2022年臨床檢驗技師考試生化檢驗重要考點

1、臨床檢查技師考試生化檢查第五章重要考點（1）診斷酶學(xué)本章考點：1.血清酶(1)分類、生理變異與病理生理機制(2)酶活性與酶質(zhì)量測定措施及其評價(3)同工酶及其亞型測定的臨床意義2.血清酶活性檢測技術(shù)(1)酶活性概念和表達(dá)措施(2)酶活性測定措施分類、原理、優(yōu)缺陷及應(yīng)用(3)影響酶作用的因素(4)工具酶的概念、代謝物測定中常用的批示反映3.常用血清酶及同工酶測定的參照值及臨床意義(1)肌酸激酶及同工酶和其亞型(2)乳酸脫氫酶及同工酶(3)氨基轉(zhuǎn)移酶及同工酶(4)堿性磷酸酶及同工酶(5)谷氨?；D(zhuǎn)移酶及同工酶(6)淀粉酶及同工酶(7)酸性磷酸酶及同工酶4.代謝物酶法測定第一節(jié)血清酶一、血清酶的分類

2、根據(jù)酶的來源及其在血清中發(fā)揮催化功能的狀況，可將血清酶分為兩大類。(一)血漿特異酶在血漿中發(fā)揮特定催化作用的酶。如凝血酶、膽堿酯酶(CHE)、脂蛋白脂肪酶、銅氧化酶等。它們大多數(shù)在肝內(nèi)合成，在血漿中的濃度甚至超過器官細(xì)胞內(nèi)濃度。有的可以作為肝功能實驗的一部分。血漿特異酶活性的變化，除了反映血液功能外，還反映來源器官的功能。(有少部分酶在細(xì)胞合成后分泌到血液中行使其功能，如凝血因子及有關(guān)的纖溶因子。它們以酶原狀態(tài)分泌人血，在一定的條件下被激活，引起相應(yīng)的生理或病理變化。)(二)非血漿特異酶在血漿中濃度很低，且無功能，分為兩種。1.分泌酶：來源于消化腺或其她外分泌腺的酶。如-淀粉酶(AMY)、前列

3、腺酸性磷酸酶(ACP)、脂肪酶(LPS)、胃蛋白酶原、胰蛋白酶原 、ALP等。正常體液中外分泌酶活性低而穩(wěn)定，不發(fā)生催化作用。在血液中的濃度和其分泌腺體的功能活動和疾病有關(guān)，來源增長或排泄受阻時，血漿中此類酶活性增高。例如，急性胰腺炎時，血淀粉酶就會升高。2.代謝酶：(細(xì)胞酶)在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮催化功能的酶。正常時這些酶存在于組織細(xì)胞中，血漿中酶活性很低。細(xì)胞內(nèi)、外濃度差別懸殊。當(dāng)酶來源的組織細(xì)胞發(fā)生病變，細(xì)胞膜通透性增長或細(xì)胞壞死時，細(xì)胞內(nèi)酶大量進(jìn)入血漿，導(dǎo)致血漿酶活性明顯增高。其下降的臨床意義很少。這一類酶臨床應(yīng)用較多，如轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶等，它們在肝病、心臟疾病時都也許浮現(xiàn)變化。二、

4、血清酶生理變異及其病理生理機制(一)血清酶生理變異除病理因素外，有不少生理因素可以影響血清酶測定數(shù)值，這些變化無臨床病理意義。1.性別：大多數(shù)酶無性別差別，只有少數(shù)酶如CK和GGT存在明顯差別，CK和GGT都是男性高于女性，因此不能以一種參照值作為判斷原則。2.年齡：不少酶在小朋友期和成人時活性不同，例如新生兒的CK和LD活性常為成人的23倍，后來逐漸減少，到一定年齡和成人同樣。變化最明顯的酶是和骨的生長發(fā)育有密切關(guān)系的堿性磷酸酶。有些酶在進(jìn)入老年期也也許有變化，如ALP和GGT到老年時也許有輕度升高。3.進(jìn)食：多數(shù)酶不受進(jìn)食影響，但酗酒可引起GGT明顯升高。4.運動：劇烈運動可引起血清中多種

5、酶升高，升高限度和運動量、運動時間以及與否常常運動有關(guān)。升高的酶多為肌肉中含量豐富的酶，如CK、LD、AST等。5.妊娠與分娩：妊娠時有許多生理變化，也可浮現(xiàn)某些酶升高，如妊娠時ALP(因有胎盤ALP同工酶)升高，分娩時也許有CK、CK-BB、LD升高。(二)血清酶病理變化機制疾病時，影響血清酶的因素諸多，重要機制如下：1.酶合成異常：血漿特異酶大多數(shù)是在肝合成，當(dāng)肝功能障礙時酶濃度常下降。如血清膽堿酯酶活性在有肝功能障礙時可下降。由于酶基因變異也可引起特定酶減少或消失，如肝-豆?fàn)詈司C合征患者血中銅氧化酶活性可明顯下降。如有骨細(xì)胞增生時，血中ALP可上升。此外惡性腫瘤，應(yīng)用某些藥物，也可引起相

6、應(yīng)的血清酶變化。2.細(xì)胞酶的釋放：是疾病時大多數(shù)血清酶增高的重要機制，影響細(xì)胞酶釋放的重要因素有：(1)細(xì)胞內(nèi)、外酶濃度的差別：非血漿特異酶在細(xì)胞內(nèi)、外濃度可差千倍以上，只要有少量細(xì)胞受損傷，酶從細(xì)胞中釋出，就可使血液中酶明顯升高;(2)酶在細(xì)胞內(nèi)的定位和存在的形式：胞質(zhì)中游離的酶如ALT、LD最容易釋放人血，而在亞細(xì)胞構(gòu)造中的酶則較難釋放出來，特別是線粒體酶，如肝細(xì)胞中的AST常需細(xì)胞浮現(xiàn)壞死病變時才干釋放人血;(3)酶蛋白分子量的大小：酶釋放的速度大概和分子量成反比，此因素對酶在血液浮現(xiàn)時間的影響不小于對酶濃度高下的影響，例如LD分子量不小于CK，而當(dāng)有心肌梗死時，LD在血液中升高的時間就

7、晚于CK。3.酶在細(xì)胞外間隙的分布和運送：細(xì)胞中酶有三種途徑進(jìn)入血液：血管內(nèi)皮細(xì)胞和血細(xì)胞的酶直接進(jìn)入血液;酶可同步進(jìn)入血液和組織間隙，后者再入血;酶大部分進(jìn)入組織間隙后再入血。這些因素都會影響酶進(jìn)入血液的時間和升高的限度。4.血液中酶的清除：不同疾病和不同的酶從血液中清除的時間和機制不同，同一疾病不同酶恢復(fù)正常的時間也不同樣，這和酶的半壽期以及某些其她因素有關(guān)。第二節(jié)血清酶活性檢測技術(shù)一、酶活性測定的基本知識酶測定涉及酶量測定和酶活性測定。酶在體液中含量極微，僅為ng/L水平，測定酶量十分困難。因此臨床上大都采用酶活性測定，以酶活性間接表達(dá)酶量。(一)酶活性的概念與表達(dá)法1.概念：酶活性指酶

8、催化反映的能力即酶促反映速度。反映速度是指在規(guī)定條件下單位時間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量。2.表達(dá)措施：酶活性的大小一般以酶單位數(shù)表達(dá)。(1)酶的國際單位在實驗規(guī)定的條件下(溫度、最適pH、最適底物濃度時)，在1分鐘內(nèi)催化1mol底物發(fā)生反映所需的酶量為1個酶活力國際單位(U)。(2)Katal(催量)：即每秒鐘轉(zhuǎn)化1個摩爾底物(mol /s)的酶量。國際單位和katal間換算關(guān)系如下：1U=1mol / min = 110-6 / 60s =16.67nkatal(二)酶活性單位的計算計算酶活性單位之前，按照酶單位定義擬定物質(zhì)量、體積和時間的單位，然后進(jìn)行計算：酶單位/升=如果采用分光光度

9、法，并知產(chǎn)物或底物的摩爾吸光系數(shù)，可變換為：為摩爾(線性)吸光體系(Lmol-1cm-1)A為吸光度變化v為標(biāo)本體積(ml)V為反映體系體積(ml)L為管徑(cm)在實際測定中背面幾項皆為常數(shù)，用K表達(dá)，叫做酶活力濃度測定轉(zhuǎn)化因子：常數(shù)K值設(shè)立：在測酶時，常數(shù)K值的選擇是很重要的。比值過高雖然測定的線性范疇較寬，但反復(fù)性差，反之，雖然精密度好，但線性窄。K值設(shè)立的出發(fā)點應(yīng)是測定酶的判斷值或參照值上限，應(yīng)保證這些值測定的可靠，因此轉(zhuǎn)氨酶的常數(shù)K一般在3000左右。酶促反映進(jìn)程夠真正代表酶活性大小的是線性期的酶促反映速度，即酶促反映初速度。酶活性測定期一方面要擬定線性期，在此期測定反映速度才干精確

10、代表酶活性。習(xí)題.酶單位Katal的含義是A.每秒鐘能催化1mol底物的酶量為1KatalB.每分鐘能催化1mol底物的酶量為1KatalC.每秒鐘能催化1個單位的底物的酶量為1KatalD.每分鐘能催化1個單位的底物的酶量為1KatalE.每秒鐘能催化1 mol底物的酶量為1Katal對的答案E二、標(biāo)本采集要點在實驗室測定酶之前，標(biāo)本要通過采集、分離血清和儲存等一系列解決過程，而酶在血中是處在一種動態(tài)變化過程，血液離開體內(nèi)后，會有一定變化。因此在其中任何一種階段解決不當(dāng)，均有也許引起測定值變化。1.不能溶血：因大多數(shù)酶在血細(xì)胞中的含量比在血漿中高得多。如LDH高150倍，ALT高7倍。2.及

11、時分離血細(xì)胞：避免血細(xì)胞內(nèi)酶大量進(jìn)入血漿;3.及時測定：避免酶蛋白變性;4.盡量用血清標(biāo)本：避免某些抗凝劑對酶的克制作用;(除非測定與凝血或纖溶有關(guān)的酶)5.有些標(biāo)本不能冷凍：有的酶在低溫下不穩(wěn)定。常用酶如ALT、AST、ALP、CK、GGT、和AMY，冷凍保存在10個月活性變化不大。但有些酶如LD在融凍時被破壞，LD在低溫反而不如室溫穩(wěn)定，即所謂的“冷變性”。采血后如不及時將血清和血凝塊分離，血細(xì)胞中酶同樣可以透過細(xì)胞膜進(jìn)入血清，因此采血后12小時實驗室必須及時離心，分離血清。一般都不采用血漿而采用血清作為測定標(biāo)本。大多數(shù)抗凝劑都在一定限度上影響酶活性。酶蛋白不穩(wěn)定，易失活。大部分酶在低溫中

12、比較穩(wěn)定，分離血清如不能及時測定，應(yīng)放冰箱保存。三、酶的測定(一)酶活性測定措施1.按反映時間分類法：20世紀(jì)50年代此前大都使用固定期間法。這種措施是以酶催化反映的平均速度來計算酶的活性，現(xiàn)多已不用。50年代中期開始采用持續(xù)監(jiān)測法。這種措施用自動生化分析儀上完畢，可以測酶反映的初速度，其成果遠(yuǎn)比固定期間法精確，在高濃度標(biāo)本尤為明顯，但本法也受到反映時間，反映溫度，試劑等的影響，應(yīng)加以注意。(1)定期法：(兩點法)通過測定酶反映開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反映初速度的措施。其中t1往往取反映開始的時間。酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強酸、強

13、堿、蛋白沉淀劑等，使反映完全停止(也叫中斷反映法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反映呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。該法最基本的一點是停止反映后才測定底物或物的變化。長處：簡樸易行，對試劑規(guī)定不高。缺陷：難保證測定成果的真實性。難以擬定反映時間段酶促反映與否處在線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加速。(2)持續(xù)監(jiān)測法：又稱為動力學(xué)法或速率法、持續(xù)反映法。在酶反映過程中，用儀器監(jiān)測某一反映產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的變化，通過計算求出酶反映初速度。持續(xù)監(jiān)測法根據(jù)持續(xù)測得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。因此持續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定期法更精確。實際工作中，采用工具酶的酶耦聯(lián)法已經(jīng)成為

14、應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的措施。(3)平衡法：通過測定酶反映開始至反映達(dá)到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的措施，又叫終點法。2.按檢測措施分類法：分光光度法;旋光法;熒光法;電化學(xué)措施;化學(xué)反映法;核素測定法;量熱法。(二)酶質(zhì)量測定法運用酶的抗原性，通過抗原、抗體反映來直接測定酶的質(zhì)量，直接用質(zhì)量單位ng/ml、g/L來表達(dá)酶含量的高下。免疫學(xué)措施與測定活性措施相比，其長處是敏捷度和特異性高，不受體液中其她物質(zhì)的影響，特別是克制劑和激活劑的影響，當(dāng)血液中有酶克制劑存在，或因基因缺陷，合成了無活性的酶蛋白時，可以測出滅活的酶蛋白量，有助于疾病診斷和科學(xué)研究。如肌酸激酶同工酶MB(

15、CKMB)質(zhì)量測定較活性測定對疾病的診斷價值高。四、酶活力測定的影響因素(酶反映動力學(xué))大多數(shù)酶促反映是可逆反映，酶反映動力學(xué)中所指速度是反映的初速度。影響酶活性的因素涉及底物的濃度、酶反映的最適pH、最適溫度、酶的克制作用，此外還涉及試劑中表面活性劑的作用等因素。(一)底物濃度的影響：在檢測試劑中底物濃度、輔因子、活化劑、變構(gòu)劑的種類和濃度均對酶的測定至關(guān)重要。其中以底物的種類和濃度最為重要。底物濃度的影響不是簡樸的直線關(guān)系，米氏方程描述了底物濃度對酶促反映速度的影響。1.米氏方程：隨著底物濃度增長，反映速度增長當(dāng)S Km當(dāng)?shù)孜餄舛茸銐虼螅从乘俣炔辉偈艿孜餄舛扔绊?，反映速度達(dá)到最大反映速度

16、，是零極反映。因此檢測酶活性時，要保證有足夠的底物濃度。2.Km：Km值為反映速度相稱于最大反映速度一半時的底物濃度。Km值是酶的特性常數(shù)之一，只與酶的性質(zhì)有關(guān)，而與酶濃度無關(guān)。Km反映酶與底物的親合力 Km值越大，酶與底物親合力越小，反映速度越慢。底物濃度的影響重要是兩個方面即底物的種類和濃度，兩者都與Km有關(guān)。(1)如果所測的酶專一性不強，可作用于多種底物，Km最小的是酶的最適底物。(生理底物)在臨床測定酶活性時，應(yīng)選Km最小的底物，有助于減少試劑成本和避免底物難溶。(2)選擇合適的底物濃度由米-曼氏方程計算得出，底物濃度范疇設(shè)計在1020Km，初速度可達(dá)最大速度的90%95%。舉例：已知

17、Km，求使反映速度達(dá)到95%Vmax的底物濃度。(以上簡介的米氏方程式只能適應(yīng)用于單一底物的酶。)習(xí)題.對于單底物酶促反映，當(dāng)?shù)孜餄舛?S 不不小于酶的米氏常數(shù)Km時，反映速度的變化為A.反映速度最大B.反映速度隨底物濃度增長而加快C.增長底物濃度反映速度不受影響D.反映速度隨底物濃度增長而減慢E.酶促反映呈零級反映對的答案B(二)反映體系的最適pH、緩沖液的種類和濃度：1.pH影響pH可以影響酶與底物的親和力，也影響酶的穩(wěn)定。測定酶活性濃度時一定要選擇在最適pH。多數(shù)酶的最適pH在58之間。 最適pH時酶反映速度最大，測定敏捷度最高;要使pH值保持穩(wěn)定在測定酶活性時要使用緩沖液。2.緩沖液根

18、據(jù)緩沖液對酶活性的影響可將緩沖液分為活性緩沖液、惰性緩沖液和克制緩沖液三大類。緩沖液的離子強度也影響著酶的活性，一般選擇與生理環(huán)境或體液比較接近的離子強度。抱負(fù)的緩沖液應(yīng)具有如下條件：(1)有足夠的緩沖容量：緩沖液的pKa與最適pH越接近，緩沖容量越大。有酸堿的產(chǎn)生或消耗的酶促反映，對緩沖容量的規(guī)定更高。(2)純度高，不具有克制酶活性的雜質(zhì)。(3)溫度依賴性小，受溫度波動pH變化小。(4)盡量選擇活性緩沖液或惰性緩沖液。(5)對酶有穩(wěn)定作用。(三)溫度的控制：溫度對酶活性影響有雙重性。一般說來在2535之間隨溫度升高酶促反映加快。酶的Ql0值約在1.52.5。Ql0值即溫度增長l0化學(xué)速度的變

19、化率。溫度繼續(xù)升高可使酶變性，反映速度下降。在最適溫度時，反映速度最快。不同的溫度酶反映的速率不同，可直接影響測定成果。為保證最適溫度要在恒溫條件下進(jìn)行，溫度波動要控制在1。37是目前使用最廣泛的測定酶催化活性的溫度。目前在常規(guī)實驗室中廣泛使用半自動全自動生化分析儀，有高效率的恒溫系統(tǒng)，使反映系統(tǒng)不久升溫并維持在37，可避免溫度差別引起的誤差。(四)其她因素1.輔助因子：在酶活性測定期，要保證輔基或輔酶的供應(yīng)。2.激活劑：在酶活性測定期，要滿足酶對激活劑或表面活性劑的需要。如Cl-是淀粉酶的激活劑，N-乙酰半胱氨酸時是CK檢測的激活劑。3.克制劑：使酶活性減少，在測定酶活性時，應(yīng)避免克制劑的影

20、響。使酶活性減少或喪失的物質(zhì)稱為克制劑。克制分為競爭性克制和非競爭性克制，在酶活性測定過程中，應(yīng)盡量避免克制劑存在。但在有的反映體系中，加入競爭性克制劑可以提高工具酶的米氏常數(shù)。為了減少上述諸多因素對酶催化活性濃度的影響，國際臨床化學(xué)學(xué)會(IFCC)推薦采用品有量值溯源的，互換性好的原則物質(zhì)用于血清酶催化活性濃度的測定的校正。目前，IFCC已經(jīng)發(fā)布了涉及ALT，AST，ALP，GGT，CK，LDH，Amylase在內(nèi)的數(shù)個常用酶測定的參照措施，該參照措施重要應(yīng)用于酶學(xué)測定參照實驗室，對廠家的試劑進(jìn)行溯源性考核。綜上所述，根據(jù)酶的特性及定量原理，測定酶活力時，必須注意如下幾點：(1)酶促反映過程

21、中，只有最初一段時間內(nèi)反映速度與酶活性成正比，隨著反映時間的延長，反映速度即逐漸減少。(2)要規(guī)定一定的反映條件，如時間、溫度、pH等，并在酶測定過程中保持這些反映條件的恒定，如溫度不得超過規(guī)定溫度的1，pH應(yīng)恒定。(3)配制的底物濃度應(yīng)精確且足夠大，底物液中應(yīng)加入不克制該酶活力的防腐劑并保存于冰箱中，以避免底物被分解。(4)標(biāo)本要新鮮，由于絕大多數(shù)酶可因久置而活力減少，標(biāo)本如無法及時測定，應(yīng)保存于冰箱中。用血漿時，應(yīng)考慮到抗凝劑對酶反映的影響。有些酶在血細(xì)胞、血小板中的濃度比血清高，為此在采血、分離血清時，應(yīng)注意避免溶血和白細(xì)胞的破裂。(5)在測定過程中，所用儀器應(yīng)絕對清潔，不應(yīng)具有酶的克制

22、物，如酸、堿、蛋白沉淀劑等。習(xí)題5.溫度對酶促反映影響說法對的的是A.能減少反映的活化能B.溫度可影響酶促反映的平衡點C.溫度升高酶促反映變慢D.溫度升高酶促反映加快E.一般來說，在2535溫度每增長10，酶促反映速度增長12倍對的答案E五、工具酶及其批示反映(一)工具酶的概念：作為試劑用于測定酶活力或化合物濃度的酶稱為工具酶。對于底物或產(chǎn)物不能直接測定或難于精確測定的酶促反映，采用酶耦聯(lián)法測定。 最簡樸的酶耦聯(lián)反映：A：底物 B：待測酶產(chǎn)物(不能直接測定) C：代表批示酶產(chǎn)物(可以直接測定)Ex：待測酶 Ei：代表批示酶Ex是所要測定的酶，A、B二物質(zhì)分別為其底物和產(chǎn)物，對此二物質(zhì)變化，無法

23、直接監(jiān)測，此時可加入其她酶，其底物為Ex的產(chǎn)物B，其反映產(chǎn)物C可直接監(jiān)測，這樣通過第二個酶反映有也許推測出第一種酶的活性濃度，外加的第二酶稱為批示酶Ei。酶耦聯(lián)反映與一般酶反映的一種重要區(qū)別處是有一種明顯的延滯期。酶耦聯(lián)反映一開始存在著底物A，不存在批示酶的反映，隨著產(chǎn)物B的浮現(xiàn)和增長，批示酶反映隨之加快，Ex和Ei反映速度相等，也就是達(dá)到穩(wěn)態(tài)。從酶反映開始至穩(wěn)態(tài)期間，批示酶反映較慢且不穩(wěn)定，稱為延滯期。顯然這期間批示酶反映速度不能代表測定酶量多少。設(shè)計或選擇酶測定措施時，如果用酶耦聯(lián)法，延滯期越短越好，測定期間一定要避開此期。由于工具酶所催化的反映必須在中間產(chǎn)物濃度很低的條件下進(jìn)行，并且將不

24、久轉(zhuǎn)變?yōu)樽詈螽a(chǎn)物，反映體系中不應(yīng)有中間產(chǎn)物堆積，否則將導(dǎo)致誤差。如果某些酶反映找不到合適的批示酶與其直接耦聯(lián)，此時往往可以加入另一種酶，將兩者連接起來：將這種聯(lián)接的酶稱為輔助酶(Ea)。個別狀況也許使用兩種乃至兩種以上的輔助酶。批示酶和輔助酶都是工具酶。例如要測定ALT活性檢測340nm吸光度的變化測得ALT活性。在這里ALT為待測酶，LDH為工具酶，它的作用相稱于試劑。(二)批示反映1.耦聯(lián)的脫氫酶及其批示反映 NADH(NADPH)+或NAD(NADP)NAD(P)+是由維生素PP(煙酰胺)參與構(gòu)成的輔酶，是體內(nèi)最常用的脫氫酶的輔酶。常用的酶：乳酸脫氫酶(LD)、蘋果酸脫氫酶(MD)、谷氨

25、酸脫氫酶(GLD)和6-磷酸葡萄糖脫氫酶(C-6-PD)。催化的反映：P + NAD(P) H + H+PH2 + NAD (P)+NAD(P)H的特性性光吸取在340nm，可以通過度光光度計測定340nm光吸取的增長或減少表達(dá)酶活性。此外可用365nm波長紫外光激發(fā)NAD(P)H，使其在460nm發(fā)射強烈熒光加以測定。(二)耦聯(lián)H202的工具酶及其批示反映有些酶作用于底物時，可使其氧化產(chǎn)生H2O2,后者在POD的作用下使色素原氧化顯色進(jìn)行測定。葡萄糖氧化酶、尿酸酶、甘油氧化酶、膽固醇氧化酶等工具酶分別用于葡萄糖、尿酸、甘油、膽固醇的測定，(代謝物濃度測定)可使相應(yīng)底物被氧化，生成H202，H202可通過下列批示反映來檢測。1.使單一的色素原顯色：色素原是一種無色的色素前身，在過氧化物酶(POD)存在下被H202氧化后可生成有色的色素。 2.使成對的色素原顯色：必須有兩個色素原共同存在，再在過氧化物酶(POD)的催化下生成色素。如酚和4-氨基安替比林作用，生成紅色色素。習(xí)題:以NAD+還原成NADH反映為基本的生化分析，采用的波長及吸光度變化為A.340nm從小到大B.340nm從大到小C.405nm從小到大D.405nm從大到小E.280