shù)量不宜低于正常生產(chǎn)分裝數(shù)量。6.4.2 應(yīng)對(duì)所設(shè)計(jì)的模擬方式、持續(xù)時(shí)間、灌裝的數(shù)量、預(yù)期收率作出合理說明。6.4.3 模擬試驗(yàn)所用模擬介

18、質(zhì)的量，應(yīng)能夠覆蓋無菌工藝設(shè)備的全部內(nèi)表面，特別是混粉過程，應(yīng)確保模擬介質(zhì)覆蓋混粉器內(nèi)壁全部表面。6.4.4 考慮到模擬最差條件的需要，模擬關(guān)鍵無菌操作過程的維持時(shí)間不應(yīng)低于實(shí)際生產(chǎn)用時(shí)。6.5 容器裝量容器中培養(yǎng)基灌裝量應(yīng)考慮適宜微生物生長的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求，灌裝量不必與產(chǎn)品相同。適宜的裝量既可保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到容器所有內(nèi)表面，又有足夠的氧氣支持微生物的生長。6.6 模擬試驗(yàn)方法的選擇通常無菌原料藥生產(chǎn)工藝由多個(gè)工藝單元構(gòu)成。模擬試驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮試驗(yàn)過程可連續(xù)性問題，并確定采用連續(xù)工藝模擬還是分段模擬。6.6.1 連續(xù)工藝模擬方式6.6.1.1 這種模擬方式是將整個(gè)無

19、菌過程視為一個(gè)整體，模擬介質(zhì)不間斷地完成各個(gè)單元操作，并在最終分裝容器內(nèi)進(jìn)行無菌培養(yǎng)和判定，以評(píng)價(jià)生產(chǎn)過程的無菌保障水平。6.6.1.2 連續(xù)工藝模擬方式的選擇，取決于模擬介質(zhì)在模擬過程中的適用性，如噴霧干燥工藝可采用液體模擬介質(zhì)，通過模擬噴霧干燥過程，可將液體模擬介質(zhì)轉(zhuǎn)化為固體模擬介質(zhì)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分裝、密封等過程的模擬。6.6.1.3 連續(xù)工藝模擬可以真實(shí)反映整體無菌保障水平。但也有其不足之處，如發(fā)現(xiàn)污染，調(diào)查污染源的難度較大。6.6.2 分段模擬方式6.6.2.1 分段模擬方式是將無菌生產(chǎn)過程按照工藝單元分割成若干段，逐段進(jìn)行模擬試驗(yàn)，分段數(shù)量取決于工藝過程和模擬介質(zhì)。模擬試驗(yàn)最終的結(jié)果是各

20、段獨(dú)立模擬試驗(yàn)結(jié)果的累積，對(duì)一些無菌工藝而言，如結(jié)晶工藝，可根據(jù)需要變換采用液體或固體模擬介質(zhì)，保持與實(shí)際工藝過程的一致性。6.6.2.2 分段工藝模擬的優(yōu)點(diǎn)是可以特定評(píng)價(jià)某一單元操作的無菌風(fēng)險(xiǎn)，如發(fā)現(xiàn)微生物污染，相對(duì)于連續(xù)工藝模擬更易于發(fā)現(xiàn)污染源，進(jìn)而采取針對(duì)性糾正措施。6.6.2.3 分段模擬方式也有不足之處，如：需要更多種類或數(shù)量的模擬介質(zhì)；模擬介質(zhì)需要多次無菌化處理，增加潛在污染風(fēng)險(xiǎn)；需要采集更多的物料、環(huán)境和人員監(jiān)測樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。6.7 最差條件的選擇最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境。為了確認(rèn)無菌工藝風(fēng)險(xiǎn)控制的有效性，應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并結(jié)合無菌生產(chǎn)工藝、設(shè)備裝備水

21、平、人員數(shù)量和干預(yù)等因素來設(shè)計(jì)模擬試驗(yàn)的最差條件。包括但不限于以下方面：6.7.1 人員應(yīng)充分考慮人員及其活動(dòng)對(duì)無菌生產(chǎn)工藝帶來的風(fēng)險(xiǎn)，如模擬生產(chǎn)過程的最多人數(shù)，當(dāng)操作人員數(shù)量減少可能導(dǎo)致其他方面污染風(fēng)險(xiǎn)增加時(shí)，則此類條件也視為最差條件之一。參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，同時(shí)應(yīng)考慮以上人員交叉作業(yè)、班次輪換、更衣、夜班疲勞狀態(tài)等因素。6.7.2 時(shí)限應(yīng)適當(dāng)考慮模擬實(shí)際生產(chǎn)操作過程中房間、設(shè)備、物料消毒或滅菌后放置的最長時(shí)間及最長的工藝保留時(shí)限等，如：混粉或分裝前的等待時(shí)限。6.7.3 分裝速度模擬試驗(yàn)應(yīng)涵蓋產(chǎn)品實(shí)際灌裝速度范圍，基于無

22、菌風(fēng)險(xiǎn)的角度分析評(píng)價(jià)灌裝速度對(duì)工藝過程及其他方面的影響程度。如模擬最長的暴露時(shí)間或模擬最大操作強(qiáng)度/難度。6.7.4 環(huán)境6.7.4.1模擬試驗(yàn)挑戰(zhàn)的最差環(huán)境，應(yīng)考慮選擇無菌生產(chǎn)周期的末端，或連續(xù)生產(chǎn)期間，環(huán)境消毒周期性內(nèi)最長的時(shí)間間隔。6.7.4.2 日常生產(chǎn)中，針對(duì)微生物污染事件而制定了糾正措施。在模擬試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)糾正措施的有效性給予確認(rèn)。6.8 干預(yù)設(shè)計(jì)6.8.1 概念干預(yù)是指由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與無菌工藝生產(chǎn)有關(guān)的所有操作活動(dòng)。干預(yù)可分為固有干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計(jì)劃的無菌操作，如環(huán)境監(jiān)控、設(shè)備安裝或容器更換等；糾正性干預(yù)是指對(duì)無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如更換部件、

23、設(shè)備故障排除等。6.8.2 原則無菌生產(chǎn)過程各種允許的干預(yù)活動(dòng)應(yīng)該文件化，明確規(guī)定正常生產(chǎn)活動(dòng)和干預(yù)活動(dòng)，模擬試驗(yàn)中干預(yù)設(shè)計(jì)應(yīng)與實(shí)際的生產(chǎn)活動(dòng)保持一致，模擬試驗(yàn)不應(yīng)挑戰(zhàn)不合理的干預(yù)，以證明其合理性。在模擬試驗(yàn)方案中應(yīng)制定干預(yù)清單和實(shí)施計(jì)劃，模擬試驗(yàn)時(shí)逐一實(shí)施并記錄。6.8.3 干預(yù)類型及頻次6.8.3.1 模擬試驗(yàn)方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預(yù)和糾正性干預(yù)（如維修、故障停機(jī)、設(shè)備調(diào)試）的類型、頻次。6.8.3.2 固有干預(yù)及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干預(yù)應(yīng)在每次模擬中都實(shí)施，偶發(fā)性的干預(yù)可周期性的模擬。如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑貑?、無菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故障排除等。6.8.3.3 模擬試驗(yàn)應(yīng)設(shè)計(jì)并實(shí)施足夠多

24、的糾正性干預(yù)。干預(yù)頻次的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮生產(chǎn)過程按比例覆蓋模擬試驗(yàn)的全過程。6.8.3.4 對(duì)于無菌取樣過程，應(yīng)考慮分布在分裝的前、中、后階段，調(diào)整裝量、取樣、重復(fù)密封過程均應(yīng)考慮模擬，并為生產(chǎn)過程中處理該類問題提供參考。6.8.4 人員實(shí)施干預(yù)的人員（應(yīng)包括操作、維修人員等）應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)和考核，能夠按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預(yù)。標(biāo)準(zhǔn)化的固有干預(yù)可由部分操作人員實(shí)施并據(jù)此評(píng)價(jià)其他人。對(duì)于復(fù)雜操作，如分裝機(jī)裝配或故障排除等，每個(gè)從事此類操作的人員都應(yīng)在試驗(yàn)過程進(jìn)行模擬，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常生產(chǎn)的操作條件。6.8.5 干預(yù)后產(chǎn)品（容器）的處理實(shí)際工藝中如明確規(guī)定受干預(yù)影響的產(chǎn)品（容器）應(yīng)從生產(chǎn)線上剔除，

25、在模擬試驗(yàn)時(shí)也可剔除，模擬試驗(yàn)時(shí)產(chǎn)生的這類產(chǎn)品（容器）可不培養(yǎng)。無需培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)予以記錄并評(píng)估其合理性。如在干預(yù)發(fā)生前已經(jīng)密封，但在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試驗(yàn)時(shí)也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評(píng)估。6.8.6 記錄模擬試驗(yàn)過程中的所有干預(yù)必須記錄，用以評(píng)估干預(yù)對(duì)無菌保證的影響。糾正性干預(yù)記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預(yù)的類型、位置、次數(shù)；固有干預(yù)記錄至少包括干預(yù)內(nèi)容和發(fā)生頻率等信息。6.9 容器規(guī)格對(duì)于生產(chǎn)線存在多種相似的容器規(guī)格（如：同一品種的不同容器規(guī)格）時(shí)，應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估選擇模擬的容器規(guī)格，通常選擇最小和最大尺寸的容器進(jìn)行模擬。特殊規(guī)格的容器應(yīng)考慮單獨(dú)進(jìn)行模擬。6.10 培養(yǎng)與觀察6

26、.10.1 模擬介質(zhì)的處理無菌工藝模擬試驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)所使用的模擬介質(zhì)（培養(yǎng)基、安慰劑）進(jìn)行全部處理和培養(yǎng)。非培養(yǎng)基模擬介質(zhì)可通過適當(dāng)?shù)臒o菌過濾器系統(tǒng)將微生物轉(zhuǎn)移至濾膜或其他便于培養(yǎng)、觀察的介質(zhì)上，之后濾膜或其他介質(zhì)浸入培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)；也可在最終包裝容器內(nèi)加注無菌培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基的濃度應(yīng)能支持潛在微生物的生長，如：TSB一般濃度控制在3%水平。6.10.2 培養(yǎng)條件6.10.2.1 應(yīng)對(duì)容器翻轉(zhuǎn)、倒置等，確保培養(yǎng)基接觸容器（包括密封件）的所有內(nèi)表面。培養(yǎng)時(shí)間至少14天?？蛇x擇兩個(gè)溫度進(jìn)行培養(yǎng)：在2025培養(yǎng)至少7天，然后在3035培養(yǎng)至少7天。如選擇其他培養(yǎng)計(jì)劃，應(yīng)有試驗(yàn)數(shù)據(jù)支持所選培

27、養(yǎng)條件的適用性。在整個(gè)培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。6.10.2.2 如實(shí)際生產(chǎn)過程中，分裝容器內(nèi)需要填充惰性氣體，在模擬試驗(yàn)過程應(yīng)考慮用無菌空氣替代，避免影響微生物生長。6.10.2.3 如必須采用惰性氣體用于模擬厭氧無菌工藝（氧氣濃度低于0.1%）及培養(yǎng)厭氧微生物，應(yīng)確認(rèn)惰性氣體與所選培養(yǎng)基的組合，能夠支持微生物的生長。6.10.3 培養(yǎng)后的檢查6.10.3.1 培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)所有模擬灌裝產(chǎn)品逐一進(jìn)行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進(jìn)行目視觀察。6.10.3.2 在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時(shí)應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步調(diào)查。如在檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑?/p>

28、因調(diào)查并采取糾正措施。6.10.3.3 培養(yǎng)容器不透明時(shí)，應(yīng)考慮將轉(zhuǎn)移至透明容器觀察，以確保有陽性時(shí)能被觀察到。6.11 計(jì)數(shù)與數(shù)量平衡為保證模擬試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，應(yīng)對(duì)各階段灌裝數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，如灌裝數(shù)量、干預(yù)剔除數(shù)量、培養(yǎng)前數(shù)量和培養(yǎng)后無菌檢查數(shù)量，各階段數(shù)量應(yīng)平衡。如發(fā)現(xiàn)不平衡，應(yīng)調(diào)查原因并判斷本次模擬試驗(yàn)結(jié)果的有效性。6.12 環(huán)境及監(jiān)控6.12.1 環(huán)境監(jiān)控方案設(shè)計(jì)應(yīng)通過風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定日常生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控的各要素，如取樣點(diǎn)、取樣對(duì)象、取樣頻率、警戒和糾偏標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)施方法等。模擬試驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用與日常生產(chǎn)相同的環(huán)境監(jiān)控方案為基礎(chǔ)，模擬生產(chǎn)狀況，包括采樣儀器、耗材的轉(zhuǎn)移、消毒等，任何異于日常環(huán)境監(jiān)控

29、的情況都應(yīng)有說明和記錄。與實(shí)際生產(chǎn)過程相比，模擬試驗(yàn)中的環(huán)境監(jiān)控應(yīng)考慮增加額外的監(jiān)測環(huán)節(jié)，如人員監(jiān)測。6.12.2 環(huán)境監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)處理6.12.2.1 環(huán)境（包括人員）監(jiān)控的數(shù)據(jù)結(jié)果用于評(píng)估模擬生產(chǎn)過程中的環(huán)境條件是否適宜于生產(chǎn)。當(dāng)模擬試驗(yàn)出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)可用于進(jìn)行根本原因的調(diào)查。6.12.2.2 模擬試驗(yàn)時(shí)發(fā)生的環(huán)境偏差并不是模擬試驗(yàn)成功的否決條件，是否通過試驗(yàn)取決于調(diào)查的結(jié)果。環(huán)境監(jiān)測結(jié)果異常時(shí)，即使試驗(yàn)結(jié)果成功，也應(yīng)進(jìn)行必要的調(diào)查和糾正。即使最終決定在環(huán)境監(jiān)控結(jié)果超出糾偏標(biāo)準(zhǔn)時(shí)無菌工藝模擬試驗(yàn)依然通過，也不意味著日常生產(chǎn)可以在同等環(huán)境偏差的條件下進(jìn)行。6.13 人員因素所有被授

30、權(quán)進(jìn)行無菌操作的人員，包括生產(chǎn)操作人員、監(jiān)督人員和維修人員等，每年至少參與一次成功的無菌工藝模擬試驗(yàn)。7. 可接受標(biāo)準(zhǔn)與結(jié)果評(píng)價(jià)無菌工藝模擬試驗(yàn)可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)當(dāng)遵循現(xiàn)行GMP無菌藥品附錄中的有關(guān)規(guī)定。7.1 應(yīng)采用定性標(biāo)準(zhǔn)判定模擬試驗(yàn)結(jié)果，定性標(biāo)準(zhǔn)意味著模擬試驗(yàn)只接受零污染的結(jié)果，排除了定量標(biāo)準(zhǔn)中識(shí)別微生物污染來源的困惑和潛在不確定性風(fēng)險(xiǎn)。7.2 應(yīng)通過評(píng)估確定模擬介質(zhì)的預(yù)期收率，并作為模擬試驗(yàn)結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)之一。8. 污染調(diào)查與糾正措施= 8 * Arabic8.1 無菌工藝模擬試驗(yàn)存在污染，即意味著無菌保證可能存在問題，出現(xiàn)的任何污染樣品均應(yīng)視為偏差并徹底調(diào)查，并為改進(jìn)無菌工藝提供數(shù)據(jù)支持。

31、= 8 * Arabic8.2 可通過查看無菌工藝模擬試驗(yàn)的錄像或現(xiàn)場記錄，還原模擬試驗(yàn)過程中人員操作行為、干預(yù)及設(shè)備運(yùn)行等狀況，有利于分析問題的來源。對(duì)無菌工藝模擬試驗(yàn)實(shí)施過程相關(guān)的所有記錄進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查，并關(guān)注各種偏差、驗(yàn)證、變更等，所有偏離原始驗(yàn)證狀態(tài)情況均應(yīng)逐一評(píng)估并說明。檢查所有相關(guān)人員的培訓(xùn)和資質(zhì)確認(rèn)記錄。8.3 建議對(duì)模擬試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的微生物進(jìn)行鑒別，以便開展污染途徑的調(diào)查，并列入企業(yè)微生物菌種庫。8.4 調(diào)查的關(guān)鍵是查找污染來源，結(jié)合調(diào)查需要，應(yīng)制定一個(gè)完整的取樣和微生物鑒別計(jì)劃，調(diào)查過程應(yīng)有記錄并歸檔。調(diào)查結(jié)果應(yīng)形成書面報(bào)告并得到質(zhì)量管理部門的批準(zhǔn)。8.5 如調(diào)查找到指定的原因，

32、應(yīng)制定糾正預(yù)防措施，并再次進(jìn)行模擬試驗(yàn)，以證明措施的有效性。如調(diào)查無指定原因，應(yīng)對(duì)生產(chǎn)工藝過程的無菌控制開展系統(tǒng)性評(píng)估，在現(xiàn)有模擬試驗(yàn)方案的基礎(chǔ)上增加取樣點(diǎn)和頻次，以獲得更多數(shù)據(jù)支持原因調(diào)查，同時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加試驗(yàn)批次。9. 模擬試驗(yàn)的周期與再驗(yàn)證9.1 新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)前，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進(jìn)行3次合格的模擬試驗(yàn)。9.2 正常生產(chǎn)中，每班次每半年應(yīng)至少進(jìn)行一次模擬試驗(yàn)。對(duì)于因停產(chǎn)的生產(chǎn)線，在恢復(fù)正式生產(chǎn)前應(yīng)考慮進(jìn)行無菌工藝模擬試驗(yàn)。9.3 空氣凈化系統(tǒng)、無菌生產(chǎn)用設(shè)備設(shè)施、無菌工藝及人員重大變更或設(shè)備的重大維修后，應(yīng)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確認(rèn)再模擬試驗(yàn)批次。9.4 應(yīng)充分評(píng)估生產(chǎn)線的風(fēng)險(xiǎn)，在發(fā)現(xiàn)設(shè)施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測出現(xiàn)不良趨勢或無菌不合格時(shí)，也應(yīng)考慮再次進(jìn)行模擬試驗(yàn)。10. 無菌工藝模擬試驗(yàn)的局限性無菌工藝模擬試驗(yàn)雖然基于無菌風(fēng)險(xiǎn)而開展的，但考慮到每次無菌操作過程的唯一性，成功的無菌工藝模擬試驗(yàn)是允許正式生產(chǎn)的必要條件，但應(yīng)注意其局限性。10.1 以現(xiàn)行藥品GMP法規(guī)要求為準(zhǔn)則，評(píng)價(jià)無菌生產(chǎn)過程的法規(guī)符合性，低于