生物樣本庫的建立與管理課件

1、生物樣本庫的建立與管理生物標(biāo)本庫 (biological specimen bank, BSB):是指標(biāo)準(zhǔn)化地收集、保存用于各種研究的正常或病理標(biāo)本，包括人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過的生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)的臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。 重要性 人體生物樣本為聯(lián)系日益發(fā)現(xiàn)的分子（基因、蛋白等）信息與臨床疾病關(guān)系的橋梁。尤其應(yīng)用于：鑒定、驗(yàn)證藥物靶點(diǎn)；研究疾病發(fā)病機(jī)制；疾病相關(guān)分子標(biāo)記物篩選；分子分型與個性化治療等。標(biāo)準(zhǔn)化生物樣品庫是基因組、功能基因組等生命科學(xué)研究與生物醫(yī)藥研發(fā)的關(guān)鍵源頭，是眾多

2、重要基因、蛋白等科研成果快速產(chǎn)業(yè)化、應(yīng)用到臨床（分子分型檢測、診斷與疾病的預(yù)測、預(yù)防及個性化治療等的重要保證，毫無疑問的也是生命科學(xué)與生物醫(yī)藥技術(shù)自主創(chuàng)新體系中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)與保證。生物樣本庫政策法規(guī)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn) 倫理規(guī)范ISO標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室安全臨床實(shí)驗(yàn)室倫理運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOPs） 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)樣本采集樣本處理樣本質(zhì)量檢驗(yàn)樣本儲存樣本運(yùn)輸DNA質(zhì)量鑒定、RNA質(zhì)量鑒定、蛋白質(zhì)質(zhì)量鑒定知情同意書質(zhì)量審查樣本運(yùn)輸樣本轉(zhuǎn)移協(xié)議倫理委員會倫理審查ISO15189:2003 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力的專用要求CNAS-CL02 醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)量和能力的認(rèn)可準(zhǔn)則ISO/IEC17025:2005 檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)

3、室能力的通用要求CNAS-CL01 檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則ISO9001:2008/GBT19001-2008 質(zhì)量管理系統(tǒng) 要求GB/T1.1-2009 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則ISO標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室安全GB 19489-2008 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求CNAL/AC30-2005 實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則WS/T233-2002 微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則GB 50346-2004 生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范臨床實(shí)驗(yàn)室GB/T 20468-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南GB/T 20469-2006 臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)計總則GB/T 20470-2006 臨床實(shí)驗(yàn)

4、室室間質(zhì)量評價要求WS/T102-1998 臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類與代碼WS/T224-2002 真空采血管及其添加劑WS/T225-2002 臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本的收集與處理WS/T227-2002 臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求WS/T228-2002 定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評價WS/T230-2002 臨床診斷中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)應(yīng)用WS/T249-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室廢物處理原則WS/T250-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的要求WS/T251-2005 臨床實(shí)驗(yàn)室安全準(zhǔn)則WS/T255-2005 臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考測量實(shí)驗(yàn)室物流術(shù)語液氮生物容器中國民用航空危險品運(yùn)輸管理規(guī)定危險物品航空安全運(yùn)

5、輸技術(shù)細(xì)則運(yùn)輸DNA提取和純化操作規(guī)程RNA提取和純化操作規(guī)程蛋白質(zhì)提取和保存操作規(guī)程細(xì)胞系建立操作規(guī)程血液樣本處理操作規(guī)程樣本處理低溫凍存被公認(rèn)為是組織與器官長期保存最有效的方法之一。其原理是通過降低細(xì)胞的代謝率起到保護(hù)組織細(xì)胞的作用。但樣本庫內(nèi)的生物樣本是否可被持續(xù)使用還依賴于對儲存樣本的質(zhì)量控制，該項(xiàng)工作主要由病理學(xué)家進(jìn)行。病理學(xué)家需對提取的組織先進(jìn)行病理切片觀察若其中腫瘤成分超過75則認(rèn)為質(zhì)量良好，如不足65則應(yīng)從研究中剔除。對樣本得以儲存的病例應(yīng)進(jìn)行定期臨床隨訪，以便獲得疾病治療效果、臨床進(jìn)展及是否生存等重要資料。從有關(guān)單位獲得的知情同意書看，92的患者同意出院以后接受隨訪。當(dāng)前發(fā)展

6、起來的分子生物學(xué)新技術(shù)大多要求研究樣本中的核酸或蛋白質(zhì)保存完好，故對于組織樣本質(zhì)量要求很高。目前，國內(nèi)外大型腫瘤組織庫以采用一80深低溫冰箱儲存為主，但在這樣的低溫環(huán)境下生物大分子活力究竟能保存多久仍無定論。眾多研究顯示，長期凍存對于DNA大分子的穩(wěn)定性影響不大，甚至石蠟包埋組織塊中的DNA也可進(jìn)行分子生物學(xué)分析。RNA分子則易被廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)、皮膚、唾液、汗液及周圍環(huán)境中的RNA酶所降解。使用液氮保存是保存RNA活性的最理想方法，當(dāng)溫度降至液氮溫度時，細(xì)胞組織中所有的生物化學(xué)、生物物理過程均處于停止?fàn)顟B(tài) 但限于空間及經(jīng)費(fèi)等原因，大型液氮儲藏罐或液氮冰箱尚難以推廣普及。對于組織RNA的質(zhì)量分

7、析主要依據(jù)28S與18S的比值進(jìn)行，比值如在2左右認(rèn)為質(zhì)量好，比值小于l則認(rèn)為RNA已降解。有關(guān)長期低溫凍存對于蛋白質(zhì)分子的影響還缺乏系統(tǒng)性研究報道，需各生物樣本庫在今后的質(zhì)量控制分析研究中不斷積累經(jīng)驗(yàn)加以闡明。生物樣本長期保存的質(zhì)量控制倫理委員會知情同意書分為兩部分。第一部分 知情部分：1項(xiàng)目的介紹項(xiàng)目名稱、研究者、申辦者、撰寫版本號或日期。聲明受試者參加的項(xiàng)目是一個試驗(yàn)性研究工作。 闡明研究的目的。描述試驗(yàn)的過程。說明研究中受試者將參與的時間和期限。隨訪的次數(shù)和過程。入選標(biāo)準(zhǔn)/排除標(biāo)準(zhǔn)。2說明參與本研究可能帶來的益處：受試者本人及社會群體3應(yīng)說明研究的保密性，受試者的記錄將被妥善保管，作保

8、密處理，但同時也應(yīng)告知受試者資料有可能會接受有關(guān)部門(倫理委員會、食品藥品監(jiān)督管理局)的監(jiān)察， 但不得對外披露其內(nèi)容。 4明確試驗(yàn)過程中聯(lián)系醫(yī)生的姓名和聯(lián)系辦法，他將回答受試者所有關(guān)于試驗(yàn)的問 題，并能當(dāng)受試者出現(xiàn)緊急情況時及時聯(lián)系。5闡明受試者的權(quán)利（自由參加和退出、知情、同意），參加試驗(yàn)是自愿的，即使中 途退出試驗(yàn)也不會有權(quán)益上的損失或影響治療。6研究者或指定的研究人員將對受試者作詳細(xì)說明，以使其充分了解以上內(nèi)容，給受試者充分時間考慮并作出是否參加研究的決定。 7該試驗(yàn)方案經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)實(shí)施，試驗(yàn)過程中有任何違反研究方案的情況，受試者可以直接向倫理委員會咨詢。 第二部分 同意部分：1我已

9、認(rèn)真閱讀該知情同意書，研究人員已經(jīng)向我做了詳盡說明并解答了我的關(guān)問 題，我已充分知曉以上內(nèi)容，同意參加研究。 受試者簽字(印刷體) (手寫體)， 日期 (手寫體) ，受試者法定代理人簽字(必要時),(印刷體) 。2 我或我的研究人員已向該受試者充分解釋和說明了本研究的目的、操作過程 以及受試者參加該試驗(yàn)可能存在的風(fēng)險和潛在的利益，并滿意地回答了受試者的 所有有關(guān)問題。 主要研究者或研究者指定的研究人員(對受試者進(jìn)行告知者)簽名 (印刷體) (手寫體) 日期。知情同意書 1科學(xué)、醫(yī)學(xué)和法律詞匯要明確準(zhǔn)確，前后一致； 2語句短小精煉，避免長句； 3段落短小，觀點(diǎn)明確； 4盡量使用陳述句，人稱代詞應(yīng)

10、該明確身份； 5使用清晰易讀的字體打印，一般使用5號字體； 6內(nèi)容使用的語言應(yīng)該簡明易懂，具有可讀性，一般應(yīng) 適合初中畢業(yè)者的閱讀能力； 7避免使用簡寫字或首字母縮寫的詞匯； 8避免使用有開脫研究者或研究機(jī)構(gòu)責(zé)任的語言；不稱“病人”或“患者”，知情同意書中的所有參加試驗(yàn)的志愿者稱為“受試者”.知情同意書的撰寫要求范例倫理委員會由國內(nèi)外倫理研究者，律師，醫(yī)生，科研工作者等共同組成。倫理委員會成員應(yīng)有足夠的權(quán)力和獨(dú)立性，他們參與到樣本庫建設(shè)的每一個子項(xiàng)目中來，重點(diǎn)探討樣本庫建設(shè)的子項(xiàng)目對社會倫理帶來的影響，并給與合理適當(dāng)?shù)慕ㄗh。解決樣本庫建設(shè)和利用過程中的倫理法律問題，并為國家制定相關(guān)法律法規(guī)和決

11、策提供依據(jù)。由于倫理學(xué)是一門不斷發(fā)展的學(xué)科，倫理和法律委員會的工作也會隨著樣本庫項(xiàng)目的建設(shè)逐漸深入。倫理委員會審核意見書1、 所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)倫理委員會批準(zhǔn)。2、組織標(biāo)本或血液等體液標(biāo)本獲取前需經(jīng)患者知情同意。3、需向手術(shù)室與病理室遞交收集標(biāo)本的申請，并標(biāo)注標(biāo)本留取與存放的注意事項(xiàng)。4、確保手術(shù)切除標(biāo)本離體后在最短時間內(nèi)行低溫凍存。5、手術(shù)切除的大體標(biāo)本應(yīng)先由病理醫(yī)師檢查外觀。并作初步測量記錄，然后再切取組織。6、患者生物樣本應(yīng)當(dāng)優(yōu)先確保外科病理診斷需求，標(biāo)本直徑1 cm時不宜切取組織凍存，只能用4甲醛溶液固定后進(jìn)行組織切片診斷：對于直徑1 cm 的腫瘤。則分別切取腫瘤和盡量遠(yuǎn)離腫瘤的正常區(qū)域(視

12、外科手術(shù)切除范圍而定，空腔器官手術(shù)可取距切緣至少3 cm以上的非腫瘤組織)：同時，應(yīng)留取一部分組織采用4甲醛溶液固定后作組織切片以供凍存標(biāo)本的質(zhì)控分析。標(biāo)本庫建立的基本工作流程生物樣本和相關(guān)數(shù)據(jù)的使用1) 制定明確的生物樣本使用指導(dǎo)原則，包括臨床數(shù)據(jù)的共享，應(yīng)符合倫理和相關(guān)法規(guī)。同時應(yīng)考慮利用生物樣本開展科學(xué)研究的特殊性，指導(dǎo)原則應(yīng)具有一定的靈活性。2) 確保課題研究者能及時、公正、合理的使用生物樣本和相關(guān)的臨床資料，無須承擔(dān)過多的行政管理費(fèi)用。樣本的使用按下列程序進(jìn)行:研究計劃的科學(xué)性評價；研究者簽署有關(guān)生物樣本和相關(guān)資料的保密協(xié)議；樣本轉(zhuǎn)運(yùn)協(xié)議；研究者或課題組的科學(xué)記錄；研究符合倫理和法規(guī)

13、；能夠支付所使用生物樣本的費(fèi)用。除此之外，也應(yīng)對使用生物樣本和資料與預(yù)期研究結(jié)果的相關(guān)性進(jìn)行評價。對于樣本使用不當(dāng)或過量使用的問題也應(yīng)考慮，通過協(xié)調(diào)解決。指導(dǎo)原則適用于所有新采集和現(xiàn)存的樣本。使用生物樣本支付成本費(fèi)用是合理的，收取的費(fèi)用應(yīng)僅限于補(bǔ)償和推廣應(yīng)用的費(fèi)用。如果生物樣本庫由于資金缺乏或其他原因不能進(jìn)行生物樣本的保存并提供高質(zhì)量的樣本供使用，就必需關(guān)閉。對已保存的樣本應(yīng)按指導(dǎo)原則進(jìn)行處理。要明確樣本采集工作人員的職責(zé)的權(quán)力，并通過法規(guī)授予相應(yīng)的權(quán)限，樣本使用應(yīng)避免特權(quán)，尤其是使用樣本和資料必須按指導(dǎo)原則執(zhí)行，包括監(jiān)管人員。采集和存貯的生物樣本以保障開展科學(xué)研究為目的，為促進(jìn)生物醫(yī)學(xué)水平的提高為目標(biāo)。倫理委員會應(yīng)當(dāng)對擬開展的研究項(xiàng)目進(jìn)行評估。安全防護(hù)1）研究機(jī)構(gòu)要保障生物標(biāo)本庫、包括采集和使用生物樣本人員的安全。相關(guān)的場地設(shè)備需要符合國家的相關(guān)法規(guī)要求和樣本庫自身的特別要求。對潛在的危險應(yīng)該以相應(yīng)的警示標(biāo)示清楚標(biāo)明。對潛在的職業(yè)風(fēng)險以及預(yù)防，應(yīng)對方案在崗前應(yīng)該充分告知并檢驗(yàn)。2）研