醫(yī)學(xué)機能實驗學(xué)：離體蛙心灌流

1、離體蛙心灌流Effect of drugs on animal heart in vitro北京協(xié)和學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院閆 莉奧托 洛伊維(Otto Loewi) 1921年做了個奇妙無比的夢 心臟受心迷走神經(jīng)與心交感神經(jīng)的雙重支配，且兩者都有緊張性活動。 在動物實驗中,如同時刺激心迷走神經(jīng)和心交感神經(jīng),常出現(xiàn)心率減慢效應(yīng)。Otto Loewi 1921年的蛙心實驗原理示意圖 神經(jīng)末梢通過神經(jīng)沖動向其所支配的器官傳遞信息 神經(jīng)沖動化學(xué)傳遞學(xué)說 /Physio7/1d.html背景知識 心臟具有自動節(jié)律性。 離體心臟用理化性質(zhì)近似有血漿的生理溶液（任氏液）進行灌流，以保持其新陳代謝順利進行，這種節(jié)律性可

2、維持較長時間。心臟正常節(jié)律性活動有賴于內(nèi)環(huán)境理化因素的相對穩(wěn)定，因此改變灌流液成分，則可引起心臟活動的改變。心臟細胞生物電活動的基礎(chǔ)是Na+、K+、Ca2+等跨膜離子流。背景知識調(diào)節(jié)心臟活動的神經(jīng)、體液因素對心臟活動的直接作用是神經(jīng)遞質(zhì)或激素與心肌細胞相應(yīng)受體結(jié)合，導(dǎo)致心臟活動的增強或減弱。乙酰膽堿與去甲腎上腺素就是通過這種方式發(fā)揮作用。 學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。 觀察灌流液中幾種離子(K+, Ca2+)濃度的改變, 相應(yīng)受體激動劑和阻斷劑對心臟活動的影響。實驗?zāi)康膶嶒灢牧蠈嶒瀯游?蟾蜍實驗試劑與器材 RM6240生物信號處理系統(tǒng)、計算機、張力換能器、蛙心夾、木質(zhì)試管夾、鐵支架、蛙心插管、玻璃

3、分針、蛙板、滴管、蛙類手術(shù)器械、燒杯、棉球、棉線、滑輪。 任氏液、0.65%的NaCl溶液，1%的KCl溶液，1%的CaCl2溶液，1:10000的腎上腺素，1:10000乙酰膽堿和1:2000阿托品。蛙心結(jié)構(gòu)正面觀背面觀標(biāo)本的制作1、將毀損腦脊髓后的蟾蜍固定在蛙板上， 從腹上部正中至兩前肢剪開皮膚，打開胸腔，暴露心臟。2、用眼科剪剪開心包膜。3、用蛙心夾夾住心尖部（舒張期）。4、插管： 在左、右主動脈干下方穿一線，靜脈竇與腔靜脈交界處做一結(jié)扎，結(jié)扎線應(yīng)盡量下壓，以免傷及靜脈竇。 在總主動脈下穿一線，打活結(jié)(用于固定心臟插管)；左側(cè)主動脈穿一根線并結(jié)扎之。 用左手提起結(jié)扎線，右手用眼科剪在左側(cè)

4、主動脈距分叉部3mm處剪一“V”型口。將盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指將套管堵住，以防套管中的任氏液流出)從“V”型口插入動脈球底部，然后稍后撤套管，再轉(zhuǎn)向心室中央方向插入，可見液面隨心搏升降即可。 將分支前主動脈下的松結(jié)扎緊，并固定在套管的小突上。 小心提起套管和心臟，剪斷主動脈左右分支及腔靜脈，將心臟游離。連接裝置1、將蛙心插管用木夾子固定在鐵三腳架上。2、在木夾子的下方，將張力傳感器、滑輪固定在鐵三腳架上。3、將夾在蛙心尖上的蛙心夾上的絲線系在張力傳感器的簧片小孔上。線的松緊適度。4、張力傳感器與RM6240B通道1相連。打開循環(huán)實驗蛙心灌流，開始實驗。觀察項目 正常的蛙心搏動曲線用0

5、.65%NaCl替換任氏液在任氏液中滴加1%CaCl2 1-2滴在任氏液中滴加1:10000腎上腺素1-2滴在任氏液中滴加1%KCl 1-2滴在任氏液中滴加1:2000阿托品 1-2滴先加入1：2000阿托品，再加入1:100000乙酰膽堿注意事項關(guān)于靜脈竇： 避免過度牽拉靜脈竇，否則離體后的心臟可能出現(xiàn)搏動異常； 注意保留靜脈竇的完整性，為防止誤傷靜脈竇，剪取心臟時可將剪尖朝下進行剪切；關(guān)于蛙心插管： 插管內(nèi)液平面應(yīng)保持一致。 蛙心插管不要插得太深，防止損傷心臟。藥物處理時需要注意 各藥品的滴管分開使用，做好標(biāo)記，不能混淆； 每次給藥前要有正常心博曲線和給藥標(biāo)記； 藥效出現(xiàn)后立即將藥吸出,并沖洗干凈等心臟搏動恢復(fù)正常以后再進行下一項實驗?？赡苡龅降膯栴}注意常用任氏液濕潤蛙心表面。換能器頭段保持向下傾斜，防止進水。蛙心離體后若搏動不良，蛙心管內(nèi)液面不波動，多為固定線