器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)概述課件

1、器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)概述器官培養(yǎng)器官培養(yǎng)概述第3章 器官培養(yǎng)本章主要內(nèi)容根的培養(yǎng)莖尖的培養(yǎng)葉的培養(yǎng)第3章 器官培養(yǎng)2第3章 器官培養(yǎng)本章主要內(nèi)容第3章 器官培養(yǎng)4(1)一般掌握離體根培養(yǎng)的取材部位和培養(yǎng)基的選擇；(2)掌握莖尖培養(yǎng)的種類(lèi)和操作步驟；(3)掌握莖段培養(yǎng)中材料的選擇、處理及培養(yǎng)基的調(diào)整；(4)掌握離體葉片的培養(yǎng)步驟；(5)一般掌握胚胎培養(yǎng)的類(lèi)型與各自的注意事項(xiàng)。第3章 器官培養(yǎng)本章教學(xué)目的與要求3(1)一般掌握離體根培養(yǎng)的取材部位和培養(yǎng)基的選擇；第3章 器官培養(yǎng)的定義：第3章 器官培養(yǎng)研究器官的功能、分化、形態(tài)建成；快速繁殖；獲得脫毒苗種質(zhì)保藏等 指植物某一器官的全部或部分或器官原基的

2、離體培養(yǎng)，包括根、莖、葉、花、果實(shí)、種子等培養(yǎng)目的：4器官培養(yǎng)的定義：第3章 器官培養(yǎng)研究器官的功能、分化、形第一節(jié) 根的培養(yǎng) 根培養(yǎng)的意義:1) 是進(jìn)行根系生理研究的最優(yōu)良實(shí)驗(yàn)體系;2) 是研究器官分化、形態(tài)建成的良好體系；3）可建立快速生長(zhǎng)的根無(wú)性系。第3章 器官培養(yǎng)5第一節(jié) 根的培養(yǎng) 根培養(yǎng)的意義:第3章 器官培養(yǎng)7一、離體根的培養(yǎng)方法：1、培養(yǎng)無(wú)菌苗2、切取1.0cm的根尖3、接種在White培養(yǎng)基或1/2MS培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)4、一周后，取側(cè)根擴(kuò)大培養(yǎng)，可得到離體根的無(wú)性系培養(yǎng)條件為暗光和25-27 第一節(jié) 根的培養(yǎng)6一、離體根的培養(yǎng)方法：1、培養(yǎng)無(wú)菌苗第一節(jié) 根的培養(yǎng)8培養(yǎng)條件為暗光和

3、25-27植株再生 根段的離體培養(yǎng)也可以用來(lái)再生植株。第一步誘導(dǎo)形成愈傷組織。第二步在再分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽的分化、在愈傷組織上分化成小植株 一、離體根的培養(yǎng)方法：7培養(yǎng)條件為暗光和25-27一、離體根的培養(yǎng)方法：9二、培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)離子較低的White培養(yǎng)基或者2/3或1/2的MS、B5培養(yǎng)基8二、培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)離子較低的White培養(yǎng)基10三、影響離體根生長(zhǎng)的因素第一節(jié) 根的培養(yǎng)5、環(huán)境條件4、pH3、生長(zhǎng)物質(zhì)2、培養(yǎng)基1、基因型影響因素9三、影響離體根生長(zhǎng)的因素第一節(jié) 根的培養(yǎng)5、環(huán)境條件4、p第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)一、含義及意義1、類(lèi)型 莖尖分生組織培養(yǎng)：對(duì)長(zhǎng)度0.1mm左右，含1-2個(gè)葉原基的

4、莖尖進(jìn)行培養(yǎng)，目的是獲得無(wú)病毒植株 普通莖尖培養(yǎng)：對(duì)幾毫米至幾十毫米長(zhǎng)的莖尖、芽尖及側(cè)芽的培養(yǎng)，目的是快速繁殖。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)10第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)一、含義及意義第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)122、莖尖培養(yǎng)的意義無(wú)性系快速繁殖；培養(yǎng)無(wú)病毒苗，品種改良；理論基礎(chǔ)研究。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)蝴蝶蘭腋芽萌發(fā)112、莖尖培養(yǎng)的意義無(wú)性系快速繁殖；第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)步驟一般方法二、莖尖培養(yǎng)的一般方法12莖尖培養(yǎng)步驟二、莖尖培養(yǎng)的一般方法14莖尖培養(yǎng)步驟 (1)取材 挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶菌。用于普通莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍

5、匐枝上切取2cra以上的頂梢。(2)消毒接種 將采集到的莖尖切成0.5-1.0cm長(zhǎng)，并將其大葉除去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。 將莖尖置于流水沖洗2-4h，再在95的酒精中處理30s，然后在稀釋20倍的次氯酸鈉中浸5-8min，最后用無(wú)菌水沖洗數(shù)次，準(zhǔn)備接種。(3)接種 為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為05cm左右大小。這樣取莖尖大小只能作為快速繁殖。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而變褐。所以在接種時(shí)，不能用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時(shí)間，也可配制1-5Vc液，將切下的莖尖材料浸入處理一下。 13莖尖培養(yǎng)步驟 (1)取材 挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)

6、不久的莖尖。木二、莖尖培養(yǎng)的一般方法(一) 制備外植體取1-2cm的枝條頂梢，去小葉-消毒-解剖鏡下用解剖刀除去幼葉和葉原基，露出生長(zhǎng)點(diǎn)，切下0.1-0.2mm長(zhǎng)的莖尖(含1-2個(gè)葉原基)(二)培養(yǎng)基(三)培養(yǎng)方法第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)14二、莖尖培養(yǎng)的一般方法(一) 制備外植體取1-2cm的枝條(二)培養(yǎng)基多數(shù)采用MS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)素是必須的，如2,4-D，IAA， NAA等，但濃度不能太高，一般用01mgL左右，高于此濃度，往往產(chǎn)生畸變芽或形成愈傷組織不同植物對(duì)生長(zhǎng)素的反應(yīng)是不同的。 15(二)培養(yǎng)基多數(shù)采用MS17(三)培養(yǎng)方法1、固體培養(yǎng)法：試管培養(yǎng)2、紙橋培養(yǎng)法16(三)培養(yǎng)方法1、固體培

7、養(yǎng)法：試管培養(yǎng)182、紙橋培養(yǎng)法含義：用酒杯狀的濾紙代替瓊脂，使杯底朝上塞入試管中，與液體培養(yǎng)基接觸，將離體莖尖置于濾紙上方進(jìn)行培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)：培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能通過(guò)濾紙均衡而持久地供給外植體，有利于外植體的健康成長(zhǎng) ；缺點(diǎn)：操作工藝復(fù)雜 。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)172、紙橋培養(yǎng)法含義：用酒杯狀的濾紙代替瓊脂，使杯底朝上塞入試三、莖尖分生組織培養(yǎng)與脫毒見(jiàn)第八章 植物脫毒技術(shù)18三、莖尖分生組織培養(yǎng)與脫毒見(jiàn)第八章 植物脫毒技術(shù)20四、普通莖尖培養(yǎng)與繁殖技術(shù)概念：快速繁殖(微繁殖):用組織培養(yǎng)的方法，使植物的部分器官、組織迅速擴(kuò)大培養(yǎng)，并移植到溫室或農(nóng)田繁殖出大量幼苗的繁殖方法。特點(diǎn)：繁殖速度

8、快；使用材料少，生產(chǎn)效率高，省時(shí)省工；節(jié)約空間有利于植物的工廠化生產(chǎn)；在無(wú)菌條件下進(jìn)行，不受病蟲(chóng)害侵害。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)19四、普通莖尖培養(yǎng)與繁殖技術(shù)概念：快速繁殖(微繁殖):用組織培（一）莖尖微繁技術(shù)的過(guò)程：分5個(gè)階段1、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、2、芽的增殖3、中間繁殖體的增殖4、誘導(dǎo)生根5、試管苗的移植第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)20（一）莖尖微繁技術(shù)的過(guò)程：分5個(gè)階段1、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、1、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括： 莖梢、芽叢、胚狀體和原球莖等。外植體的制備培養(yǎng)基培養(yǎng)條件第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)211、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立初代培養(yǎng)建立的無(wú)性繁殖系包括：外植體的2、芽的增殖（1）頂

9、芽和腋芽的發(fā)育頂芽、側(cè)芽生長(zhǎng)，形成一個(gè)微型的小灌木叢狀的叢生苗結(jié)構(gòu)。叢生苗的每個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，可迅速獲得多數(shù)的嫩莖。這種繁殖方式稱(chēng)作微型扦插或無(wú)菌短枝扦插優(yōu)點(diǎn)：不經(jīng)愈傷組織，所以最能使無(wú)性系后代保持原品種的特性。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)222、芽的增殖（1）頂芽和腋芽的發(fā)育頂芽、側(cè)芽生長(zhǎng)，形成一個(gè)（2）不定芽的發(fā)育 不定芽產(chǎn)生的途徑：外植體上直接產(chǎn)生由外植體誘導(dǎo)的愈傷組織上產(chǎn)生。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)外植體脫分化愈傷組織再分化器官原基23（2）不定芽的發(fā)育 不定芽產(chǎn)生的途徑：第二節(jié) 莖尖的培第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)由第二階段芽的增殖產(chǎn)生的數(shù)量有限的芽、苗、原球莖稱(chēng)為中間繁殖體。將之轉(zhuǎn)接到新鮮的相同培養(yǎng)基上進(jìn)行

10、繼代培養(yǎng)，3-4周轉(zhuǎn)接一次，擴(kuò)大培養(yǎng)。3、中間繁殖體的增殖24第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)由第二階段芽的增殖產(chǎn)生的數(shù)量有限的芽、苗莖的培養(yǎng)發(fā)育方向腋芽萌發(fā)脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）脫分化后直接產(chǎn)生不定器官脫分化后形成愈傷組織第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)25莖的培養(yǎng)發(fā)育方向腋芽萌發(fā)第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)274、壯苗和生根壯苗目的：使增殖的嫩枝生根產(chǎn)生小植 株，以便移栽。第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)264、壯苗和生根壯苗目的：使增殖的嫩枝生根產(chǎn)生小植 第二節(jié) 用White、1/2或1/3MS、B5等生根培養(yǎng)基。降低N，P，K鹽的量。適當(dāng)加大生長(zhǎng)素（如NAA），不用或少用細(xì)胞分裂素，或在無(wú)激素的培養(yǎng)基上生根。 蔗糖降低到1.0-1

11、.5%，以增強(qiáng)植株自養(yǎng)能力；加入1%左右的活性炭；增加光強(qiáng)度，以提高小植株的光合能力。 第二節(jié) 莖尖的培養(yǎng)試管苗生根的措施27用White、1/2或1/3MS、B5等生根培養(yǎng)基。第二節(jié) 5、移栽生根培養(yǎng)1個(gè)月左右。移植時(shí)可根據(jù)生根情況來(lái)進(jìn)行。若發(fā)現(xiàn)新梢基部生有較濃密的不定根，長(zhǎng)度在lcm以?xún)?nèi)，就可移栽人土。移栽時(shí)通過(guò)幾天的煉苗過(guò)程，栽入塑料營(yíng)養(yǎng)缽或育苗盤(pán)中，營(yíng)養(yǎng)缽盛經(jīng)燒烤或常壓滅菌的培養(yǎng)土(1分腐殖土：1分沙)。285、移栽生根培養(yǎng)1個(gè)月左右。移植時(shí)可根據(jù)生根情況來(lái)進(jìn)行。若發(fā)栽后給予較高的空氣濕度條件。培養(yǎng)土要澆透水，所放置的床面也要澆濕，然后搭小拱棚，以減少水分的蒸騰，并且初期要常噴霧處理，

12、保持拱棚薄膜上有水珠出現(xiàn)。當(dāng)發(fā)現(xiàn)小苗有生長(zhǎng)趨勢(shì)，可逐漸減少濕度，將拱棚兩端打開(kāi)通風(fēng)，并且減少?lài)娝螖?shù)。使小苗適應(yīng)濕度較小的條件。以后揭去拱棚的薄膜，并給予水分控制，少澆水或不澆水，促進(jìn)小苗長(zhǎng)得粗壯。溫度管理上要掌握適宜的生根溫度，最適宜的溫度是16-20。 光照管理上初期可用較弱的光照，在小拱棚上加蓋遮陽(yáng)網(wǎng)或報(bào)紙等，以防陽(yáng)光灼傷小苗和增加蒸騰作用，后期可直接利用自然光照。5、移栽29栽后給予較高的空氣濕度條件。培養(yǎng)土要澆透水，所放置的床面也要5、移栽可用育苗盤(pán)進(jìn)行馴化生根、孔徑選擇2cm左右即可。孔穴裝入蛭石：珍珠巖：草炭土為1：1：05的基質(zhì)。當(dāng)小苗長(zhǎng)至5cm高左右再移人塑料營(yíng)養(yǎng)缽中。305

13、、移栽可用育苗盤(pán)進(jìn)行馴化生根、孔徑選擇2cm左右即可?？籽?二) 影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因素基因型外植體的大小供試植株的生理狀態(tài)芽在植株上的部位供試植株的年齡培養(yǎng)基褐變玻璃化31(二) 影響莖尖培養(yǎng)微繁殖的因素基因型33（三）莖段的培養(yǎng) 莖段培養(yǎng) 指不帶芽和帶1個(gè)以上定芽或不定芽的，包括塊莖、球莖在內(nèi)的幼莖切段的無(wú)菌培養(yǎng)。培養(yǎng)莖段的主要目的是快繁。 優(yōu)點(diǎn) 培養(yǎng)技術(shù)簡(jiǎn)單易行，繁殖速度較快；芽生芽方式增殖的苗木質(zhì)量好，且無(wú)病，性狀均一；解決不能用種子繁殖的無(wú)性繁殖植物的快速繁殖問(wèn)題等。 32（三）莖段的培養(yǎng) 莖段培養(yǎng) 指不帶芽和帶1個(gè)以上定芽或不定芽圖示莖段培養(yǎng)過(guò)程健康植株上選健壯的枝梢植株再生培養(yǎng)

14、75%酒精1分鐘1%次氯酸鈉0.1%升汞去葉片用水沖洗莖段 33圖示莖段培養(yǎng)過(guò)程健康植株上選健壯的枝梢植株再生培養(yǎng)75%酒精(1)材料的選擇和處理 取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)的幼嫩枝條或鱗莖盤(pán)，若是木本，取當(dāng)年生嫩枝或一年生枝條，剪去葉片，剪成3-4cm的小段。取材時(shí)注意莖的基部比頂部切段，側(cè)芽比頂芽的成活率低，所以應(yīng)優(yōu)先利用頂部的外植體，但由于每個(gè)新梢僅一個(gè)頂芽，也可利用腋芽，莖上部的腋芽培養(yǎng)效果較好。還應(yīng)注意盡量在生長(zhǎng)期取芽，在休眠期取外植體，成活率降低。如蘋(píng)果在3-6月取材的成活率為60，7-11月下降到10，12-2月都下降10以下。 34(1)材料的選擇和處理 取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲(chóng)的幼嫩枝條或鱗莖

15、盤(pán)，(2)培養(yǎng)最常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加入3蔗糖，用07的瓊脂固化。培養(yǎng)條件保持25左右。經(jīng)培養(yǎng)后莖段的切口特別是基部切口上會(huì)長(zhǎng)出愈傷組織，呈現(xiàn)稍許增大，而芽開(kāi)始生長(zhǎng)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)叢生芽，從而得到無(wú)菌苗。在莖段培養(yǎng)中，促進(jìn)腋芽增殖用6-BA是最為有效的，依次為Kt和Zt等。生長(zhǎng)素雖不能促進(jìn)腋芽增殖，但可改善苗的生長(zhǎng)。GA對(duì)芽伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用。35(2)培養(yǎng)最常用的基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，加入3蔗糖，用0（3）繼代兩種途徑：一是促進(jìn)腋芽的快速生長(zhǎng)，二是誘導(dǎo)形成大量不定芽。第一種途徑的好處是不會(huì)產(chǎn)生變異，能保持品種優(yōu)良特性。且方法簡(jiǎn)便，可在各種植物上使用，每年從一個(gè)芽可增殖10萬(wàn)株以上。第二種

16、途徑會(huì)產(chǎn)生變異。繼代增殖過(guò)程注意選用培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。36（3）繼代兩種途徑：一是促進(jìn)腋芽的快速生長(zhǎng)，二是誘導(dǎo)形成大量（4）生根降低或除去細(xì)胞分裂素而加人生長(zhǎng)素。由于在苗增殖時(shí)施用了較高濃度的細(xì)胞分裂素，并促使苗中保持著一定的量，因此，在生根培養(yǎng)中不需要加細(xì)胞分裂素。生長(zhǎng)素的濃度，NAA一般01-10mgL，IBA和IAA可稍高。MS，B5 White等培養(yǎng)基，都可用于誘導(dǎo)生根，但是其含鹽濃度要適當(dāng)加以稀釋。前面的幾種培養(yǎng)基中，除White外，都富含N，P，K鹽，它們都抑制根的發(fā)生。因此，應(yīng)將它們降低到12，13或14，甚至更低的水平。生根培養(yǎng)時(shí)增強(qiáng)光照有利于發(fā)根，且對(duì)成功地移栽到盆缽中有良

17、好作用。故在生根培養(yǎng)時(shí)應(yīng)增加光照時(shí)間和光照強(qiáng)度，但強(qiáng)光直接照射根部，含抑制根的生長(zhǎng)，所以在生根培養(yǎng)時(shí)最好在培養(yǎng)基中加03活性炭，以促進(jìn)生根。37（4）生根降低或除去細(xì)胞分裂素而加人生長(zhǎng)素。由于在苗增殖時(shí)施(5)移植在馴化時(shí)要進(jìn)行煉苗。然后洗凈瓊脂，小心移栽，初期濕度要大，基質(zhì)通氣濕潤(rùn)，保濕保溫，更要精心管理等。 38(5)移植在馴化時(shí)要進(jìn)行煉苗。然后洗凈瓊脂，小心移栽，初期濕一、定義： 離體葉的培養(yǎng)是指包括葉原基、葉柄、葉鞘、葉片、子葉等葉組織的無(wú)菌培養(yǎng)。第三節(jié) 葉的培養(yǎng)第3章 器官培養(yǎng)39一、定義：第三節(jié) 葉的培養(yǎng)第3章 器官培養(yǎng)41葉培養(yǎng)的意義：1、是研究葉形態(tài)建成、光合作用、葉綠素形成的

18、好方法2、通過(guò)葉組織的脫分化與再分化以證實(shí)葉細(xì)胞的全能性3、通過(guò)葉組織培養(yǎng)，探索離體葉組織培養(yǎng)的條件和影響因素4、建立體細(xì)胞快速無(wú)性繁殖體系5、葉細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)誘變篩選突變體。第三節(jié) 葉的培養(yǎng)40葉培養(yǎng)的意義：第三節(jié) 葉的培養(yǎng)42二、葉組織培養(yǎng)的方法1、制備外植體： 幼嫩葉片-水洗-消毒- 無(wú)菌水洗。2、影響培養(yǎng)因素：1）6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈傷組織形成。2）極性：葉片腹面向上放置利于芽的分化3）損傷：常從葉柄、葉脈的切口處形成愈傷組織和芽。第三節(jié) 葉的培養(yǎng)41二、葉組織培養(yǎng)的方法1、制備外植體：第三節(jié) 葉的培養(yǎng)43三、離體葉組織中再生植株發(fā)生途徑1、直接產(chǎn)生不定芽2、離體葉 愈傷組織 不定芽3、離體葉 愈傷組織 胚狀體 不定芽4、離體葉 小鱗莖或球狀體 愈傷組織 第三節(jié) 葉的培養(yǎng)42三、離體葉組織中再生植株發(fā)生途徑1、