高效液相色譜法 (2)PPT

1、關(guān)于高效液相色譜法 (2)第一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月自學(xué)“薄層色譜法”討論題1. 熒光薄層板的組分是什么？它是否用于熒光化合物的檢測(cè)？2. 熒光薄層的展開動(dòng)力？展開速度是否發(fā)生變化？3. 推導(dǎo)容量因子與比移值的關(guān)系？4. 什么是過(guò)壓薄層色譜法？5. 薄層色譜掃描儀的工作原理。第二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 HPLC是在經(jīng)典液體柱色譜的基礎(chǔ)上, 在色譜理論指引下，加以改進(jìn)而發(fā)展起來(lái)的。特別是GC迅速成為一種儀器分析方法和社會(huì)需要分離分析難揮發(fā)復(fù)雜樣品促進(jìn)了HPLC的發(fā)展。近年來(lái)它以6-8%的增長(zhǎng)率發(fā)展，目前年發(fā)表論文數(shù)已超過(guò)GC。2000年儀器銷售全球第一。第

2、三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月特性經(jīng)典LCTLC/PCHPLCHPLC優(yōu)勢(shì)進(jìn)樣人工加樣點(diǎn)樣進(jìn)樣器準(zhǔn)確溶液流動(dòng)重力表面張力高壓泵快速分離,重現(xiàn)性好檢測(cè)和定量收集餾分檢測(cè)顯色連續(xù)檢測(cè)高靈敏度,自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果棒式圖斑點(diǎn)色譜圖五高一廣表11.1 三種不同形式液相色譜的這樣特征 第四張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月HPLC和經(jīng)典LC比較 HPLC和經(jīng)典LC主要差別在于高效固定相、輸液設(shè)備和連續(xù)檢測(cè)。從速率理論得到塔板方程： 渦流擴(kuò)散、流型效應(yīng)和停滯流動(dòng)相慢傳質(zhì)均與dp有關(guān)，小的dp有利于提高柱效。高效固定相的重要特征是顆粒細(xì)小。 固定相的慢傳質(zhì)與df有關(guān)，減少df有利于提高柱效。

3、鍵合相色譜有效降低df，柱效進(jìn)一步提高。第五張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 經(jīng)典LC填料的缺陷 填料通常是粒度大、范圍寬、不規(guī)則, 不易填充均勻, 擴(kuò)散和傳質(zhì)阻力大, 譜帶展寬加大。它存在致命弱點(diǎn)：速度慢、效率低和靈敏度低。 HPLC填料（高效固定相） 顆粒細(xì)、直徑范圍窄、能承受高壓。達(dá)到傳質(zhì)阻力小, 分離效率高。早期HPLC的固定相用涂漬的方法制備，df大，這和GC一樣，會(huì)大大降低色譜柱的柱效。現(xiàn)代HPLC填料多用鍵合固定相，其固定相膜很薄，因而大大提高了柱效。 (高效固定相帶來(lái)什么新問(wèn)題？)第六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 使用高效填料帶來(lái)兩個(gè)新問(wèn)題：柱流動(dòng)阻力大

4、大增大，需要采用高壓泵輸液表面能很大，采用專業(yè)的裝柱技術(shù) 目前經(jīng)典LC主要用于制備，若用于分析則采用脫機(jī)或非連續(xù)檢測(cè)。 HPLC的特征 采用高效色譜柱、高壓輸液設(shè)備和高靈敏度檢測(cè)器, 從而實(shí)現(xiàn)了高效、高速和高靈敏度、定量準(zhǔn)確, 達(dá)到可與GC相媲美的分離分析性能。特別是結(jié)合計(jì)算機(jī)技術(shù)， HPLC已成為高度自動(dòng)化和智能化的現(xiàn)代分析儀器。第七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 歷史上出現(xiàn)不同的HPLC名稱：高壓液相色譜 (High Pressure Liquid Chromatography)高速液相色譜 (High Speed Liquid C

5、hromatography)高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography) 總之，HPLC與經(jīng)典LC相比, 使用時(shí)更方便, 對(duì)操作者的依賴性更小。HPLC的高重現(xiàn)性和連續(xù)的定量檢測(cè)導(dǎo)致了定性和定量分析結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性和精密度。 經(jīng)典LC的特點(diǎn)：簡(jiǎn)便，填料一次使用。 第九張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月高效液相色譜儀基本裝置流動(dòng)相進(jìn)樣閥注入樣品液色譜柱檢測(cè)器色譜處理機(jī)高壓泵流出液第十張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月高效液相色譜儀方框圖 流動(dòng)相高壓泵進(jìn)樣器色譜柱 檢測(cè)器積分儀 流速

6、控制 閥進(jìn)樣 溫度效應(yīng)第十二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十四張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月旋轉(zhuǎn)式六通閥 a)取樣位（load）b)進(jìn)樣位（injection）第十五張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 一般來(lái)說(shuō)，色譜和電泳儀的儀器流程基本相同。從構(gòu)成儀器的功能塊可分為六大系統(tǒng)：流動(dòng)相供給和輸送系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、記錄或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和輔助控制系統(tǒng)。由于流動(dòng)相的性質(zhì)不同，流路系統(tǒng)的儀器結(jié)構(gòu)有所不同。但記錄和

7、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)相同。 色譜檢測(cè)器 色譜數(shù)據(jù)處理 第十八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流動(dòng)相供給和輸送進(jìn)樣分離檢測(cè)記錄、數(shù)據(jù)處理色譜工作站（計(jì)算機(jī)）：控制顯示溫度控制收集 流路系統(tǒng)（分析單元）：高、低壓流路電路系統(tǒng)（控制單元）：信號(hào)傳輸與處理第十九張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜檢測(cè)器（對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)） 檢測(cè)器實(shí)際上是一種換能裝置, 它將流動(dòng)相中組分含量的變化, 轉(zhuǎn)變成可測(cè)量的電信號(hào)(通常是電壓), 然后輸入記錄器。從原理分析，任何一種分析鑒定方法都可能色譜檢測(cè)器。理想的檢測(cè)器應(yīng)該是靈敏度高、線性范圍大、對(duì)所有待測(cè)組分相同響應(yīng)。一般檢測(cè)器分為； 熱學(xué)、光學(xué)、電學(xué)、電

8、化學(xué)。檢測(cè)器 總體性質(zhì)檢測(cè)器：熱導(dǎo)、示差折射、電導(dǎo) 溶質(zhì)性質(zhì)檢測(cè)器：氫焰、紫外、熒光 通用檢測(cè)器與選擇型檢測(cè)器 濃度型檢測(cè)器和質(zhì)量型檢測(cè)器第二十張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 檢測(cè)器的線性、靈敏度和柱外效應(yīng)三個(gè)基本特性直接影響色譜定量分析的準(zhǔn)確度、精密度和再現(xiàn)性。 檢測(cè)器的線性范圍 大部分廠商都聲稱它們的檢測(cè)器在一定的濃度范圍內(nèi)是線性響應(yīng)。實(shí)際上檢測(cè)器的線性方程可表示為：y = a c , 只有在三個(gè)數(shù)量級(jí)的濃度范圍內(nèi)滿足0.98 1.02的線性響應(yīng)的檢測(cè)器才是線性的。 靈敏度 色譜分析中有三種不同的靈敏度表示法, 檢測(cè)器本身的靈敏度, 整個(gè)色譜體系的濃度靈敏度和質(zhì)量靈敏度。 對(duì)于

9、定量分析來(lái)說(shuō), 重要的是色譜體系的靈敏度, 因?yàn)樗€包括柱子和儀器的其它部分的影響。第二十一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 檢測(cè)器的靈敏度(CD), 實(shí)際上指檢測(cè)限, 即通常指相當(dāng)于兩倍噪音信號(hào)的溶質(zhì)濃度。而色譜體系的最小檢測(cè)限應(yīng)是柱外效應(yīng)10%的最大進(jìn)樣體積所對(duì)應(yīng)的二倍于噪音峰高所對(duì)應(yīng)的樣品濃度。而色譜分析最重要的是色譜體系的質(zhì)量靈敏度, 最小可測(cè)量： m = 2CCD , C是柱內(nèi)效應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 或 m = 6.25e(1k) , e是柱外效應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差。 檢測(cè)器的色區(qū)展寬 對(duì)于毛細(xì)管氣相色譜和高效液相色譜，檢測(cè)器的色區(qū)展寬是柱外效應(yīng)的一個(gè)主要來(lái)源。一般儀器廠商在設(shè)計(jì)時(shí)已把檢

10、測(cè)器的色區(qū)展寬減少到最低程度。 第二十二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜數(shù)據(jù)處理分離柱檢測(cè)器記錄儀積分儀色譜工作站色譜儀信號(hào)輸出方框圖色譜數(shù)據(jù)處理通過(guò)ADC轉(zhuǎn)換器, 把模擬信號(hào)轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào), 然后采用色譜軟件處理給出色譜圖等信息。 數(shù)據(jù)處理原理： 峰的檢測(cè) 數(shù)據(jù)采集 基線校正和重疊峰的分離 自動(dòng)處理 人工修正第二十三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 峰的檢測(cè) 峰的檢測(cè)和判別是依據(jù)在基線的訊號(hào)水平上，預(yù)設(shè)一個(gè)“閾值”，超過(guò)該值時(shí)，判別為峰可開始檢測(cè)。一般采用下面兩種方式判別峰訊號(hào)的變化：切線色譜峰的判斷 最小面積依照信號(hào)斜率的變化檢測(cè)信號(hào)依照積分面積檢測(cè)峰信號(hào)第二十四張

11、，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 保留時(shí)間和峰面積的計(jì)算 基線校正和重疊峰的分離 在色譜分析中，經(jīng)常會(huì)遇到基線漂移和色譜峰不能完全分離的情況。通常采用谷谷規(guī)則或預(yù)設(shè)基線漂移值參數(shù)來(lái)解決第二十五張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 色譜儀自動(dòng)定性和定量分析 定量計(jì)算是把各種計(jì)算公式編制成應(yīng)用軟件存入計(jì)算機(jī)，通過(guò)鍵盤來(lái)選擇所需方法。微處理機(jī)在定量計(jì)算時(shí), 一般通過(guò)保留值來(lái)識(shí)別峰。但由于各種因素的影響, 在重復(fù)多次分析中, 保留值會(huì)有一定的變化, 可采用下述兩種方法確定保留值的變化范圍。 “時(shí)間窗”法 (Time Window)：tRt 對(duì)整個(gè)色譜圖上各個(gè)峰的保留值都設(shè)定相同區(qū)間“時(shí)間

12、窗” ，規(guī)定圖中各個(gè)峰保留時(shí)間的變化范圍。該法設(shè)置簡(jiǎn)單，但用于識(shí)別保留時(shí)間相差很近的相鄰峰不大方便。 “時(shí)間帶”法 (Time Band): tR(1a%) 對(duì)每個(gè)需識(shí)別的定量峰，都設(shè)定一個(gè)保留時(shí)間的相對(duì)變動(dòng)范圍。該設(shè)置較麻煩，但對(duì)不同峰可給出不同的變動(dòng)范圍，對(duì)識(shí)別相鄰峰的分辨率較好，同時(shí)用于編組定量分析也很方便。第二十六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)和色譜工作站的差別 色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)/機(jī)，積分儀功能：色譜數(shù)據(jù)處理ADC模數(shù)轉(zhuǎn)換接口 色譜工作站功能：色譜數(shù)據(jù)處理 控制儀器參數(shù)ADC和DAC模數(shù)轉(zhuǎn)換接口第二十七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜智能化和專家

13、系統(tǒng)簡(jiǎn)介 色譜智能化是新一代色譜儀的發(fā)展方向, 其特點(diǎn)是代替人的部分智能, 選擇分析方法和確定最佳色譜條件, 并有條件地進(jìn)行部分組分定性工作。這項(xiàng)工作不僅要求計(jì)算機(jī)技術(shù), 更重要的是, 要加強(qiáng)色譜的基礎(chǔ)理論研究, 提高色譜操作技術(shù), 特別是制備出性能穩(wěn)定的色譜柱, 這樣才能使操作規(guī)范化, 以實(shí)現(xiàn)人工智能色譜。 色譜專家系統(tǒng)是色譜智能化的一個(gè)重要組成部分, 它從人工智能和數(shù)值計(jì)算方法出發(fā)開展研究, 應(yīng)包括以下幾大部分： 分離模式和柱系統(tǒng)的選擇； 預(yù)處理方法和檢測(cè)器的選擇； 分離條件最優(yōu)化； 在線色譜峰的定性和定量； 色譜硬件的診斷。第二十八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜柱（固定相

14、、填料） 色譜柱是色譜儀的心臟（起分離作用），其核心是優(yōu)質(zhì)固定相（填料） 。進(jìn)行色譜分離的首要工作是選擇性能良好的色譜柱，即在確定的分離條件下分離效率高和分析時(shí)間短的色譜柱。 色譜柱的選擇應(yīng)考慮： 固定相類型的選擇, 主要取決于樣品分離模式； 柱填料的結(jié)構(gòu), 主要指顆粒的形狀大小、均勻性、比表面、平均孔徑和孔容等； 柱規(guī)格指柱內(nèi)徑、柱長(zhǎng)度和填料粒度 色譜柱的牌號(hào)/廠商。第二十九張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月色譜柱的結(jié)構(gòu) 色譜柱由柱管、填料、密封圈、過(guò)濾板、柱頭等組成。應(yīng)特別注意柱頭規(guī)格及無(wú)死體積連接的特性。 柱規(guī)格 制備柱 分析柱 微徑柱液相色譜 (Microbore HPLC)

15、毛細(xì)管液相色譜 (Capillary HPLC) 快速柱：高效短柱，如4.630mm, 3mODS柱 整體柱（Monolithic column)第三十張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 整體柱(monolithic column) 是一種用有機(jī)或無(wú)機(jī)聚合方法在色譜柱內(nèi)進(jìn)行原位聚合的連續(xù)床固定相,具有制備簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性好、多孔性優(yōu)越、能實(shí)現(xiàn)快速、高效分離等優(yōu)點(diǎn)。 制備技術(shù):硅膠整體柱，如Merck 公司的Chromolith Performance RP - C18、Silica ROD 和Prep ROD；有機(jī)聚合物整體柱，如BIA Separations 的CIM(Convectiv

16、e Interaction Medai)等聚合物整體柱 應(yīng)用： 高效液相色譜(HPLC) 、毛細(xì)管電色譜(CEC) 、微柱液相色譜(- HPLC) 、固相萃取等系統(tǒng)上, 成功地應(yīng)用于生命科學(xué)、藥物學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域的分離分析。第三十一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月何為無(wú)死體積柱頭連接？無(wú)限直徑效應(yīng)（無(wú)限直徑柱）？第三十二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月柱填料1填料的特性1）基質(zhì)材料 無(wú)機(jī)基體：硅膠、氧化鋁、氧化鋯和二氧化鈦等 交聯(lián)聚合物：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸酯等 復(fù)合材料：無(wú)機(jī)基體復(fù)合一層聚合物 2）形狀：球形和不規(guī)則 硅膠和硅基仍是目前最廣泛應(yīng)用的液相色譜柱填料。此外

17、還有高分子多孔微球、高疏水表面的多孔碳、無(wú)機(jī)金屬氧化物等。第三十三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第三十四張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 這類鍵會(huì)固定相具有熱穩(wěn)定好，不易吸水，耐有機(jī)溶劑的優(yōu)點(diǎn)。能在70以下，pH28范圍內(nèi)正常工作，應(yīng)用廣泛. 硅烷化（SiOSiC）鍵合固定相制備反應(yīng)如下： （最常見類型?。┑谌鍙垼琍PT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3）粒度及分布范圍4）孔徑和耐壓性 一般硅膠的孔徑在60-125A, 但大孔硅膠的孔徑為300-1000A。硅膠填料的產(chǎn)品差異主要取決于： 微?；|(zhì)的制備過(guò)程差異； 基質(zhì)和鍵合物反應(yīng)的差異； 柱裝填技術(shù)專利的差異。 一些

18、鍵合鍵新技術(shù)： （1）RX技術(shù) (Tx technology) “堿性脫活”（2）SB技術(shù) (Stabilized Bonding) “高覆蓋量”（3）封端技術(shù) (End-Capping)第三十六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1）為什么要封端？2）聚合物柱的特點(diǎn)？封端 常規(guī) 聚合物 第三十七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月固定相類型 (Stationary phase)1）按色譜保留原理把填料分為：吸附劑、離子交換劑、涂敷固定液、分級(jí)孔徑或交聯(lián)度填料等。2）按特性分類 硅膠：極性吸附劑 鍵合固定相 （為什么要鍵合？） 采用硅膠表面鍵合技術(shù), 對(duì)硅膠微粒表面進(jìn)行修飾-硅烷化

19、, 使得硅膠表面帶有不同的功能團(tuán), 以適應(yīng)不同的分離需要。目前在色譜填料中, 鍵合相約占78%(其中C18占反相色譜的72%), 硅膠約占10%)。A.基質(zhì)：200-300m2/g的硅膠；聚合物, 如聚苯乙烯和聚乙烯醇膠等。第三十八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月鍵合相類型烷基：C1、C2、C3、C4、C6、C8、C12、C16、C18、C22等反相柱；苯基：C6H5-, 含有-相互作用；氰基：-(CH2)3-CN, 帶有給電子作用、羥基的氫鍵作用；正相、反相均可。氨基：-(CH2)3-NH2, 弱陰離子型鍵合相, 可用于糖分析。 其它極性鍵合相還有：二醇基Lichrosorb DI

20、OL；硝基Nucleosil-NO2；二甲胺基Nucleosil-NMe2等。C. 鍵合層（單層和聚合物）第三十九張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月柱性能測(cè)試 : 應(yīng)指定色譜條件和檢測(cè)物質(zhì)1理論塔板高度2峰不對(duì)稱因子：應(yīng)小于或等于1.23相對(duì)保留值和分配比的重現(xiàn)性：精密度應(yīng)優(yōu)于5%和10%4柱阻力因子： = 0.1Pt0dp2(109L2)，多孔填料500-10005. 折合塔板高度第四十張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流動(dòng)相 (Mobile phase) 流動(dòng)相（淋洗劑、洗脫劑）是影響液相色譜分離的一個(gè)非常重要的實(shí)驗(yàn)因素。改變流動(dòng)相的性質(zhì)和組成將改變?nèi)苜|(zhì)組分的保留值、分離選

21、擇性和柱效。 在實(shí)際工作中，流動(dòng)相的可選擇范圍較大是液相色譜的一個(gè)顯著特點(diǎn)。 流動(dòng)相的選擇和優(yōu)化是大多數(shù)液相色譜分析的主要研究工作，在合理的時(shí)間內(nèi), 所用的流動(dòng)相要能使樣品各組分達(dá)到足夠的分離。 1）什么溶劑適合于液相色譜？2）流動(dòng)相如何影響色譜分離？問(wèn)題：第四十一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月高效液相色譜流動(dòng)相溶劑的物化性質(zhì)（部分）第四十二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月合適選擇性溶劑液相色譜溶劑選擇范圍 液相色譜流動(dòng)相溶劑的選擇步驟： 選擇具有合適物理性質(zhì)的溶劑，如沸點(diǎn)、粘度、紫外截止波長(zhǎng)等 選擇合適洗脫強(qiáng)度的溶劑：簡(jiǎn)單樣品，2 k 5；復(fù)雜樣品，0.5 k 20 改

22、變?nèi)軇┑倪x擇性，使被分離組分具有較高的值所有溶劑合適物理性質(zhì)溶劑合適保留值溶劑第四十三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流動(dòng)相溶劑的選擇 考慮溶劑的實(shí)用要求：在實(shí)際操作中所選用的流動(dòng)相能保證色譜系統(tǒng)的分離過(guò)程可重復(fù)進(jìn)行：溶劑的純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過(guò)程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求；溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測(cè)器的工作；在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對(duì)分離組分的回收。1與色譜系統(tǒng)的適應(yīng)性：溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性, 不與固定相和樣品組分起反應(yīng)。2溶劑的純度（包括毒性和價(jià)格） HPLC級(jí)：色譜淋洗劑，波長(zhǎng)透光率 A.R.級(jí)：主成分及雜質(zhì)含量第四十四張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月

23、3溶劑的粘度要?。?一般 約為(0.4-0.5) mPas , 最大也不超過(guò) 2mPas。粘度大, 流動(dòng)相傳質(zhì)慢, 柱效下降；同時(shí)柱壓增大。 4與檢測(cè)器匹配：UV檢測(cè)要求mp的背景吸收要低, 所用溶劑的截止波長(zhǎng) (T10%對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng))要與之相匹配。而RI檢測(cè)則要求溶劑的折光指數(shù)與溶質(zhì)的差別要大, 以利于檢測(cè)。5沸點(diǎn)低：對(duì)制備色譜, 采用低沸點(diǎn)溶劑時(shí)的固體殘留物少, 有利于提高純度。6其他要求：溶劑對(duì)樣品要有一定的溶解度。mp用前要脫氣處理。便于更換和清洗。第四十五張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月液相色譜中的溶劑強(qiáng)度1. 溶劑強(qiáng)度是描述色譜性能的主要指標(biāo)，表示溶劑對(duì)樣品的洗脫能力，它決

24、定于溶劑與溶質(zhì)之間分子的作用力。目前還沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)描述不同類型液相色譜體系中的溶劑強(qiáng)度，而是采用相對(duì)極性和溶解度參數(shù)等作為溶劑強(qiáng)度指標(biāo)。1)溶解度參數(shù)（參見溶劑選擇性）2)極性參數(shù)P 根據(jù)固定相和流動(dòng)相的極性大小, 人們把液相色譜分成： 正相色譜：固定相極性大于流動(dòng)相 (包括硅膠吸附色譜) 反相色譜：固定相極性小于流動(dòng)相第四十六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月正相色譜：增加溶劑極性，保留時(shí)間增大或變?。糠聪嗌V：增加溶劑極性，保留時(shí)間又如何變化？第四十七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月洗脫強(qiáng)度與溶劑極性分子之間相互作用有色散力、偶極作用、氫鍵和介電作用。某一溶質(zhì)與其它分

25、子相互作用大小的程度可以用極性大小表示。極性越大, 它與其它分子的作用力越大。 “極性”溶劑容易吸收和溶解“極性”物質(zhì)。溶劑洗脫強(qiáng)度指流動(dòng)相中溶劑的洗脫能力, 它不僅與流動(dòng)相，而且與固定相的極性有關(guān)。在正相色譜中, “溶劑洗脫強(qiáng)度”與溶劑極性成正比；而在反相色譜中，溶劑極性越大, 洗脫能力越小。第四十八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月溶劑強(qiáng)度圖反相色譜THF/H2OACN/H2OMeOH/H2O 0 20 40 60 80 100正相色譜 0 20 40 60 80 100甲醇戊烷異丙基氯二氯甲烷乙醚乙腈 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 第四十九張，PPT共六十四頁(yè)

26、，創(chuàng)作于2022年6月混合溶劑的極性 在液相色譜中, 一般溶劑的極性變化二個(gè)單位, 溶質(zhì)的分配比差不多能有十倍的變化。通過(guò)溶劑強(qiáng)度參數(shù)的計(jì)算, 可以較好地較快地選擇合適溶劑或調(diào)整流動(dòng)相的極性范圍。如：正相色譜：k2 / k1 = exp (P1P2)/2反相色譜：k2 / k1 = exp (P2P1)/2 在液相色譜常用混合溶劑作流動(dòng)相。混合溶劑的P具有加和性： Pab = aPabPb , 為某一溶劑的體積分?jǐn)?shù)。第五十張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月溶劑選擇性分類 一般地說(shuō), 改變?nèi)軇┍壤烧{(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性, 從而使得組分的容量因子落在合適的范圍內(nèi)。但由于分子間相互作用的類型相同

27、, 分離因子變化不大。因此專門研究了各種溶劑的選擇性, 并將常用溶劑進(jìn)行分類。第五十一張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)子給予體偶極相互作用質(zhì)子接受體溶劑選擇性分類三角形圖Xe Xd Xn 12345678純質(zhì)子接受體強(qiáng)偶極中性化合物純質(zhì)子給予體第五十二張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1 組：脂肪醚（純質(zhì)子接受體）2 組：脂肪醇（質(zhì)子接受-給予體）3 組：吡啶衍生物、四氫呋喃（質(zhì)子接受體，易極化）4 組：乙二醇、芐醇、乙酸、甲酰胺（質(zhì)子給予體）5 組：二氯甲烷、二氯乙烷（大偶極距）6 組：脂肪酮、酯、二氧六環(huán)、腈7 組：芳烴、芳醚、硝基甲烷8 組：氟代醇、氯仿、水（質(zhì)子給予

28、體）第五十三張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)子給予體偶極相互作用質(zhì)子接受體反相色譜中的溶劑選擇性1甲醇2TFH345乙腈67水8第五十四張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)子給予體偶極相互作用質(zhì)子接受體正相色譜中的溶劑選擇性醚 1 2 34二氯乙烷 5乙腈 678 CHCl3 8主溶劑：己烷第五十五張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 按溶劑分子的特殊作用類型分類, 采用三個(gè)不同的常數(shù)表示： Xe(接受質(zhì)子參數(shù))易與含羥基的分子作用(如酸類、酚類)； Xd(給質(zhì)子參數(shù))易與堿性化合物作用(如胺、亞砜等)； Xn(強(qiáng)偶極參數(shù))易與偶極距較大的溶質(zhì)分子作用(如硝基化合物、

29、腈、亞砜和胺類等)。 通常把常用溶劑分成八組。同一組溶劑的三個(gè)選擇性參數(shù)相近，其選擇性相似。當(dāng)某一溶劑不能提供足夠的分離選擇性時(shí), 那么更換同組的其它溶劑亦不能提高選擇性。改變?nèi)軇r(shí), 只有從距離較遠(yuǎn)的溶劑組挑選, 才可能使選擇性有較大變化。因?yàn)楫?dāng)溶劑和樣品分子的各種相互作用的相對(duì)重要性發(fā)生明顯變化時(shí), 流動(dòng)相的選擇性才會(huì)發(fā)生最大程度的改變。第五十六張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月流動(dòng)相的優(yōu)化 流動(dòng)相的優(yōu)化主要是考察流動(dòng)相組成對(duì)保留時(shí)間、分離因子和分離度等參數(shù)的影響。 使用混合溶劑最大優(yōu)點(diǎn)是：獲得最佳的分離選擇性；保持流動(dòng)相的低粘度, 從而保證高的柱效。 在吸附色譜中混合溶劑選擇規(guī)則：混合溶劑中極性強(qiáng)的組分含量大或小時(shí), 有最大的值；能與溶質(zhì)發(fā)生氫鍵作用的溶劑, 有較好的分離選擇性。第五十七張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月梯度洗脫技術(shù)梯度洗脫的特點(diǎn)梯度洗脫的主要條件梯度洗脫的基本原理梯度洗脫（溶劑程序）：通過(guò)改變流動(dòng)相的組成來(lái)調(diào)整組分的k值，改變分離因子值，以達(dá)到最短時(shí)間內(nèi)得到最佳分離的目的。為什么程序升溫在液相色譜中沒(méi)有受到青睞？ 在液相色譜中最低溫度和最高溫度受到流動(dòng)相的黏度和沸點(diǎn)的限制；同時(shí)它的溫度效應(yīng)比較小。第五十八張，PPT共六十四頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1梯度洗脫的特點(diǎn)（1）改善分離, 加快分析速度；（2）改善峰形, 減少拖尾, 有利于