細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)一課件

1、細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)一 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒁?、?shí)驗(yàn)室規(guī)則The purpose, requirement and regulations of experiments in lab Experimental Objective 實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證課堂所講的理論，以使學(xué)生加深和鞏固對課堂所講的內(nèi)容的理解和體會通過實(shí)驗(yàn)使同學(xué)掌握醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的基本技能，樹立無菌觀念，為臨床及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)有關(guān)科學(xué)打好基礎(chǔ)培養(yǎng)學(xué)生獨(dú)立工作能力和科學(xué)思維的工作方法Experimental Requirement 實(shí)驗(yàn)要求每次實(shí)驗(yàn)前務(wù)必作好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)的目的、內(nèi)容、操作中注意事項(xiàng)及其理論依據(jù)等，避免或減少錯誤的發(fā)生。在實(shí)驗(yàn)過

2、程中，要堅(jiān)持嚴(yán)肅性、嚴(yán)格性和嚴(yán)密性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須真實(shí)地記錄下來，然后進(jìn)行分析，得出結(jié)論。Lab Rules 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則除必要的文具、實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、筆記本等外，與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品不要帶入實(shí)驗(yàn)室。進(jìn)實(shí)驗(yàn)室必須穿上實(shí)驗(yàn)衣，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食。若發(fā)生病原微生物污染實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)立即向老師報(bào)告。吸過或沾有細(xì)菌的吸管要放入指定的玻璃筒內(nèi)，用過的載玻片亦放入指定的玻璃缸中，其他帶菌物品亦放入指定地點(diǎn)，不可隨便亂放。實(shí)驗(yàn)前后要檢查所用器材，如有損壞或缺少時應(yīng)立即報(bào)告老師。實(shí)驗(yàn)過程中隨時整理桌面，實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)確歸位。需要培養(yǎng)的物品放入指定容器內(nèi)，值日生清潔實(shí)驗(yàn)室，其他同學(xué)洗手后離開實(shí)驗(yàn)室。2.顯微鏡使用（油鏡）細(xì)菌的基本形態(tài)

3、The basic shape of bacterium球菌 coccus桿菌 bacilli弧菌 vibrio球菌 （鏈球菌）桿菌（大腸桿菌） 弧菌（霍亂弧菌） 方法：標(biāo)本 初染（結(jié)晶紫 1-3分鐘）媒染（盧戈氏碘液 3060秒 脫色（95%酒精 35秒） 復(fù)染（沙黃 90秒） Gram stain 革蘭染色陽性positive（紫蘭色）陰性negative（紅色）干燥、固定油鏡鏡檢注意：使用完酒精燈后，請隨時將酒精燈火焰撲滅！流水沖洗流水沖洗流水沖洗流水沖洗具體的步驟方法細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備：標(biāo)本的制作: 1.涂片 2.干燥 3.固定操作步驟（continued） 2. 初染滴加結(jié)晶紫染色1

4、-3分鐘，流水沖洗,并輕輕甩干。3. 媒染用碘液覆蓋30-60秒，流水沖洗，輕輕甩干。操作步驟（continued） 4. 脫色將玻片插入酒精缸，上下來回2-3次，直至玻片滴出來的酒精無紫色時，立即流水沖洗。Notes: 乙醇脫色時間是關(guān)鍵環(huán)節(jié): 脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌； 脫色過度，陽性菌被誤染成陰性菌。 脫色時間一般為3-5s左右。操作步驟（continued） 5. 復(fù)染用沙黃復(fù)染約60-90秒，流水沖洗。6. 鏡檢干燥后，用油鏡觀察。大腸桿菌葡萄球菌 細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)2. 等電點(diǎn)3. 細(xì)胞內(nèi)含核糖核酸鎂鹽革蘭染色原理G-菌的肽聚糖(peptidoglycan)結(jié)構(gòu) G-菌由glycan backbone 、tetrapeptide side chain兩部分組成丙MGGGDAPMG丙丙丙谷谷DAP菌體結(jié)構(gòu)和成分 G+菌 G-菌 染色過程中差 細(xì)胞壁 脂質(zhì)少、肽聚 脂質(zhì)多、肽聚 乙醇脫色時，G+菌肽聚 糖層厚且交聯(lián)度 糖薄且交聯(lián)度小 糖孔徑變小，通透性下 大 降，保留初染顏色；G- 菌脂質(zhì)溶解，胞壁通透性 增加，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物 易于從菌體中洗脫 菌體pI 值 2-3 4-5 pH 相同時，G+菌帶負(fù)電 荷比G-菌多，易與帶正電 荷堿性染色劑（結(jié)晶紫） 發(fā)生牢固結(jié)合 核糖核酸鎂鹽 有 無 此物可與結(jié)晶紫-碘復(fù) 合物