維生素類藥物分析(5)課件

1、關于維生素類藥物的分析 (5)第一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月基 本 要 求一、掌握維生素類藥物的結構特點與分析方法之間的關系。二、掌握維生素類藥物的鑒別原理與方法。三、掌握三點校正法測定維生素A的原理、測定方法與計算方法。四、掌握維生素D的HPLC含量測定法和維生素E的GC含量測定法。五、掌握維生素B1非水溶液滴定法與維生素C碘量法的測定原理、方法與注意事項。六、熟悉本類藥物其他的含量測定方法。七、熟悉本類藥物雜質檢查方法。八、了解維生素A三點校正法的推導過程。返 回第二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月概 述維生素： 是維持人體正常代謝機能所必需的 微量營養(yǎng)物

2、資。 人體不能合成維生素。第三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 VitA、D2、D3、 E、K1 等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解度分返 回第四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月-H 維生素A醇-COCH3 維生素A醋酸酯-COC15H31 維生素A棕櫚酸酯R :第一節(jié) 維生素A第五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月為一個具有共軛多烯側鏈的 環(huán)己烯（一）結構與性質一、 具有UV吸收 存在多種立體異構化合物第六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月VitA2VitA3 易發(fā)生脫氫、脫水

3、、聚合反應第七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月鯨醇第八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 或有金屬離子存在時氧化共軛多烯側鏈 易被氧化（二）第九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月環(huán)氧化物VitA醛VitA酸第十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三氯化銻反應（一）條件 無水無醇CHCl3 鑒別試驗二、第十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月藍色紫紅第十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（BP（2000）max為326nm一個吸收峰UV法（二）max為350390nm三個吸收峰第十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022

4、年6月去水VitA（VitA3）VitA第十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月USP 顯色劑 磷鉬酸 規(guī)定斑點顏色和Rf值BP 雜質對照品法 顯色劑 三氯化銻TLC法（三）第十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月立體異構體氧化降解產物合成中間體UV法（一）含量測定三、維生素A2維生素A3環(huán)氧化物維生素A醛維生素A酸第十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三點校正法（法定方法）1. 原理：（1）雜質的吸收在310340nm波長范圍內呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減??；（2）物質對光的吸收具有加和性。第十八

5、張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 波長的選擇：（1） 1 VitA的max（328nm）（2） 2 3 分別在1的兩側各選一點第十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月測定對象 VitA醋酸酯第一法 等波長差法= 12nm第二十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二法 等吸收比法測定對象 VitA醇1=325nm, 2=310nm, 3=334nm第二十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月測定法（1）基本步驟:第一步 A的選擇選擇依據：所選A值中雜質的干擾已基本消除第二十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月注意： C 為混合樣品的

6、濃度 第二步 求第二十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三步 求效價換算因數由純品計算而得：第二十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第四步：求標示量第二十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 方法：（2） 第一法維生素A醋酸酯第二十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 判斷 是否在326329nm之間在326329nm之間改用第二法是否 求算 并與規(guī)定值比較第二十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 規(guī)定值 差值第三十張，

7、PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 判斷差值是否超過規(guī)定值的有一個以上超過無超過 計算 A328（校正） 用A328計算第三十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月03%15%3%第二法第二法第三十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月討 論VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數法）推導而來；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（幾何法或稱6/7定位法）推導而來。在應用三點校正法時，除其中一點在最大吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側進行測定。在測定前務必要校正波長。測定的樣品應不得少于兩

8、份。第三十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 VitAD膠丸中VitA的含量測定 精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項下（平均裝量0.07985g/丸）的內容物 0.1287g 至10ml燒杯中，加環(huán)己烷溶解并定量轉移至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為第三十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月A300 ：0.374A316 ：0.592A328 ：0.663A340 ：0.553A360 ：0.22

9、8A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 求本品中維生素A占標示量的百分含量？第三十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月A300 /A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.834A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =A328(校正) = 3.52 ( 2A328 - A316 -

10、 A340 ) =3.52 ( 20.663 0.592 0.553 ) =0.637第三十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月A328(校正) A328(實測)A328(實測)100 =0.637 0.6630.663100= -3.92E1%1cm( 328nm ) =A328(校正)100ms/D=0.6371000.1287/1250= 61.87第三十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月供試品中維生素A效價= E1%1cm( 328nm )1900= 61.87 1900 =117553（IU/g ）標示量% =VA效價(IU/g) 每丸內容物平均裝量(g/丸

11、)標示量( IU/丸)100%=1175530.0798510000100%= 93.9%第三十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月適用于維生素A醇（等吸收比法） 第一法無法消除雜質干擾時用此法 皂化法、6/7A法 （3）第二法第四十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月水溶性脂溶性第四十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 判斷max是否在323327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定 計算是否第四十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 判斷 A300 /A325 是否大于0.73是否取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定 計算A325(校正)

12、第四十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月03%3%第四十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三氯化銻比色法（二）優(yōu)點 簡便 快速max 618nm620nm標準曲線法缺點呈色不穩(wěn)定 （5 10s內）水分干擾與標準曲線溫差1專屬性差三氯化銻有腐蝕性（二）藍色+3SbClVitA返 回第四十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 維生素D維生素D2一、結構與性質第四十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月維生素D3第四十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月開環(huán)的甾體：具有甾類化合物

13、的顯色反應，可用于鑒別。手性碳原子：具有旋光性，可用于鑒別。多烯：可進行紫外檢測。第四十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、鑒別試驗1. 顯色反應醋酐-硫酸反應 D2 黃 紅 紫 綠 D3 黃 紅 紫、藍綠 綠 三氯化銻反應 橙紅色漸變粉紅三氯化鐵反應 橙黃色二氯丙醇和乙酰氯反應 綠色第五十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 比旋度鑒別維生素D2維生素D3溶 劑 濃 度 比旋度值無水乙醇無水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5+107.5+105+112注意事項：應于容器開啟30分鐘內取樣， 在溶液配制后30分鐘內測定。第五十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)

14、作于2022年6月 3.區(qū)別反應： 以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸，D2顯紅色，在570nm處有最大吸收，D3顯黃色，在495nm處有最大吸收。 4.其他方法： TLC、HPLC、制備衍生物測熔點第五十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、雜質檢查維生素D2中麥角甾醇的檢查：加洋地黃皂苷溶液，混合，放置18h不得發(fā)生渾濁或沉淀。前維生素D的光照產物第五十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月四、含量測定方法 中國藥典（2000年版）采用正相高效液相色譜法測定維生素D的含量，定量方法為內標法，內標物為鄰苯二甲酸二甲酯，該法分為三個方法。固定相：硅膠流動相：正己烷-

15、正戊醇（997：3）第五十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第一法：用于無維生素A醇及其它雜質的干擾的情況，步驟如下：1系統(tǒng)適用性試驗：測定重復性和分離度。第五十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 2測定校正因子： A S /m S f1 = - A r /m r f2 =（A S m r- f1 m S A r1）/（A r1 m S） 3含量測定： mi=（f1 Ai1+ f 2 A i2）m S /A S第五十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二法：用于有雜質的干擾的情況，步驟如下：1皂化處理：皂化、乙醚提取、洗滌提取液、蒸除乙 醚、制備供試液

16、A。2凈化：供試液A經液相色譜分離，準確收集含有維 生素D及前維生素D混合物的全部流出液，制 備成供試液B。 固定相：ODS 流動相：甲醇-乙腈-水（50：50：2） 3含量測定：取供試液B按第一法測定。第五十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三法：用于經第二法處理后仍有雜質的干擾的情況。步驟如下：1制備供試液：取供試液A，凈化，水浴加熱，得供 試液C。 制備對照液：對照品儲備液：稀釋、加熱。2含量測定：在第一法的色譜條件下，交替精密進樣 對照液和供試液，按外標法定量。返 回第五十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月苯并二氫吡喃醇第三節(jié) 維生素E 第五十九張，PPT

17、共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月名 稱R1R2相對活性-生育酚-生育酚 -生育酚 -生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1*第六十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月dl生育酚醋酸酯第六十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月結構與性質一、苯環(huán) + 二氫吡喃環(huán) + 飽和烴鏈1、UV2、乙酰化的酚羥基 易水解O醌型化合物生育酚-+or OHHVitE雜質，需檢查第六十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月O生育紅（一）硝酸反應橙紅色鑒別二、7515HNO3VitE生育酚第六十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（橙紅色）生育紅

18、生育酚HNO3強氧化劑第六十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三氯化鐵聯(lián)吡啶反應（二）第六十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月生育酚對-生育醌O弱氧化劑第六十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月血紅色第六十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 = 41.045.5max = 284nmmin = 254nm0.01%無水乙醇中UV法（三）第六十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月薄層板 硅膠G展開劑 環(huán)己烷 -乙醚（4 ：1）顯色劑 硫酸（105 5） VitE Rf = 0.7-生育酚 Rf = 0.5-生育醌 Rf = 0.9

19、TLC法（四）第六十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 游離生育酚 雜質檢查 三、原理酸度 以NaOH滴定液（0.1mol/L）體積控制。第七十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（M生育酚= 430.8）例 取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過 1.0ml。第七十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.15限量第七十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月四、含量測定GC法（法定方法）（一）GC特點1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發(fā)性低、

20、不穩(wěn)定、極性強衍生化易受樣品蒸氣壓限制第七十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月載氣N2固定液硅酮（OV-17）擔體硅藻土或高分子多孔小球柱溫265檢測器氫火焰離子化檢測器(FID)內標正三十二烷 n 500 R2VitE測定的色譜條件2、內標法加校正因子第七十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月內標法供試液（樣品+內標）內標物對照液（對照+內標）是樣品中不存在的物質與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近第七十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月校正因子：第七十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月WWKK%VitE%10012=稀釋

21、倍數稀釋倍數樣對實際工作中的計算方法第七十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）HPLC法 外標法 此外，還有鈰量法、比色法和熒光法返 回第七十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿)第四節(jié) 維生素B1HClCl-第七十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共軛雙鍵max = 246nm結構與性質一、第八十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月與生物堿（三）硫色素反應（四）嘧啶環(huán) 噻唑環(huán) （五）鹽酸根 呈氯化物的反應，用于鑒別。第八十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于20

22、22年6月ChP鑒別試驗二、（一）硫色素反應第八十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第八十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月硫色素2H第八十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應第八十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月S元素反應Cl-反應（三）其他反應()21PbSNaSVitBNO3PbNaOH第八十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、含量測定喹那啶紅亞甲藍（紫紅天藍）（一）非水溶液滴定法第八十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月反應摩爾比為1：2第八十八張，PPT共一百二

23、十八頁，創(chuàng)作于2022年6月UV法（二）第八十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月片劑、注射劑= 421（每片）相當于標示量的%=A = ECL規(guī)格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011%100標示量平均片重第九十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（每ml）相當于標示量的%=規(guī)格g/mlml%VEA%cm100110011標示量稀釋倍數第九十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）硫色素熒光法原理1、熒光硫色素異丁醇鐵氰化鉀1VitBNaOH第九十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月特點2、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產物

24、不干擾，適用于 體液分析第九十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第五節(jié) 維生素CL抗壞血酸第九十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1、易溶于水2、水溶液呈酸性結構與性質一、（一）溶解性第九十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二烯醇結構二酮基結構二烯醇結構（二）還原性第九十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月有活性有活性無活性第九十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月糖類的顯色反應50結構與糖類相似（三）具糖的性質第九十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月C3OH的pKa = 4.17C2OH的pKa = 11.57酸

25、性（四）一元酸第九十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月L(+)抗壞血酸活性最強手性C（C4、C5）（五）光學活性*第一百張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月與堿反應（六）水解性第一百零一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第一百零二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月與氧化劑的反應（一）鑒別試驗二、去氫抗壞血酸OVitC第一百零三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1、與AgNO3反應2、與2，6 - 二氯靛酚反應(ChP2000)氧化型玫瑰紅色還原型藍色(ChP2000)第一百零四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（玫瑰色）（

26、無色）第一百零五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3.其他氧化劑的反應：亞甲藍或高錳酸鉀 試劑褪色堿性酒石酸銅 磚紅色沉淀磷鉬酸 鉬藍第一百零六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月糖類的反應（二）或鹽酸50吡咯USP第一百零七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第一百零八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（藍色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)第一百零九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月UV（三）BP0.01mol/L HCl第一百一十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、雜質檢查 1.溶液的澄清度與顏色：有色雜質 分光光度法2.

27、鐵、銅離子：原子吸收分光光度法第一百一十一張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月指示劑 淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量測定四、第一百一十二張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月H+第一百一十三張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6。方法2、第一百一十四張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）酸性環(huán)境 d . HCl （2

28、）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度討論3、（3）立即滴定 趕走水中O2減少O2的干擾第一百一十五張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（4）附加劑干擾的排除片劑 滑石粉 過濾注射劑 抗氧劑 丙酮甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5 第一百一十六張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a第一百一十七張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2，6 - 二氯靛酚鈉滴定法法（二）USPJP原理1、酚亞胺二氯靛酚，-62VitC第一百一十八張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月自身指示終點法方法2、第一百一十九張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）快速滴定 2min內 （1）酸性環(huán)境 HPO3-HAc 穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質干擾（3）剩余比色測定 （定量過量）（測剩余染料）討論3、第一百二十張，PPT共一百二十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（4）缺點 需經常標定貯存一周不穩(wěn)定干擾多 氧化力較強第一百二十一