咖啡及伴侶對細胞的微核誘導

1、誘變物質(zhì)的微核檢測技摘要：本實驗以大蒜為實驗材料，研究咖啡和咖啡伴侶能否誘發(fā)細胞產(chǎn)生微核，以及咖啡和咖啡伴侶的毒性是否有疊加效應。實驗中將咖啡和咖啡伴侶配置為不同濃度梯度的溶液，對大蒜進行誘發(fā)培養(yǎng)24小時，并觀察檢測微核的誘發(fā)率。前言：由于大量新的化合物的合成，原子能應用，各種各樣工業(yè)廢物的排出，使人們很需要有一套高度靈敏，技術簡單的測試系統(tǒng)來監(jiān)視環(huán)境的變化。只有真核的測試系統(tǒng)更能直接推測誘變物質(zhì)對人類或其它高等生物的遺傳危害，在這方面，微核測試是一種比較理想的方法。微核是真核生物細胞中的一種異常結構，往往是細胞經(jīng)輻射或化學藥物的作用而產(chǎn)生。在細胞間期微核呈圓形或橢圓形，游離于主核之外、大小應

2、在主核13以下。微核的折光率及細胞化學反應性質(zhì)和主核一樣。一般認為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的斷片產(chǎn)生的，但有些實驗也證明整條的染色體或多條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在細胞分裂末期被兩個子細胞核所排斥便形成了第三個核塊。已經(jīng)證實微核率的大小是和用藥的劑量或輻射累積效應呈正相關，這一點和染色體畸變的情況一樣。所以可用簡易的間期微核計數(shù)來代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計數(shù)。咖啡和咖啡伴侶為現(xiàn)代人們經(jīng)常選用的飲用品。而咖啡中的咖啡因之類的物質(zhì)和咖啡伴侶中植物末（奶精）對人體的健康有沒有危害呢？為此我們用大蒜作為材料研究咖啡和咖啡伴侶對細胞染色體畸變的影響，實驗主要通過檢測細胞微核誘發(fā)率，得到

3、咖啡或咖啡因?qū)毎挠绊懗潭取?、材料與方法1.1材料1.1.1材料：大蒜雀巢速溶咖啡雀巢速溶咖啡伴侶1.1.2試劑：NaN3HCL卡諾固定液70%乙醇改良苯酚品紅1.1.3儀器：培養(yǎng)皿量筒燒杯玻璃棒電子天平手套離心管單面刀片蓋玻片載玻片顯微鏡1.2方法1.2.1取材：將大蒜置于24C水中浸泡24h,選擇根長整齊一致，不定根長約0.51cm左右的大蒜隨機分組。1.2.2處理各實驗組：配置50mmol/L的NaN3溶液作為陽性對照組的培養(yǎng)液，用自來水作為陰性對照組的培養(yǎng)液，將咖啡和咖啡因配置成不同濃度梯度的溶液作為樣品組的培養(yǎng)液，將大蒜置于各組培養(yǎng)液中培養(yǎng)24小時。樣品濃度梯度如下表表一、樣品濃

4、度梯度溶液咖啡咖啡咖啡咖啡咖啡伴侶咖啡伴侶咖啡+伴侶咖啡+伴侶濃度g/L7530151.515375+1515+31.2.3恢復培養(yǎng)：將以上實驗組誘發(fā)培養(yǎng)24后的大蒜轉(zhuǎn)移到自來水中恢復培養(yǎng)24小時，注意做好標志。1.2.4固定：將恢復培養(yǎng)好的大蒜用卡諾固定液固定24小時。1.2.5保存：將固定好的大蒜移至70%乙醇中4弋下保存，備用。1.2.6制片：將根尖用1MHCI處理的10min,水洗3次。切取近根尖分生區(qū)的伸長區(qū)組織，用改良苯酚品紅染色10-15min。壓片：吸取染液，加上蓋玻片后，用鉛筆輕敲使細胞分散，最后垂直壓下去1.2.7觀察：將制好的片子放到顯微鏡下觀察。每個根尖計數(shù)1000個細

5、胞（也可取5個視野計數(shù)），統(tǒng)計含微核的細胞數(shù)，然后取平均值，即為該處理的微核千分率。2、實驗結果1.計算各測試樣品（包括對照組）微核千分率（MCN%。）.某測試樣品（或?qū)φ眨┯^察到的微垓數(shù)_“一某測試樣品（或?qū)φ眨┯^察到的細胞數(shù)如果對照本底MCN%。為10%。以下，可采用如下標準進行分析以確定樣品的污染程度：MCN%在10%以下，表示基本沒有污染；MCN%在10%o18%o區(qū)間，則表示有輕度污染;MCN%在18%o30%o區(qū)間，則表示有中度污染;MCN%。在30%。以上，則表示有重度污染;2、實驗圖片ABE圖1圖中A為75gL的咖啡培養(yǎng)誘導的大蒜的根尖細胞；B為15gL咖啡伴侶培養(yǎng)誘導的大蒜的

6、根尖細胞；C為75g/L的咖啡和15g/L咖啡伴侶混合培養(yǎng)誘導的大蒜的根尖細胞；D為清水培養(yǎng)的大蒜的根尖細胞；E為50mmol/L的NaN3培養(yǎng)誘導的大蒜的根尖細胞。3、分析、討論由圖1中的圖片可知，咖啡、咖啡伴侶、咖啡和咖啡伴侶混合培養(yǎng)誘導的大蒜生長都沒有成功的誘發(fā)大蒜在分裂過程中產(chǎn)生微核，所以微核千分率為0根據(jù)相關文獻可知，用蠶豆作為材料研究咖啡的微核誘發(fā)，實驗結果能得到成功誘發(fā)微核細胞，而我們的實驗選擇了大蒜作為材料則得不到成功誘發(fā)微核的細胞，且為了避免大蒜和蠶豆對咖啡的培養(yǎng)濃度的要求不同，我們配置能誘發(fā)蠶豆的咖啡溶液濃度及幾組高于誘發(fā)蠶豆的咖啡溶液濃度的培養(yǎng)液。但是依舊沒有得到預期的結果，說明大蒜對于咖啡的敏感度不高或者我們設計的濃度不適合。這也提醒我們在實驗的選材上要加倍注意。雖然在細胞中沒有發(fā)現(xiàn)微核，但是從實際大蒜的根的長勢中可以看出隨著溶液濃度的增長對大蒜的生長影響越大，大蒜的跟長的越短。而咖啡和咖啡伴侶共同作用情況下的大蒜的根的長勢和單獨的咖啡溶液中的長勢差不多，但是比單獨的咖啡伴侶的長勢要短