支原體專題講座

1、 支原體Mycoplasma1第1頁第一節(jié) 概述支原體（Mycoplasma）缺乏細胞壁，呈高度多形性能經過濾菌器能夠在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖最小原核細胞型微生物2第2頁柔膜體綱支原體目肺炎支原體，人型支原體，生殖支原體，穿透支原體，發(fā)酵支原體，梨支原體等解脲脲原體分類支原體科無膽甾原體科螺原體科支原體屬脲原體屬3第3頁形態(tài)染色細胞個體小，直徑0.3-0.5 mm。 無細胞壁，只有細胞膜，呈高度多形性。革蘭氏染色陰性，不易著色。4第4頁細胞膜結構細胞膜厚度7.5-10 nm，有外、中、內三層。 內外兩層為蛋白質及多糖 中間層為含膽固醇脂質成份凡能作用于膽固醇物質，如皂素、毛地黃甙、二性霉素B等

2、均能破壞細胞膜，使支原體死亡。有支原體有莢膜、特殊頂端結構等。5第5頁特殊頂端結構肺炎支原體、生殖支原體、穿透支原體等含有特殊頂端結構，呈燒瓶狀。頂端結構含有黏附于宿主上皮細胞表面作用，與支原體致病性相關。6第6頁培養(yǎng)特征營養(yǎng)要求：高于普通細菌，培養(yǎng)基中需加入血清以提供膽固醇與其它長鏈脂肪酸，多數支原體還需添加酵母浸液、組織浸液、核酸提取物和輔酶。pH：適宜pH為7.6-8.0，低于7.0時易死亡。但解脲脲原體最適pH為6.0-6.5。7第7頁培養(yǎng)特征氧氣：兼性厭氧，但大多數寄生性支原體在37時在微氧環(huán)境（含5% CO2和90% N2）中生長最正確。繁殖方式：通常以二分裂繁殖，也能夠出芽、分枝

3、、斷裂等方式增殖。8第8頁菌落形態(tài)支原體生長遲緩，3-4 h繁殖一代。在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48-96 h 形成菌落。在瓊脂含量較少固體培養(yǎng)基上，2-7天后形成“荷包蛋”樣菌落（“fried egg” colony）。菌落中心致密隆起，深入瓊脂，周圍為較薄透明顆粒區(qū)。9第9頁支原體經典菌落10第10頁液體培養(yǎng)基：清亮，用顏色改變單位（CCU）表示。肺炎支原體培養(yǎng)結果 1. 培養(yǎng)基對照；25. 肺炎支原體培養(yǎng)第25天 1 2 3 4 511第11頁支原體與細菌L型支原體有許多特征與細菌L型相同 無細胞壁，呈多形性 能經過濾菌器 對青霉素不敏感，對低滲敏感 “荷包蛋”樣菌落 臨床表現相同，為間質性肺炎

4、等。12第12頁支原體與細菌L型區(qū)分支原體細菌L型非細菌 與原菌相關，能夠回復細胞膜含高濃度膽固醇細胞膜不含膽固醇培養(yǎng)時需要膽固醇大多需要高滲培養(yǎng)生長慢，菌落小菌落稍大液體培養(yǎng)混濁度極低有一定混濁度，可黏附于管底或管壁13第13頁生化反應支原體葡萄糖 精氨酸尿素吸附細胞 致病性肺炎支原體+-紅細胞肺炎、支氣管炎人型支原體-+-泌尿生殖道感染生殖支原體+-泌尿生殖道感染穿透支原體+-紅細胞CD4+T細胞巨噬細胞 條件感染多見于艾滋病解脲脲原體-+-泌尿生殖道感染流產及不孕不育14第14頁抗原結構支原體抗原結構主要來自細胞膜，由蛋白質和糖脂組成。不一樣支原體都有其特有抗原結構，交叉較少，在判定支原

5、體時有主要意義。15第15頁抗原結構 補體結合試驗可檢測糖脂類抗原 ELISA試驗可檢測蛋白質類抗原 血清抗體判定： 生長抑制試驗（growth inhibition test, GIT） 代謝抑制試驗（metabolic inhibition test, MIT） 16第16頁抵抗力抵抗力比細菌弱，易被脂溶劑及慣用消毒劑殺滅，對紫外線、低滲、干燥及熱敏感。對醋酸鉈、結晶紫和亞碲酸鉀抵抗力強。對影響細胞壁合成抗生素不敏感。對干擾蛋白質合成抗生素和妨礙DNA復制藥品敏感。17第17頁致病性黏附素、莢膜、毒性代謝產物、超抗原、其它：如穿透支原體黏附侵入CD4T細胞引發(fā)損傷。支原體主要寄生于細胞外，

6、普通為表面感染，大多不侵入血液及組織細胞內。致病物質:18第18頁 固有免疫 適應性免疫體液免疫：抗膜蛋白抗體包含IgM、IgG和SIgA。細胞免疫：主要是特異性CD4Th1 細胞分泌細胞因子。免疫性以體液免疫為主，細胞免疫也起作用。19第19頁第二節(jié) 主要病原性支原體肺炎支原體 Mycoplasma Pneumoniae解脲脲原體 Ureaplasma Urealyticum穿透支原體 Mycoplasma Penetrans20第20頁肺炎支原體菌體大小為0.2-0.3 mm，呈短細絲狀含有特殊頂端結構。位于該結構表面P1蛋白，是肺炎支原體與宿主細胞膜受體結合部位。P1表面蛋白（170 k

7、Da）和P30（32 kDa）為主要黏附蛋白。21第21頁肺炎支原體22第22頁生物學特征首次分離應在含血清和新鮮酵母浸出液培養(yǎng)基中，普通10天左右長出菌落，屢次傳代后生長加緊。產生過氧化氫和溶血素。能發(fā)酵葡萄糖，不分解精氨酸與尿素。23第23頁致病性與免疫性主要侵犯呼吸系統傳輸路徑：經過飛沫傳輸夏末秋初為多發(fā)季節(jié)，以5-20歲青少年發(fā)病率最高。流行特點為間歇性。每4-6年出現地域性流行，流行連續(xù)數月至一年。24第24頁所致疾病引發(fā)病理改變以間質性肺炎及急性細支氣管炎為主，又稱原發(fā)性非經典性肺炎（primary atypical pneumonia）。臨床以咳嗽、發(fā)燒、頭痛、咽痛和肌肉痛為主。

8、有時有呼吸道外并發(fā)癥，如皮疹、心血管和神經系統癥狀。25第25頁免疫性 血清特異性IgM、IgG及SIgA和致敏淋巴細胞； 呼吸道局部黏膜產生SIgA對預防再感染有較強 保護作用；出現IgE介導I型超敏反應，促使哮喘病急性發(fā)作。 致病性與免疫性26第26頁血清學檢驗冷凝集試驗用病人血清與人O型血紅細胞或本身紅細胞混合，4過夜時可發(fā)生凝集，而在37時凝集又分散解離開，但僅50左右患者才出現陽性。此反應為非特異性。快速診療ELISA：檢測P1和P30蛋白mAbs。PCR：從痰標本中檢測16S rRNA或P1蛋白基因。27第27頁微生物學檢驗PCR分離培養(yǎng) 37，1-2周經典菌落判定生化反應形態(tài)染色

9、GIT, MIT標本DNA測序ELISA快速、特異、敏感28第28頁防治標準疫苗預防效果尚無定論。治療首選大環(huán)內酯類抗生素。青霉素類及頭孢類抗生素無效。29第29頁 人型支原體（一）生物學性狀分解精氨酸。最適pH7.27.4； 固體培養(yǎng)基上形成200300 m菌落，呈經典 “油煎蛋”狀。（二）致病性借居于泌尿生殖道，經過性接觸傳輸，可引發(fā)附睪炎、盆腔炎、產褥熱等；新生兒感染則可引發(fā)肺炎、腦炎和腦膿腫。30第30頁（三）微生物學檢驗法人型支原體在液體培養(yǎng)基中生長左圖：培養(yǎng)基對照； 右圖：人型支原體分解精氨酸產堿，酚紅指示劑變紅。病原體檢測 液體和固體培養(yǎng)基接種；特異抗血清做GIT與MIT深入判定

10、。31第31頁核酸檢測 PCR檢測：檢測16S rRNA基因。此法快速、特異，適宜于大批量標本檢測。32第32頁預防： 加強宣傳教育，注意性衛(wèi)生，切斷傳輸路徑。治療：人型支原體對大環(huán)內酯類抗生素不敏感，對紅霉素（100 mg/L）不敏感；可用四環(huán)素類、喹諾酮類藥品治療，但有耐藥株產生。（四）防治標準33第33頁 生殖支原體生殖支原體基本形態(tài)為燒瓶狀，能發(fā)酵葡萄糖使培養(yǎng)基變酸；培養(yǎng)基上不生長，須在無醋酸鉈SP-4培養(yǎng)基生長但遲緩，菌落呈經典“油煎蛋”狀；頂端結構有黏附素MgPa，140 kDa，能黏附在人泌尿生殖道上皮，主要引發(fā)尿道炎；較難培養(yǎng)，生長慢，不宜于常規(guī)試驗室分離培養(yǎng)。試驗室最好診療方

11、法是核酸檢測。34第34頁 穿透支原體1991年Lo首次從1例艾滋病患者尿中分離出一個新支原體，其形態(tài)為桿狀或長燒瓶狀，一端為頂端結構，含有黏附與穿入作用。穿透支原體電鏡照片穿透支原體黏附并穿入紅細胞35第35頁穿透支原體發(fā)酵葡萄糖，分解精氨酸，不分解尿素，在SP-4培養(yǎng)基上生長形成經典“油煎蛋”狀菌落；頂端結構能黏附于人紅細胞、單核細胞、CD4T淋巴細胞及人尿道上皮細胞，造成宿主細胞受損或死亡；可能是艾滋病發(fā)病一個輔助原因。36第36頁解脲脲原體單個或成雙排列，直徑0.05-0.3 mm，絲狀體少見。固體培養(yǎng)基中菌落小，直徑15-60 mm。37第37頁生物學特征培養(yǎng)需要膽固醇和酵母浸液。pH要求較低，最適pH為6.0-6.5。含有尿素酶，能分解尿素產生氨和CO2，使培養(yǎng)基pH升高。不分解糖類和精氨酸。38第38頁致病性傳輸路徑：性傳輸、垂直傳輸。引發(fā)非淋菌性尿道炎（non-gonococcal urethritis，NGU）、前列腺炎、附睪炎等泌尿生殖道疾病。還與自然流產、早產、死胎和不孕相關。39第39頁微生物學檢驗PCR液體培養(yǎng)基（含有酚紅和尿素）標本經典菌落判定生化反應GIT，MIT陽性（紅色）陰性（黃色）固體培養(yǎng)基 37、5%CO2、90%N2DNA測序快速、特異40第40頁 微