抗凋亡基因Bag1和Bcl2在結(jié)腸癌組織的表達(dá)及相互關(guān)系的研究

1、抗凋亡基因Bag-1和Bcl-2在結(jié)腸癌組織的表達(dá)及互相關(guān)系的研究【摘要】目的：研究抗凋亡基因Bag-1和Bl-2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及意義，并討論二者之間的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)SAB法鏈霉親合素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法對128例結(jié)腸癌組織及20例正常結(jié)腸組織中Bag-1和Bl-2基因的表達(dá)進(jìn)展檢測。結(jié)果：Bag-1和Bl-2在結(jié)腸癌中的表達(dá)與結(jié)腸癌病理類型、腫瘤直徑、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，但Bag-1與病理分級、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、Dukes分期及預(yù)后親密相關(guān)P0.05,而Bl-2與這幾項臨床病理因素?zé)o明顯相關(guān)性P0.05；Bag-1和Bl-2在結(jié)腸癌的發(fā)生開展過程中呈正相關(guān)r=0

2、.475。結(jié)論：結(jié)腸癌組織中有不同程度的Bag-1和Bl-2蛋白的高表達(dá)，兩者互相作用并可以作為結(jié)腸癌早期挑選的一項指標(biāo)，對疾病的預(yù)后有重要意義?！娟P(guān)鍵詞】大腸腫瘤Bag-1Bl-2細(xì)胞凋亡【ABSTRAT】bjetive:TinvestigatetheexpressinsfBag-1andBl-2inlretalanerandevaluatethEirlinialsignifiane.ethds:Bag-1andBl-2expressinserestudiedbyiunhistheialStreptavidin-Bitin-Perxidaseplex(SAB)ethdin64saplesfl

3、retalanertissues,10nrallretaltissues.Results:Bag-1aspsitivelyrelatedttheturgrade,distantetastasis,stagesfDukesandprgnsis,butasntrelatedtthepathlgialelltypes,turdiaeter,depthfinvasinandlyphndeetastasis.Bl-2as結(jié)腸癌是人類胃腸道最常見的惡性腫瘤之一，且發(fā)病率有逐年上升的趨勢。細(xì)胞凋亡障礙是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一，目前研究說明凋亡是一個受多基因控制的過程1。Bag-1是最近發(fā)現(xiàn)的一種多功能結(jié)合蛋

4、白，具有與抗凋亡基因Bl-2互相結(jié)合、互相影響從而促進(jìn)細(xì)胞抗凋亡的才能1-4。Bag-1在腫瘤發(fā)生開展中的作用已成為國內(nèi)外研究的熱點問題之一。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測Bag-1和Bl-2在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況，并就其臨床意義及互相關(guān)系進(jìn)展初步討論。1資料與方法1.1一般資料搜集2022年1月2022年12月手術(shù)切除的結(jié)腸癌石蠟包埋組織塊128例，為華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院病理科存檔標(biāo)本91例和山東大學(xué)第二附屬醫(yī)院病理科存檔標(biāo)本37例，均經(jīng)4%多聚甲醛灌注固定，常規(guī)石蠟包埋連續(xù)切片，厚約5。年齡3774歲。按世界衛(wèi)生組織H病理分級，腺癌92例其中高分化腺癌36例，中分化36例，低

5、分化20例，黏液癌20例，未分化癌16例。按Dukes臨床病理分期，A期44例，B期38例，期28例，D期18例。同時選擇20例正常結(jié)腸組織石蠟標(biāo)本作為對照組。1.2實驗試劑主要試劑有兔抗人多克隆Bag-1抗體美國Santaruz公司，兔抗人Bl-2抗體和鏈霉親合素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物SAB免疫試劑盒北京中山生物制品公司。1.3實驗方法采用常規(guī)SAB法按試劑盒說明書方法測定Bag-1和Bl-2的表達(dá)，抗Bag-1的工作濃度1：50，生物素化單抗和SAB試劑的工作濃度均為1：100。石蠟組織連續(xù)切片5，載玻片防脫片處理，常規(guī)脫蠟至水。石蠟切片經(jīng)熱抗原修復(fù)，滴加正常山羊血清封閉，室溫20in

6、，滴加1：50抗Bag-1或Bl-2抗體，4孵育過夜，次日滴加生物素化山羊抗兔IgG，203720in，再滴加SAB試劑，203720in，PBS清洗5in4次，3-3-二氨基聯(lián)苯胺-4鹽酸鹽DAB室溫顯色20in，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。以PBS代替一抗作陰性對照，以陽性反響片作陽性對照。1.4斷定標(biāo)準(zhǔn)Bag-1和Bl-2皆以細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核棕黃色為陽性。隨機(jī)觀察5個視野，計算其平均數(shù)，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞。Bag-1陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞數(shù)10%為低表達(dá)，10%30%為中度表達(dá)，30%為高表達(dá)；Bl-2陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞數(shù)30%為低表達(dá)，30%50%為中度表達(dá)，50%為高表達(dá)。1.5統(tǒng)

7、計學(xué)方法應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)展數(shù)據(jù)分析，陽性表達(dá)率比擬用2檢驗，Bag-1與Bl-2的關(guān)系采用相關(guān)系數(shù)r分析。P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1Bag-1與Bl-2在結(jié)腸癌組織表達(dá)2.1.1Bag-1的表達(dá)Bag-1的免疫組織化學(xué)染色分為不表達(dá)、細(xì)胞質(zhì)表達(dá)、細(xì)胞核表達(dá)和在二者同時表達(dá)4種形式。大局部表達(dá)在細(xì)胞核，小局部表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，染色強(qiáng)弱不等。Bag-1在正常組織中陽性表達(dá)率為10%2/20，結(jié)腸癌組織的陽性表達(dá)率為64.1%82/128，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義0.05，圖1。2.1.2Bl-2的表達(dá)Bl-2蛋白的表達(dá)部位主要在細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)，呈灶性或彌漫性分布

8、。正常組織中Bl-2蛋白陽性表達(dá)率為10%2/20，主要在細(xì)胞核呈灶性分布；結(jié)腸癌組織中Bl-2蛋白表達(dá)陽性率為70.3%90/128，在細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)呈灶性或彌漫性分布圖2。結(jié)腸癌組織中Bl-2蛋白表達(dá)明顯高于正常組織，二者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義0.05。2.1.3Bag-1與Bl-2的互相關(guān)系結(jié)腸癌標(biāo)本中Bag-1和Bl-2均陽性表達(dá)54例，均陰性表達(dá)14例，對結(jié)腸癌標(biāo)本中Bag-1與Bl-2蛋白的平均陽性表達(dá)數(shù)進(jìn)展分析，r=0.475，二者成正相關(guān)。2.2Bag-1和Bl-2表達(dá)與結(jié)腸癌病理類型的關(guān)系Bag-1蛋白在腺癌中陽性率為63.0%58/92，在黏液癌中陽性率為70.0%14/20

9、，在未分化癌中陽性率為62.5%10/16，三者比擬差異無統(tǒng)計學(xué)意義0.05；Bl-2蛋白在腺癌中陽性率為71.1%64/92，在黏液癌中陽性率為80.0%16/20，在未分化癌中陽性率為62.5%10/16，三者比擬差異無統(tǒng)計學(xué)意義0.05，表1。2.3Bag-1和Bl-2的表達(dá)與結(jié)腸癌病理分級的關(guān)系在高分化、中分化和低分化腺癌中Bag-1蛋白陽性表達(dá)率分別為33.3%12/36、77.8%28/36和90.0%18/20，三者之間比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義0.05；在相應(yīng)的高、中、低分化腺癌標(biāo)本中，Bl-2的陽性表達(dá)率分別為72.2%26/36、83.3%30/36和80.0%16/20,三者之

10、間差異無統(tǒng)計學(xué)意義0.05，見表1。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4Bag-1和Bl-2的表達(dá)與結(jié)腸癌Dukes分期的關(guān)系本研究結(jié)腸癌Dukes分期為A、B、和D期標(biāo)本中Bag-1蛋白陽性表達(dá)率分別為27.2%12/44、73.7%28/38、85.7%24/28和100%18/18，各期間比擬差異有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05;在相應(yīng)的各期標(biāo)本中，Bl-2的陽性表達(dá)率分別為68.18%30/44、68.42%26/38、71.42%20/28和77.78%14/18，三者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義0.05，表2。2.5Bag-1和Bl-2的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系本研究患者均獲隨訪，按5年生存率分組，術(shù)后存活超過5年

11、84例，Bag-1蛋白在兩組標(biāo)本中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05；Bl-2蛋白的表達(dá)與患者的預(yù)后無明顯相關(guān)性(P0.05，見表2。3討論Bag-1基因是1995年首先報道的一種抗凋亡基因，其分泌蛋白是一種已經(jīng)被確認(rèn)的多功能結(jié)合蛋白，它不屬于Bl-2家族成員，但可與之互相結(jié)合、互相作用，增強(qiáng)其抗凋亡的才能1-4。Bag-1在正常組織中幾乎不表達(dá)，而在乳腺癌、肺癌、前列腺癌、甲狀腺癌及胃腸道惡性腫瘤中都有陽性表達(dá)5-6，Naishir等7報道Bag-1可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。有研究說明在結(jié)腸癌標(biāo)本中Bag-1細(xì)胞核表達(dá)陽性的患者其伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的概率要高于胞核表達(dá)陰性的患者，且5年生存率要明

12、顯低于其他患者8-9。本研究說明Bag-1在結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)明顯高于正常組織，且Bag-1蛋白在結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均陽性表達(dá)，可能與本研究所用的多克隆Bag-1抗體可以同時作用于存在于細(xì)胞質(zhì)的短蛋白分子Bag-1S和存在于細(xì)胞核的長蛋白分子Bag-1L有關(guān)8。本研究還顯示Bag-1的表達(dá)與結(jié)腸癌組織的細(xì)胞類型無關(guān)，與結(jié)腸癌的病理分級親密相關(guān)，病理分級越高，其陽性表達(dá)率也越高。Bag-1的表達(dá)在腫瘤的直徑、漿膜浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理因素方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義，與腫瘤的Dukes分期、是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及5年生存率呈明顯相關(guān)，腫瘤的臨床分期越晚，Bag-1表達(dá)陽性率越高，患者預(yù)后越差

13、，說明Bag-1在腫瘤的發(fā)生開展分化過程中都起重要的作用，對Bag-1的深化研究可能對結(jié)腸癌的早期診斷及預(yù)后產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響。Bl-2是一種抗凋亡基因，通過抑制細(xì)胞凋亡而參與腫瘤的發(fā)生，在乳腺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤研究中Bl-2與腫瘤的分級、分期及預(yù)后無關(guān)，但也有研究認(rèn)為Bl-2的表達(dá)與腫瘤的分級、分期及預(yù)后有關(guān)10-12，可能與應(yīng)用不同的免疫組織化學(xué)方法、抗體及各地的實驗室條件不同有關(guān)。本研究說明Bl-2在影響結(jié)腸癌各種臨床病理因素中陽性表達(dá)率都很高，提示Bl-2的表達(dá)與結(jié)腸癌的各種臨床病理因素沒有明顯相關(guān)性，Bl-2可能參與結(jié)腸癌的發(fā)生過程，但與腫瘤的開展分化無明顯相關(guān)性。Bag-1

14、基因是一個正調(diào)節(jié)Bl-2抗細(xì)胞凋亡的蛋白，Bag-1基因并非Bl-2家族成員的同源物，但其啟動子區(qū)與Bl-2具有高度同源性，兩者可以形成復(fù)合物，并互相作用，從而增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡的才能，其作用機(jī)制可能與影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性有關(guān)3，10，12。本研究發(fā)如今結(jié)腸癌組織中Bag-1與Bl-2的陽性表達(dá)成正相關(guān)，提示結(jié)腸癌的發(fā)生開展是由多基因調(diào)控的，其中Bag-1與Bl-2基因在其發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，且具有互相增強(qiáng)的作用。探究Bag-1與Bl-2基因在結(jié)腸癌發(fā)生開展過程中的作用，對結(jié)腸癌的早期診斷和指導(dǎo)治療有著重要的意義?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1Shu-hingTang.Bag-1,Ananti-appttitu

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