HPLC高性能液相色譜使用說明及注意事項祥解

1、HPLC-高性能液相色譜使用說明及注意事項一、開機(jī)操作：1，打開計算機(jī)，進(jìn)入 Window 操作系統(tǒng)。2,打開1200LC各模塊的電源，等待儀器自檢完畢，1-2min。7畫翌雖1口 A呂7畫翌雖1口 A呂M bMethod 43,雙擊桌面上“Instrument 1 Online”圖標(biāo)，進(jìn)入1200化學(xué)工作站。進(jìn)入的工作站畫面如下 所示：泵、柱溫箱、DAD檢測器為灰色（OFF狀態(tài)），其他綠色部分表示狀態(tài)已經(jīng)Ready。ethod. SequencATHON.M4,把流動相放入溶劑瓶中一A為10%甲醇，B為100%甲醇。點擊泵下面的瓶圖標(biāo)，輸入 溶劑的實際體積，點擊 OK。5，逆時針打開 5，逆

2、時針打開 Purge 閥。6，點擊 Pump 圖標(biāo)，點擊 Setup pump 選項，進(jìn)入泵編輯畫面。設(shè)泵 Flow:5ml/min， 點 擊 OK。7,點擊Pump圖標(biāo)，點擊Control選項，選中On,點擊OK，沖洗A通道至無氣泡從廢液 管排出，切換通道B繼續(xù)Purge,直到所有要用通道無氣泡為止。一般為5-10min即可， 閥打開時，溶劑流向廢液管；關(guān)閉時，溶劑由毛細(xì)管出口流向進(jìn)樣器。點擊Pump圖標(biāo)，點擊Control選項，選中Off,點擊OK關(guān)泵。點擊Pump圖標(biāo)，點擊Setup pump選項，設(shè)Flow:1ml/min，順時針關(guān)閉Purge閥（不 要太過用力，輕輕旋緊即可）。注意：

3、一定要按順序操作，開啟時：Purge閥一改泵流量為5ml/min開泵；關(guān)閉時：關(guān)泵 改流量為 1ml/min-關(guān)閉 Purge 閥。若是在流量在 5ml/min 把 Purge 閥關(guān)閉，則過大的 壓力會損害色譜柱。10，從右至左分別點擊DAD檢測器，柱溫箱右下角的開關(guān)，選擇Yes打開儀器。預(yù)熱45min。11,點擊Pump右下角的開關(guān)，選擇Yes,打開泵。點擊Pump圖標(biāo)，點擊Setup pump選 項，將流動相比例改為如下設(shè)置，點擊OK。用100%甲醇沖洗系統(tǒng)30min。12,等儀器Ready,基線平穩(wěn)后，即可按照樣品檢測過程進(jìn)行檢測。因為儀器的準(zhǔn)備時間 較長，所以在儀器信號平穩(wěn)前，可以用來

4、準(zhǔn)備樣品和輸入樣品信息以便節(jié)約操作時間。二、樣品檢測過程（一）準(zhǔn)備過程1、溶液配置20%NA2SO4清洗用酸溶液的準(zhǔn)備稱量 200土 1g NA2SO4 粉末。24用漏斗將NA2SO4粉末裝入1000ml容量瓶中，用純凈水反復(fù)沖洗漏斗以及容量瓶內(nèi)壁。加水至750ml（不必很準(zhǔn)確），塞緊容量瓶瓶塞，反復(fù)搖晃至NA2SO4粉末完全溶解。加水至刻度1000ml。取出部分溶液，用冰醋酸（色譜級純）調(diào)溶液的PH值在2.0-30。將調(diào)好的溶液裝入20ml 樣品瓶中以便取用。5% K2SO4溶液（凝聚劑）的配置稱量 50 土 1g K2SO4 粉末。24用漏斗將K2SO4粉末裝入1000ml容量瓶中，用純凈

5、水反復(fù)沖洗漏斗以及容量瓶內(nèi)壁。加水至750ml（不必很準(zhǔn)確），塞緊容量瓶瓶塞，反復(fù)搖晃至K2SO4粉末完全溶解。加水至刻度1000ml。備好，用時將溶液裝入K2SO4溶液儲瓶（裝有瓶口移液器）中即可。1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置在一號20ml樣品瓶中先滴加0100000300g 14%Kathon （AMV-1568）,記錄重量 W1；繼續(xù)加入5%的K2SO4溶液至總重為15.0000.5000g，記錄總重W2。在二號20ml樣品瓶中先滴加0.10000.0300g 一號樣品瓶中的溶液，記錄重量W3；繼 續(xù)加入5%的K2SO4溶液至總重為15.0000.5000g，記錄總重W4。將結(jié)果輸入到EXCE

6、L表格參數(shù)計算中，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液的參數(shù)：Non-chlorinated Kathon PPM, Chlorinated Kathon PPM。 這三個參數(shù)將會在后續(xù)的實驗中用到，將結(jié)果填 入儀器旁邊的標(biāo)準(zhǔn)溶液參數(shù)記錄表中，以便實驗操作。14 流動相的配備Bottle A： 10%甲醇，量取1002ml甲醇至1000ml容量瓶中，加水至刻度。輕輕搖勻。 Bottle B：100% 甲醇（色譜級純）。注意：將配好的 10% 甲醇裝入 BOTTLE A 時，要將溶液延瓶壁輕輕倒入，不可引入氣泡。15 樣品的準(zhǔn)備將 Tube放置在天平上，清零。稱取1000000500g樣品，記錄樣品重量Ws。用瓶口移液

7、器移取5ml 5% K2SO4溶液至Tube中，記錄總重Wt。（應(yīng)該在60-6.25g）將 Tube放入架子中，由于樣品多，一定要記住放入順序，以免搞混。重復(fù)步驟A-C，稱取多個樣品。將結(jié)果輸入到EXCEL表格參數(shù)計算中，得到樣品 的參數(shù)： Multiplier。待樣品全部稱完后，分別在振蕩器上振30s,然后放入離心機(jī)中以17000rpm的轉(zhuǎn)速，離 心 20min。F打開Tube蓋，用3ml進(jìn)樣器抽取上層清液后，在進(jìn)樣器上裝上02-micron PEFE過濾器， 將樣品注入到 2ml 進(jìn)樣瓶中，蓋緊進(jìn)樣瓶的蓋子，一個樣品準(zhǔn)備完畢。G對所有樣品重復(fù)操作E。清洗Tube,處理廢液。注意：1、3ml

8、進(jìn)樣器、0,2-micron PEFE過濾器、2ml進(jìn)樣瓶均為一次性使用。2、若離心后樣品上層清液仍然渾濁，則對該樣品再次離心15min。若仍然渾濁，則 需要找出原因。上層清液仍然渾濁的樣品，說明樣品的處理不當(dāng)，不可以進(jìn)行檢測。3、由于Tube大，取樣量少，稱取樣品時盡量不要滴到Tube內(nèi)壁上。加入5ml 5% K2SO4溶液時也要注意不滴加在內(nèi)壁上。操作時最好將滴管深入到Tube里。將樣品按順序放入自動進(jìn)樣器中，等待檢測。（二）檢測過程I、運(yùn)行單個樣品A,在 Method and Run control 界面下，從 Run control 菜單中選擇 Sample Info 選項，如下 圖所

9、示，輸入操作者姓名，樣品位置，樣品名稱，子目錄名稱， Multiplier。 點擊 OK。等儀器Ready,基線平穩(wěn)后，Method-Load Method,彈出對話框問當(dāng)前的Method已經(jīng) 被更改，是否需要保存，選擇NO。彈出方法選擇界面，選擇方法KATHON,點擊確定。點擊Start,運(yùn)行樣品?；蛘撸瑥腗ethod菜單中選擇Run Method也可。2、多個樣品進(jìn)樣（序列）原理和單個樣品一樣，就是需要編輯進(jìn)樣序列表格進(jìn)入 Method and Run Control 界面，在菜單中選擇 Sequence New Sequence在菜單中選擇Sequence- Sequence Param

10、eters,輸入操作者姓名、子目錄名稱（要求以 當(dāng)天日期作為子目錄名），其他設(shè)置如下。C,在菜單中選擇Sequence Sequence Table按如下規(guī)則輸入所有樣品信息： *數(shù)據(jù)輸入規(guī)則*：STD1：輸入 vial-樣品放置位置，一般為 1-4; sample name-輸入 STD; Method name-KATHON ; Inj/vial 輸入 1；Sample type-輸入 Calibration; cal level-輸入 1; Update RF-Replace; Update RT-Replace。STD2 :其他不變，只作改動 Update RF-Average; Up

11、date RT- AverageSample：輸入vial-樣品放置位置，一般為5以后；sample name-輸入待測樣品名稱; Method name-KATHON ; Inj/vial-輸入 1； Sample type- 入；Sample; Multiplier。 Append line-添加輸入行Inset 插入輸入行樣品編輯順序（為了保證結(jié)果的準(zhǔn)確和防止色譜柱被堵請按以下順序編輯樣品）- Cleaning agent of acetic acid （PH=2.0-3.0 的 20%NA2SO4 溶液）-STD1（REPLACE）-STD2 （AVERAGE）Calibration

12、and save method, creating and running a new sequence.-10-15 Samples- Cleaning agent of acetic acid （PH=2.0-3.0 的 20%NA2SO4 溶液）-STD （REPLACE）若ASTD 0.05則立刻停止運(yùn)行，重新平衡系統(tǒng)-若ASTD | a. .-”，.-C,選擇是否覆蓋原有校正曲線，如下圖所示。D,在表中輸入化合物名稱和相應(yīng)化合物名稱和濃度。注意：只需選擇A通道的參數(shù)進(jìn)行校 正，刪除其他通道的參數(shù)。1 DeleteInsert.Print K1 DeleteInsert.Print K

13、HelpAreaRef ISTD13.017/&AD1 Xpfi：hloriridted l?at1.583381.5304.1501e-3NoNo26.999也D1chlcifinated kadiQfr1 1一5.妙676.9507.7369e-3NoNoEnter刪除零濃度行。也lI“也lI“銅烝阿I* II旦TL41應(yīng)回溺完威. wd 7 i itfcWiftT申|門冋叫LiJ國囲羽再校正即是同一點重復(fù)進(jìn)樣進(jìn)行再 處理.以上是選項-選擇是對原有曲線平均或取代/選擇對哪個點進(jìn)行處理，此數(shù)值一定要選擇77怦拷|小卜Li T閩W-gjI-說丄氏.*咿-6 T申|門冋叫LiJ國囲羽再校正即是同一點重復(fù)進(jìn)樣進(jìn)行再 處理.以上是選項-選擇是對原有曲線平均或取代/選擇對哪個點進(jìn)行處理，此數(shù)值一定要選擇77怦拷|小卜Li T閩W-gj| - 1-H*L -a 廠 XffMaNWM. |十 |選擇對哪于點進(jìn)行處 理，此數(shù)佰一定要選擇選擇是對原有曲線平均或取代G將校正結(jié)果存入方法：File-save methodiiIa-mf ini- k-h r- - iiIa-