分析性能評(píng)估資料

1、5-核糖核苷酸水解酶測(cè)定試劑盒（酶速率法）分析性能評(píng)估資料 - TBA120FR一概述5-核糖核苷酸水解酶測(cè)定試劑盒（酶速率法）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)5 -NT試劑）分析性能內(nèi)容包括空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度等項(xiàng)目的測(cè)試，本文參照5 -核糖核苷酸水解酶測(cè)定試劑盒（酶速率法） 注冊(cè)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的要求以及試驗(yàn)方法在全自動(dòng)生 化分析儀上對(duì) 5 -NT 試劑相關(guān)技術(shù)性能指標(biāo)進(jìn)行相應(yīng)的研究評(píng)估。測(cè)試儀器及參數(shù)設(shè)置2.1測(cè)試儀器：TBA-120FR2.2.參數(shù)設(shè)置：東芝TBA-120FR參數(shù)Assay Name5 -NTL-Refere nce-H0-10L-L in ear Ran ge-H0-8

2、0Reacti on ModeRATE UPWavele ngth-Prim/sec548Read time-Ma in25-32Read time-Flex0-0Li nearity-Bia nk Read14-16Abs Limits0.5-2.5Sta ndard S.Vol6Reage nt 1 R.Vol200Reage nt 2 R.Vol100Decimal Places2UnitsU/LCalib ModeLin earK2766Bla nk/Calib Replicates3-3BLK Abs Ran ge-2.5-2.5BLKWater 0.00BLA Sample S.V

3、OL.6C1#.#C1 Sample S.VOL.6C2-C5C2-C5 Sample S.VOL.三性能測(cè)試結(jié)果3.1 空白吸光度 用指定空白樣品（去離子水）測(cè)試試劑（盒），在測(cè)試主波長(zhǎng)下，測(cè)試三次吸光度，取平均值即為試劑空白吸光度測(cè)定值。其結(jié)果應(yīng)符合37C環(huán)境下，波長(zhǎng)546nn處、光徑為1cm時(shí)，A空白w 0. 300。批號(hào)A2014002A2014003A201400410.0110.0100.01020.0090.0100.01030.0080.0140.010平均值0.0090.0110.0103.2 空白吸光度變化率以蒸餾水調(diào)整分光光度計(jì)的零點(diǎn)，用指定空白樣品 （蒸餾水）測(cè)試試劑工

4、作液，在波長(zhǎng)546nm、37C條件下穩(wěn)定5min后測(cè)定一次試劑工作液吸光度A1 , 5min時(shí)再測(cè)定一次試劑 工作液吸光度A2,計(jì) 算試劑空白吸光度率，空白吸光度變化率 A/min w 0. 015 （溫度37C、波長(zhǎng)546nm、光徑1cm）批號(hào)A2014002A2014003A2014004空白吸光度變化率0.004-0.00203.3 分析靈敏度用已知濃度的樣本測(cè)試試劑盒，記錄樣本的吸光度值A(chǔ)i與樣本經(jīng)過(guò)T （ min ）后的吸光度值A(chǔ)2,換算為25. 00U/L的吸光度變化率厶A/min。計(jì)算公式為：吸光度變化率 A/min=A?- aJ/t c /C樣本（1）其中：A?=（ A?主波-

5、B2副波）A1= （A1 主波 B1 副波）A?主波一一在規(guī)定參數(shù)下，主波長(zhǎng)下反應(yīng)T時(shí)間后的吸光度值；B2副波一一在規(guī)定參數(shù)下，副波長(zhǎng)下反應(yīng)T時(shí)間后的吸光度值；A1 主波一一在規(guī)定參數(shù)下，主波長(zhǎng)下的起始吸光度值；B1 副波在規(guī)定參數(shù)下，副波長(zhǎng)下的起始吸光度值；T -反應(yīng)起始至終點(diǎn)的反應(yīng)時(shí)間（ min）；Co -要求規(guī)定的濃度；C （樣本）實(shí)際檢測(cè)樣本的濃度值。批號(hào)A2014002A2014003A20140040.0280.030.0313.4線性范圍用去離子水（零值樣本）稀釋接近線性范圍上限的高濃度樣本，混合成至少5個(gè)不同梯度的樣品（Xj），分別測(cè)試試劑（盒）。每個(gè)稀釋濃度的樣本測(cè)試3次，分

6、別求出測(cè)定結(jié)果的均值（yj。以稀釋濃度（X）為自變量，以測(cè)定結(jié)果均值（yj為因變量求出線性回歸方程。按公式（2）計(jì)算線 性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。遲（人吠）（片一y） 迄（XX） Z （y-y）2 TOC o 1-5 h z i i（2）Y Yi估計(jì)值相對(duì)偏差=100%x （3）Yi估計(jì)值（3）絕對(duì)偏差| = | Yi- Yj估計(jì)值| （4）式中：X 測(cè)定管溶液的理論濃度；Y 與測(cè)定管溶液濃度相對(duì)應(yīng)的實(shí)際測(cè)量值；i 1 2, 3,n；將稀釋濃度（xj代入線性回歸方程，計(jì)算出Yj的估計(jì)值，按公式（3）或（4）計(jì)算Yj與估計(jì)值的相對(duì)偏差 或絕對(duì)偏差。平均值20.3019.8019.70線性相對(duì)/絕對(duì)

7、偏差A(yù)2014002A2014003A201400410.600.500.6024.81%3.81%4.59%31.50%1.02%2.60%40.00%-0.24%0.75%5-0.80%-1.03%-0.12%在（0-80.00 ） U/L 線性范圍內(nèi),r 0.990。在（10.01-80.00 ）U/L范圍內(nèi)的相對(duì)偏差不超過(guò)15%測(cè)疋纟口果（0-10.00）U/L時(shí)絕對(duì)偏差不超過(guò)1.50 U/L。35測(cè)量精密度3.5.1 重復(fù)性在重復(fù)性條件下，用控制物質(zhì)測(cè)試試劑（盒），重復(fù)10 次，按公式（5），公式（6）計(jì)算其變異系數(shù)在重復(fù)性條件下，用控制物質(zhì)測(cè)試試劑（盒），重復(fù)10 次，按公式（5）

8、，公式（6）計(jì)算其變異系數(shù)（CV ）。X2CV(%)弋 1%（6）式中：X 系列測(cè)定值;x -測(cè)定均值；n -測(cè)定次數(shù);S 標(biāo)準(zhǔn)差。批號(hào)A2014002A2014003A2014004125.139.924.539.525.240.6224.739.624340.724.540.6325242.12514024.13942439224239325.142352440.82541.424.5425624541.82442.324.840.3724.840.423.839.424.839.1825141.724.941.624739.6924.13952540.124.440.21024.440.

9、22441.124.240.8平均值24.5940.5224.4840.5424.6340.50S0.46301.04010.48721.03840.35921.1785CV( %1.88%2.57%1.99%2.56%1.46%2.91%結(jié)果判斷合格合格合格合格合格合格標(biāo)準(zhǔn)要求CVC 5%352批間差檢測(cè)的均值為：人(i=1 , 2, 3)，按公式,公式(8)計(jì)算其相對(duì)偏差(R)。計(jì)算公式用控制物質(zhì)分別測(cè)試3個(gè)不同批號(hào)的試劑(盒)，每個(gè)批號(hào)測(cè)試3 次 ， 分 別 計(jì) 算 每 批 3 次X; 63ER XmaxXmin 100 % (8)Xt式中：Xmaxx中的最大值；xminx中的最小值;3

10、批試劑檢測(cè)均值。批號(hào)A2014002X1A2014003批號(hào)A2014002X1A2014003X2A2014004X31.22%1.22%RW10%124.424.424.8224.823.924.432424.924.9平均值124.40平均值224.40平均值3247024.5平均值R標(biāo)準(zhǔn)要求3.6 準(zhǔn)確度取參考物質(zhì)測(cè)試試劑（盒），重復(fù)3 次，取平均值，按照公式（9）并計(jì)算相對(duì)偏差相對(duì)偏差（ ）=測(cè)得的均值一參考物質(zhì)靶值參考物質(zhì)靶值100%（）批號(hào)靶值范圍測(cè)定平均值不準(zhǔn)確度是否在控A201400224.624.4-0.81%在控A201400324.4-0.81%在控A201400424.70.41%在控A201400239.841.23.52%在控A201400339.3-1.26%在控A201400441.64.52%在控標(biāo)準(zhǔn)要求