細胞病理學基本檢驗技術(shù)

1、細胞病理學基本檢驗技術(shù)細胞病理學基本檢驗技術(shù)第1頁第一節(jié) 細胞病理學 基礎(chǔ)檢驗技術(shù)細胞病理學基本檢驗技術(shù)第2頁定義細胞病理學 采集、制備、染色觀察 是經(jīng)過檢驗細胞形態(tài)學特點，進行 健康和疾病篩查、診療和研究 體檢、普查 診療、判別診療細胞病理學基本檢驗技術(shù)第3頁本節(jié)內(nèi)容提要一.標本采集二.標本涂片三.涂片固定四.涂片染色五.觀察涂片六.細胞學診療七.細胞學診療質(zhì)量確保細胞病理學基本檢驗技術(shù)第4頁一.標本采集標準：準確選擇采集部位標本保持新鮮，盡快制片盡可能防止血液及粘液等混入方法簡便，操作輕柔，降低病人痛苦，預(yù)防并發(fā)癥和腫瘤擴散采集、制備、染色、觀察標準：準確選擇采集部位標本保持新鮮，盡快制片

2、盡可能防止血液及粘液等混入（潔凈）方法簡便，操作輕柔，降低病人痛苦，預(yù)防并發(fā)癥和腫瘤擴散細胞病理學基本檢驗技術(shù)第5頁標本分類.脫落細胞 ：自然脫落細胞 非自然脫落細胞2.細針穿刺細胞細胞病理學基本檢驗技術(shù)第6頁自然脫落細胞標本：咳出：痰 排出：尿、便 擠出：乳頭分泌物等。非自然脫落細胞標本：如氣管，宮頸，皮膚，乳頭等。穿刺細胞標本：漿膜腔積液腫瘤穿刺采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第7頁自然脫落細胞標本特點包含痰，尿液，乳頭分泌物，精液等。輕易獲取標本能屢次采樣成份復雜，含各種細胞成份，炎細胞，微生物及外源污染物細胞成份保留較差采集、制備、染色、觀察包含痰，尿液，乳頭分泌物，精液等

3、。輕易獲取標本能屢次采樣成份復雜，含各種細胞成份，炎細胞，微生物及外源污染物細胞成份保留較差細胞病理學基本檢驗技術(shù)第8頁霉菌污染0926963,男,78歲, 臨床診療:肺炎 送檢標本:痰細胞病理學基本檢驗技術(shù)第9頁污染蟲卵0926965,男,79歲, 臨床診療:肺癌? 送檢標本：痰細胞病理學基本檢驗技術(shù)第10頁痰細胞退變細胞病理學基本檢驗技術(shù)第11頁非自然脫落細胞標本特點 包含氣管刷，宮頸刷，支氣管灌洗液及皮膚乳頭等刮取標本。直接從病變器官表面采樣纖維鏡能從器官內(nèi)部獲取標本能獲取上皮下病變標本細胞成份保留良好，但診療標準不一樣于脫落細胞采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第12頁宮頸細

4、胞學取材與制片方法刮取法刷取法細胞病理學基本檢驗技術(shù)第13頁氣管刷細胞涂片細胞病理學基本檢驗技術(shù)第14頁肺泡灌洗液0925790,男,66歲CT：左肺上葉尖后段不整形實變影氣管鏡：未見病變細胞學診療：腺癌細胞病理學基本檢驗技術(shù)第15頁穿刺細胞標本1體腔抽出液：胸腹水、心包液、腦脊液等；2細針穿刺吸收液：如體表腫物穿刺液，超聲定位下肝、胰腺和腎臟穿刺液；借助內(nèi)窺鏡技術(shù)穿刺等。理論上適合用于任何器官簡便，費用低，創(chuàng)傷小良好穿刺和制片技術(shù)可取得最正確結(jié)果需外科病理學知識有一定不足，如采樣不足等采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第16頁二.涂片制備標準標本新鮮玻片清潔操作輕柔涂片牢靠涂片數(shù)量

5、采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第17頁方法直接涂片：將新鮮標本直接涂在載玻片上 .推片法 .涂抹法 .壓拉涂片法間接涂片：將各種液體標本進行濃縮處理后再涂片 .離心法 .液基薄層法 .細胞塊法細胞病理學基本檢驗技術(shù)第18頁.推片法采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第19頁.涂抹法采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第20頁.壓拉涂片法采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第21頁.離心法和細胞離心法離心法：大量液體標本，如漿膜腔積液、尿液、灌洗液。細胞離心法：將細胞直接離心到載玻片上，制成單層細胞涂片。適合用于少許液體、中等量細胞。采集、制備、染色、觀察細

6、胞病理學基本檢驗技術(shù)第22頁.液基細胞學（1）薄層法ThinPrep采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第23頁宮頸病變好發(fā)部位細胞病理學基本檢驗技術(shù)第24頁細胞病理學基本檢驗技術(shù)第25頁細胞病理學基本檢驗技術(shù)第26頁細胞病理學基本檢驗技術(shù)第27頁(2) SurePath Prep 法 標本乙醇固定 懸浮于密度梯度溶液中渦旋法使聚集細胞團和粘液分開 密度梯度離心法使細胞成份和非上皮細胞成份分開 細胞在重力作用下沉淀到載玻片上細胞病理學基本檢驗技術(shù)第28頁傳統(tǒng)細胞學情況傳統(tǒng)制備方法（普通是涂抹法） 標本質(zhì)量不一致細胞分布不均雜質(zhì)成份妨礙視線一個樣本需涂多張涂片細胞病理學基本檢驗技術(shù)第29

7、頁標準化細胞學技術(shù)液基細胞學卓越標本質(zhì)量清楚背景標準化標本制備過程均勻細胞分布一個樣本只需一張含有代表性標本剩下樣本可進行其它各種測試（免疫組化等）提升細胞學測試敏感性和特異性細胞病理學基本檢驗技術(shù)第30頁痰低分化鱗癌 改進背景 細胞清楚度TCTTCT細胞病理學基本檢驗技術(shù)第31頁6.細胞塊法將標本中細胞聚集成團，形成與傳統(tǒng)組織塊類似細胞塊，制成細胞切片，然后能夠進行特殊染色。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第32頁三.涂片固定目標：是保持細胞自然狀態(tài)，預(yù)防細胞自溶和細菌造成腐敗。固定液能凝固和沉淀細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破壞細胞內(nèi)溶酶體酶，保持細胞自然狀態(tài)，使細胞結(jié)構(gòu)清楚，易于著色。所以標本愈新鮮，固定愈及時，

8、細胞結(jié)構(gòu)愈清楚，染色效果愈好。采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第33頁固定不及時腺癌細胞固定及時腺癌細胞細胞病理學基本檢驗技術(shù)第34頁固定方法： 濕固定：是使細胞原生質(zhì)脫水、蛋白質(zhì)凝固到達固定目標?？梢l(fā)細胞皺縮。 干燥固定：是經(jīng)過空氣蒸發(fā)方式到達固定目標。細胞有增大趨勢。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第35頁固定方法比較A未固定細胞B平鋪在玻片上C濕固定D干固定細胞病理學基本檢驗技術(shù)第36頁固定液種類： 乙醚乙醇固定液；氯仿乙醇固定液；95%乙醇固定液。固定時間：1530分鐘細胞病理學基本檢驗技術(shù)第37頁四.常見染色方法巴氏染色法（papanicolaou stain）（濕固定）蘇木素-

9、伊紅（H-E）染色法瑞氏-吉姆薩染色法采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第38頁巴氏染色法（Pap)細胞病理學基本檢驗技術(shù)第39頁巴氏染色來歷 Papanicolaou(帕帕尼古拉烏) 子宮頸抹片這個檢驗是Papanicolaou 醫(yī)生在公元1928 年在美國首度提出。因為簡便易行，而且能夠早期發(fā)覺子宮頸癌或不正常細胞方便早期治療，而后風靡全世界，成為一個婦科不可或缺主要例行檢驗。為了紀念這位醫(yī)師貢獻，在國際上這個檢驗就叫作Pap test 或者Pap smear。 細胞病理學基本檢驗技術(shù)第40頁Papanicolaou 醫(yī)生1883年生于希臘。他父親也是一位醫(yī)生，曾經(jīng)當過 Kymi

10、 市市長。他21歲時完成醫(yī)學教育，到德國留學研究生殖細胞學，1913年移民美國。 他最初研究天竺鼠陰道分泌物內(nèi)細胞周期改變。以后用相同方法去研究婦女陰道內(nèi)分泌物及細胞改變。聽說全世界第一個Pap test 就是用在他妻子身上。 細胞病理學基本檢驗技術(shù)第41頁于1925年在紐約以一群自愿婦女做研究時，在一個婦女子宮頸抹片上偶然發(fā)覺一些癌細胞。這個發(fā)覺使他異常振奮，而后經(jīng)一系列研究后，于1928 年發(fā)表一個學術(shù)演講：陰道內(nèi)細胞能夠用來早期診療婦女癌癥。 細胞病理學基本檢驗技術(shù)第42頁Papanicolaou 醫(yī)生因心臟病病逝于1962年。 他妻子Mary，也是一位偉大、自我犧牲婦人，他是Papan

11、icolaou 醫(yī)生第一個 Pap test 婦人，他曾經(jīng)作過他細胞檢驗員，幫忙訓練許多技術(shù)人員。以后20年時間，Papanicolaou醫(yī)生基礎(chǔ)上以他作定時陰道細胞檢驗，而后完成一本婦人周期性陰道細胞改變著作。每次Papanicolaou 醫(yī)生介紹他妻子時，總是說：這是我太太也是我受害者。 總之，一個成功男人背后，經(jīng)常會有一個偉大無私女人。 細胞病理學基本檢驗技術(shù)第43頁細胞病理學基本檢驗技術(shù)第44頁蘇木素-伊紅（H-E）染色法細胞病理學基本檢驗技術(shù)第45頁瑞氏-吉姆薩染色法細胞病理學基本檢驗技術(shù)第46頁其它特殊染色組織細胞化學染色：過碘酸Schiff染色（PAS糖原）、三色染色、普魯氏藍染

12、色等。免疫細胞染色：識別細胞類型、起源等。識別微生物染色： Gram染色，PAS，六胺銀，Ziehl-Neelsen染色（抗酸染色）等。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第47頁胸水細胞塊免疫組化染色BerEp4染色細胞病理學基本檢驗技術(shù)第48頁五.顯微鏡觀察方法視野采集、制備、染色、觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第49頁用10倍物鏡進行瀏覽細胞病理學基本檢驗技術(shù)第50頁發(fā)覺異常細胞后，用40倍觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第51頁六.細胞病理學診療細胞形態(tài)學判斷基礎(chǔ)標準1細胞數(shù)量2細胞排列結(jié)構(gòu)特征3細胞核特征4細胞質(zhì)特征5背景6人為原因細胞病理學基本檢驗技術(shù)第52頁.細胞數(shù)量 多增殖指數(shù)增加（腫瘤或增生）少荒涼

13、，注意觀察細胞病理學基本檢驗技術(shù)第53頁0926164,女，65歲，臨床診療：胸水既往史：骨髓瘤細胞量多細胞病理學基本檢驗技術(shù)第54頁宮頸TCT涂片細胞量正常 細胞量少細胞病理學基本檢驗技術(shù)第55頁2.細胞結(jié)構(gòu)特征 涂片中細胞經(jīng)常缺乏結(jié)構(gòu)特征 正常細胞有極向、平鋪 惡性細胞重合：異常粘附性、異常聚集性。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第56頁宮頸涂片中正常宮頸柱上皮細胞病理學基本檢驗技術(shù)第57頁腺癌C0924833，女，65歲，腹水 細胞病理學基本檢驗技術(shù)第58頁3.細胞核特征 良性大小一致，核質(zhì)細，核膜光。惡性大小不一，核質(zhì)粗，核膜厚。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第59頁 宮頸TCT涂片正常 高度病變細胞病

14、理學基本檢驗技術(shù)第60頁胸水涂片 腺癌細胞病理學基本檢驗技術(shù)第61頁4.細胞質(zhì)特征核質(zhì)比增加 嗜堿、粘液、空泡、吞噬細胞病理學基本檢驗技術(shù)第62頁胞漿內(nèi)粘液細胞病理學基本檢驗技術(shù)第63頁5.涂片背景： 包含細胞成份和非細胞成份（血、粘液、炎癥、微生物） 惡性壞死背景（腫瘤素質(zhì)）6.人為原因：制片不佳；污染。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第64頁七 細胞學診療質(zhì)量確保標本采集：塵細胞，宮頸細胞數(shù)量制片過程：離心，固定，染色閱片診療：全方面，結(jié)合臨床及組織學不停理論學習復查會診（IQAM,EQAM.P274）定時隨訪：金標準細胞病理學基本檢驗技術(shù)第65頁痰中塵細胞細胞病理學基本檢驗技術(shù)第66頁宮頸涂片上柱

15、上皮細胞病理學基本檢驗技術(shù)第67頁細胞病理學診療優(yōu)勢安全簡便，痛苦少，不良反應(yīng)少，可重復取材，設(shè)備要求低，費用廉?？焖贉蚀_，檢出率約60%，適合大規(guī)模防癌普查及高危人群隨訪觀察，可發(fā)覺早期癌和原位癌。檢驗范圍大細胞病理學基本檢驗技術(shù)第68頁病例舉例1年3月檢驗病理號04767女，51歲臨床診療：宮頸炎宮頸TCT：細胞量5000，診療:ASC-H細胞病理學基本檢驗技術(shù)第69頁年8月活檢病理號19604 ：ABCDE共5點活檢病理診療：慢性宮頸炎細胞病理學基本檢驗技術(shù)第70頁年9月復查細胞號0926170診療:上皮內(nèi)高度病變細胞病理學基本檢驗技術(shù)第71頁年9月手術(shù)病理診療：宮頸CIN 累及腺體細胞

16、病理學基本檢驗技術(shù)第72頁病例舉例2TCT診療：高度病變病理活檢：慢性宮頸炎六個月后：病理活檢：宮頸鱗狀細胞癌細胞病理學基本檢驗技術(shù)第73頁脫落細胞學診療不足有一定誤診率：細針吸收可有10%假陰性，痰細胞學檢驗可有20%假陰性，少數(shù)出現(xiàn)假陽性。詳細部位難確定腫瘤分型困難非腫瘤性疾病診療研究少細胞學診療為二級診療，需經(jīng)活檢組織學證實后，方可進行治療。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第74頁細胞病理學診療是一個復雜過程，千萬不能過分強調(diào)最終止論主要性。 why ?細胞病理學基本檢驗技術(shù)第75頁細胞病理學檢驗影響原因多！患者信息：年紀和性別；激素水平；臨床表現(xiàn)；其它檢驗結(jié)果病變部位：局部解剖；影像學特征細胞特點：細胞量；類型；分布和粘附性；背景其它信息：電鏡；免疫組化；流式細胞儀；細胞遺傳學細胞病理學基本檢驗技術(shù)第76頁沒有標準迄今為止，沒有一項細胞形態(tài)學特征或一套規(guī)范細胞形態(tài)學標準能準確可靠地判別良惡性細胞。細胞病理學基本檢驗技術(shù)第77頁細胞病理學基本檢驗技術(shù)