免疫球蛋白宣講培訓課件

1、免疫球蛋白宣講免疫球蛋白宣講第二節(jié) 免疫球蛋白的結構一 、Ig的基本結構2免疫球蛋白宣講第二節(jié) 免疫球蛋白的結構一 、Ig的基本結構2免疫球蛋白宣（一）、重鏈和輕鏈 Ig的兩條長鏈稱為重鏈（Heavy chain, H鏈）, 含 450-550aa，分子量為50-75kD。 重鏈可分為、鏈 Ig的兩條短鏈稱為輕鏈（Light chain, L鏈） 含214aa，分子量為25kD。可分為和型。 IgM IgG IgA IgD IgE 3免疫球蛋白宣講（一）、重鏈和輕鏈 IgM IgG IgA （二）可變區(qū)和恒定區(qū) .可變區(qū)：重鏈和輕鏈靠近N端的約110個氨基酸的序列變化很大，稱為可變區(qū)（vari

2、able region,V區(qū)）； VH和VL 。2.恒定區(qū)：靠近C端的其余氨基酸序列相對穩(wěn)定，稱為恒定區(qū)(constant region, C區(qū))；CH（CH1、CH2、CH3和CH4 ）和CL.4免疫球蛋白宣講（二）可變區(qū)和恒定區(qū) 4免疫球蛋白宣講高變區(qū)（hypervariable region，HVR）： 氨基酸組成和排列順序特別易變化 VH或VL各3個高變區(qū)：HVR1、HVR2和HVR3骨架區(qū)（framework region,FR） 高變區(qū)之外的區(qū)域。 VH和VL各有四個骨架區(qū)， FR1、FR2、FR3和FR4表示。5免疫球蛋白宣講高變區(qū)（hypervariable region，HV

3、R）：互補性決定區(qū)（complementarity-determining region，CDR）： VH和VL的3個高變區(qū)共同組成Ig的抗原結合部位，故高變區(qū)又被稱為互補性決定區(qū)。6免疫球蛋白宣講互補性決定區(qū)（complementarity-determi（三）免疫球蛋白的功能區(qū)1定義：Ig的H鏈、L鏈每隔110個氨基酸由鏈內(nèi)二硫鍵接構成一個能行使特定功能的球形結構，稱為Ig的功能區(qū)。L鏈功能區(qū)：2個，（VL，CL各一個）H鏈功能區(qū)：IgG，IgA，IgD，4個（V區(qū)1個，C區(qū)3個）, IgM，IgE，5個（V區(qū)1個，C區(qū)4個）鉸鏈區(qū)：位于CH1、CH2之間。7免疫球蛋白宣講（三）免疫球蛋白

4、的功能區(qū)7免疫球蛋白宣講V區(qū)C區(qū)VL+VH區(qū)：抗原結合部位（2個）CH3區(qū)：是Ig與多種細胞Fc受體結合的部位.CL和CH 區(qū)：具有同種異型抗體的遺傳標記。（2個）CH2區(qū)：IgG的補體結合點和通過胎盤的部位2.功能區(qū)的作用鉸鏈區(qū)：賦予彈性和伸展性.8免疫球蛋白宣講V區(qū)C區(qū)VL+VH區(qū)：CH3區(qū)：是Ig與多種細胞Fc受體結合二、Ig的其他結構（一）連接鏈（J鏈）：富含半胱氨酸得多肽鏈 由漿細胞合成的一種糖蛋白。 IgA和IgM含有J鏈 可穩(wěn)定Ig多聚體的成份（二）分泌片 是分泌型IgA(sIgA）的一個輔助成分， 為一種糖肽，由粘膜上皮細胞合成和分泌。 介導IgA二聚體的轉運 保護sIgA的鉸

5、鏈區(qū)免受蛋白酶的水解破壞 9免疫球蛋白宣講二、Ig的其他結構9免疫球蛋白宣講 J 鏈分泌片sIgA10免疫球蛋白宣講 J 鏈分泌片sIgA10免疫球蛋白宣講11免疫球蛋白宣講11免疫球蛋白宣講三 Ig的酶解片斷1.木瓜蛋白酶 2個Fab 段：結合抗原 1個Fc段：結合細胞2.胃蛋白酶F(ab)段:雙價抗體活性pFc段：無生物學活性12免疫球蛋白宣講三 Ig的酶解片斷1.木瓜蛋白酶12免疫球蛋白宣講第三節(jié)免疫球蛋白的生物學活性 11.特異性結合抗原,清除病原微生物 ； 2.激活補體（IgG、IgM）；13免疫球蛋白宣講第三節(jié)免疫球蛋白的生物學活性13免疫球蛋白宣講3與多種細胞表面Fc受體結合；（

6、1）調(diào)理作用（opsonization)：IgG、IgM指抗體促進吞噬細胞吞噬細菌等顆粒性抗原的作用。 （2）抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)：IgG、IgA、IgE指表達Fc受體的細胞（ NK細胞、吞噬細胞)通過與抗體Fc段結合直接殺傷被抗體包被的靶細胞。 （3）I型超敏反應：IgE 與肥大細胞、嗜堿性粒細胞Fc受體結合，促使其合成和釋放生物活性物質(zhì)。14免疫球蛋白宣講3與多種細胞表面Fc受體結合；14免疫球蛋白宣講四、穿過胎盤 IgG所獨有，是嬰兒獲得天然被動免疫的主要原因，主要借助胎盤滋

7、養(yǎng)層細胞表面的FcR進行的。五、免疫調(diào)節(jié) 15免疫球蛋白宣講四、穿過胎盤15免疫球蛋白宣講第三節(jié) 五類Ig的主要特性16免疫球蛋白宣講第三節(jié) 五類Ig的主要特性16免疫球蛋白宣講 一、IgG（一） 特性1、存在形式：單體，占血清Ig總量的3/4。2、合成時期：嬰兒出生后三個月開始合成。3、半衰期：23天，是所有抗體中半衰期最長的。（二） 生物活性1、是主要的抗感染抗體 2、是補體經(jīng)典激活途徑參與者。3、是唯一可以穿過胎盤的抗體4、具有調(diào)理作用和介導ADCC效應的功能。17免疫球蛋白宣講 一、IgG（一） 特性1、存在形式：單體，占血清IgIgG 分 子 的 四 種 亞 型IgG1IgG4IgG

8、3IgG2 四種亞類的IgG分子在血清中的濃度不同，所發(fā)揮的生物學特性亦不相同。18免疫球蛋白宣講IgG 分 子 的 四 種 亞 型IgG1IgG4IgG3二、IgM（一）特性1、存在形式：五聚體，占血清Ig總量的10%，是分子量最大抗體。 mIgM 是 BCR 2、合成時期：胎兒晚期已能合成，最早合成和初次免疫應答中最早出現(xiàn)的抗體。3、半衰期：5天，（三） 生物活性1、具有強大的調(diào)理、激活補體及殺菌作用 。3、不能介導ADCC效應。4、ABO血型天然抗體。19免疫球蛋白宣講二、IgM19免疫球蛋白宣講IgM J 鏈IgM 抗 體 結 構分 泌 型 IgM膜 型 IgMsIgM Iga Igb

9、 Iga Igb20免疫球蛋白宣講IgM J 鏈IgM 抗 三、IgA（一） 特性：1、存在形式：單體（血清型）和雙體（分泌型）；其中分泌型主要分布于呼吸道、消化道及初乳等分泌液中。2、合成時期：嬰兒在出生46個月才能合成IgA。（二） 生物活性1、是機體局部粘膜防御感染的重要因素（分泌型IgA）。2、具有中和毒素作用（血清型IgA）。3、輔助嬰兒抵抗呼吸道、消化道感染（初乳中含分泌型IgA） 21免疫球蛋白宣講三、IgA（一） 特性：1、存在形式：單體（血清型）和雙四、IgD（一） 特性1、存在形式：單聚體，僅占血清Ig總量的1%。2、合成時期：較晚。 3.半衰期：3天（二） 生物活性1、成

10、熟B細胞的重要表面標志。2、血清中IgD的功能尚不清楚。22免疫球蛋白宣講四、IgD（一） 特性1、存在形式：單聚體，僅占血清Ig五、IgE（一） 特性1、存在形式：單聚體，僅占血清Ig總量的0.002%。2、合成時期：最晚合成的抗體。（三） 生物活性1、引發(fā)型過敏反應。2、抗寄生蟲的主要抗體。23免疫球蛋白宣講五、IgE（一） 特性1、存在形式：單聚體，僅占血清Ig第四節(jié)Ig的基因及抗體的多樣性一、Ig的基因結構 1.Ig輕鏈基因結構（1）Ig 型輕鏈基因：V、J、C 小鼠：350 5 1 人：100 5 1（2）Ig型輕鏈基因：V、J、C 小鼠：2 4 4 人：2 6 624免疫球蛋白宣講

11、第四節(jié)Ig的基因及抗體的多樣性一、Ig的基因結構 24免疫2. Ig重鏈的基因結構 V、D、J、C小鼠：300-1000 20 4 8 人： 75-250 30 6 11 25免疫球蛋白宣講2. Ig重鏈的基因結構25免疫球蛋白宣講26免疫球蛋白宣講26免疫球蛋白宣講27免疫球蛋白宣講27免疫球蛋白宣講二、Ig基因重排由于Ig基因成簇存在，編碼完整的功能性Ig多肽鏈必須通過基因重排。 28免疫球蛋白宣講二、Ig基因重排28免疫球蛋白宣講重鏈胚系基因重鏈基因重排初始RNA轉錄mRNA新合成多肽29免疫球蛋白宣講重鏈胚系基因重鏈基因重排初始RNA轉錄mRNA新合成多肽29輕鏈基因的重排、RNA處理

12、和蛋白質(zhì)表達的過程30免疫球蛋白宣講輕鏈基因的重排、RNA處理30免疫球蛋白宣講(二)抗體多樣性機制: 1.組合多樣性：Ig基因庫中眾多V、D、J、C基因家族成員極端多樣性的排列組合；2.連接多樣性：基因重排過程中可出現(xiàn)不同的連接點； 3.體細胞突變：已成熟的B細胞受抗原刺激后，在發(fā)育過程中重排基因所發(fā)生的突變。4. L鏈H鏈相互隨機配對。31免疫球蛋白宣講31免疫球蛋白宣講多肽鏈基因片段數(shù)V區(qū)基因重組方式重排和隨機配對后推算的多樣性數(shù)目V D JH鏈1000 12 4V-D-J48000鏈250 - 4V-J1000小鼠Ig多樣性（舉例）32免疫球蛋白宣講多肽鏈基因片段數(shù)V區(qū)基因重組方式重排

13、和隨機配對后推算的多樣性第五節(jié) 抗體的應用免疫學檢測免疫學檢測是以特異性抗原-抗體反應為基礎的檢測方法。具有很高的靈敏度和能快速提供檢測結果等優(yōu)點。33免疫球蛋白宣講第五節(jié) 抗體的應用免疫學檢測免疫學檢測是以特異性抗原-抗原抗體反應的特點特異性抗原抗體反應的可見性適當?shù)谋壤蜐舛瓤赡嫘?4免疫球蛋白宣講抗原抗體反應的特點34免疫球蛋白宣講應 用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物的相應抗體以輔助診斷疾?。?傷寒病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體診斷自身免疫?。篠LE、類風濕性關節(jié)炎等。2、利用已知抗體檢測未知抗原（1）鑒定病原菌：診斷疾?。?）檢測腫瘤相關抗原：檢

14、測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原;35免疫球蛋白宣講應 用1、利用已知抗原檢測未知抗體（1）檢測病原微生物抗原或抗體的檢測方法 凝集反應沉淀反應免疫標記技術36免疫球蛋白宣講抗原或抗體的檢測方法 凝集反應36免疫球蛋白宣講 （一）凝集反應（agglutination） 顆粒性抗原（紅細胞、細菌等）與抗體特異性結合，形成肉眼可見的凝集塊。1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、試管凝集細菌的鑒定和血型的檢查一、 傳統(tǒng)免疫分析37免疫球蛋白宣講 （一）凝集反應（agglutination） 顆2、間接凝集（in

15、direct agglutination） 可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細胞表面，與相應 抗體混合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。檢測病原體可溶性抗原，病原體感染后產(chǎn)生的抗體38免疫球蛋白宣講2、間接凝集（indirect agglutination）（二）沉淀反應（precipitation） 可溶性抗原（免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等）與相應抗體結合， 形成不溶性免疫復合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色的沉淀。 免疫比濁法39免疫球蛋白宣講（二）沉淀反應（precipitation） 1、單向免疫擴散（single immunodiffusion）：可溶性抗原在含相應抗體的瓊

16、脂凝膠中進行的擴散，為一種半定量試驗。 環(huán)的直徑與抗原含量成正相關40免疫球蛋白宣講1、單向免疫擴散（single immunodiffusio2、雙向免疫擴散（doule immunodiffusion）：抗原與抗體在瓊脂板中相互擴散而形成一定類型的沉淀線的方法。常用于抗原或抗體的定性檢測、組成和兩種抗原相關性分析。一致部分一致不一致，有多種成分41免疫球蛋白宣講2、雙向免疫擴散（doule immunodiffusion3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。 1）簡易免疫電泳先將抗原樣品在瓊脂中進行電泳分離，可將蛋白質(zhì)

17、抗原分子分成不同的區(qū)帶，然后將抗血清加入瓊脂板橫槽中，使二者進行雙向擴散，當比例合適時即形成特異性的沉淀線， 42免疫球蛋白宣講3、免疫電泳（immunoelectrophoresis）常2）對流免疫電泳(counter immunoelectrophoresis, CIEP) 是將雙向免疫擴散與電泳相結合的一種技術43免疫球蛋白宣講2）對流免疫電泳(counter immunoelectro3）火箭免疫電泳(rocket immunoelectrophoresis)，抗原在電場下通過含有一定量抗體的瓊脂凝膠，并于抗體發(fā)生反應，形成沉淀帶?？啥糠治?。44免疫球蛋白宣講3）火箭免疫電泳(roc

18、ket immunoelectro 用標記物標記抗體或抗原進行抗原抗體反應借以提高免疫學診斷的敏感性熒光素 ：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、 羅丹明（紅色熒光）放射性同位素： 125I、131I酶：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶免疫熒光檢測法（IFA）放射免疫檢測法（RIA）酶免疫檢測法（EIA） 二、現(xiàn)代免疫分析-免疫標記技術45免疫球蛋白宣講 用標記物標記抗體或抗原進行抗原抗體反應借以提1抗體制備。多克隆抗體單克隆抗體，2標記物與標記方法。 放射性同位素、酶、熒光分子、化學和生物發(fā)光系統(tǒng)。免疫分析基本環(huán)節(jié) 46免疫球蛋白宣講1抗體制備。免疫分析基本環(huán)節(jié) 46免疫球蛋白宣講3分析方式設

19、計：非競爭方式、競爭方式；直接法、間接法；標記抗原、標記抗體；均相、非均相4.信號檢測。與相應的標記物對應。主要為分光光度法、熒光光度法、化學發(fā)光檢測法。47免疫球蛋白宣講3分析方式設計：非競爭方式、競爭方式；直接法、間接法； （一）、放射免疫分析 (Radioimmunoassay RIA) 利用放射性同位素的測量方法與免疫反應基本原理相結合的一種同位素分析技術。特點： 靈敏度高、特異性強、樣品用量少、標記物容易制備以及放射性強度容易檢測48免疫球蛋白宣講 （一）、放射免疫分析 (Radioi1.放射免疫分析必需的基本試劑：抗體：作為標記藥物和非標記藥物競爭結合的蛋白。標記藥物：提供可檢測的

20、信號(響應值)（放射性）。非標記藥物：在標準曲線制備時是藥物標準品，在樣品中則為被測藥物分離劑分離結合與游離部分49免疫球蛋白宣講1.放射免疫分析必需的基本試劑：49免疫球蛋白宣講結合相游離相2.基本原理：RIA是標記抗原和未標記抗原對有限量抗體的競爭性結合。50免疫球蛋白宣講結合相游離相2.基本原理：RIA是標記抗原和未標記抗原對有限標記藥物(S*)+抗體(Ab) 標記藥物-抗體復合物(S*-Ab) F* P-B* B* F*、B*分別是游離的和與抗體結合的標記藥物濃度，它們可通過產(chǎn)生的信號(如放射性、光吸收、熒光發(fā)射)強度反映出來(用儀器檢測)。51免疫球蛋白宣講51免疫球蛋白宣講 非標記

21、藥物（S） F +標記藥物(S*)+抗體(Ab) 標記藥物-抗體復合物(S*-Ab) F* P-B-B* B* 非標記藥物-抗體復合物(S-Ab) B隨著S的加入，它對S*同Ab的結合則起競爭抑制作用，表現(xiàn)為使B*減少、使F*增加，并且只要S加入一定量，便有對應的F*和B*信號強度值，因此可建立S量(濃度)與響應值(F*和B*的信號強度)之間的函數(shù)關系，作成劑量反應曲線。52免疫球蛋白宣講 非標記藥物（S）52免疫球蛋白宣免疫分析中各種競爭結合抑制曲線示意圖53免疫球蛋白宣講免疫分析中各種競爭結合抑制曲線示意圖53免疫球蛋白宣講54免疫球蛋白宣講54免疫球蛋白宣講3.標準曲線的繪制與樣品測定步

22、驟取標準抗原，用無放射活性的空白血清或血漿稀釋成58個系列濃度。加入定量標記抗原，其總放射性(T)應能滿足準確測量的需要。加入定量的已稀釋好的特異抗體，其抗體的量應滿足靈敏度的要求。將標準抗原、標記抗原、特異抗體與緩沖液混勻后，在適當條件下溫育，待反應平衡后測定總計數(shù)率(T)。55免疫球蛋白宣講3.標準曲線的繪制與樣品測定步驟取標準抗原，用無放射活性的空加入分離劑，使結合部分(B)與游離部分(F)分離。測定各管結合部分或游離部分的計數(shù)率。標準曲線通常以標準抗原(待測藥物標準品)的濃度為橫坐標，以結合率(B)為縱坐標作圖。 縱坐標B的計算：將與抗體結合的標記藥物的放射性強度(B)與加入的標記藥物

23、總放射性強度(T)比較，即B=(BT)100；56免疫球蛋白宣講加入分離劑，使結合部分(B)與游離部分(F)分離。56免疫球57免疫球蛋白宣講57免疫球蛋白宣講例：125IRIA(DCC沉淀法)測定血清中地高辛濃度 待測血清樣品50l樣品管中;含不同濃度地高辛標準品的血清50l標準曲線各管中;50l 空白人血清零標準管.各管中依次加入保溫液100l抗體溶液100l125I標記的地高辛(溶液)100l搖勻在室溫(1525)放置30min-計數(shù)器測定各管的總計數(shù)T(即加人的協(xié)I總放射性劑量)在電磁攪拌(或手搖)下，迅速向各管內(nèi)加人1ml工作液(全部加完控制在5min內(nèi))，搖勻離心10min(300

24、0r/min)傾去上清液-計數(shù)器測定各管中沉淀的計數(shù)F(游離協(xié)I地高辛放射性強度)計算出標準曲線各管和樣品各管的結合率。58免疫球蛋白宣講例：125IRIA(DCC沉淀法)測定血清中地高辛濃度 （二）酶免疫分析（enzyme immunoassay） 標記物為酶，酶本身并不能直接產(chǎn)生信號，必須要有其他試劑如底物、輔酶等的參與才能完成酶反應，從而引起吸收光譜等的變化供測定。 常用的酶為： 辣根過氧化物酶、堿性磷酸酯酶、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、-半乳糖苷酶。 59免疫球蛋白宣講 （二）酶免疫分析（enzyme immunoassay）5酶 底 物顯色反應 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺四甲替聯(lián)苯

25、胺氨基水楊酸鄰聯(lián)苯甲胺2,2-連胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)銨鹽 橘紅色黃色棕色蘭色藍綠色492460449425642堿性磷酸酯酶 4-硝基酚磷酸鹽(PNP)萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽 黃色紅色 400500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭 黃色深藍色 405420 -半乳糖苷酶 甲基傘酮基半乳糖苷(4MuG)硝基酚半乳糖苷(ONPG) 熒光黃色 360,450420 60免疫球蛋白宣講酶 底 物顯色反應 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺四甲1. 均相酶免疫分析，EMIT法（enzyme multipled immunoassay techni

26、que） 基本原理：酶標藥物與未標記藥物互相競爭有限量的抗體(Ab)，測定小分子抗原。 酶標抗原(AgE)同抗體(Ab)結合后，所形成的酶標抗原一抗體結合物(AgEAb)可使酶的活性發(fā)生改變(增強或減弱)； 可直接通過測定酶活性的變化，求出樣品含量的方法。61免疫球蛋白宣講1. 均相酶免疫分析，EMIT法（enzyme multip62免疫球蛋白宣講62免疫球蛋白宣講2.酶聯(lián)吸附免疫分析（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）屬于非均相免疫分析的代表，普遍應用于各領域。基本原理：是將過量抗體（抗原）包被于載體上，通過抗原抗體反應使酶標記抗體（抗原）也結

27、合在載體上，經(jīng)洗滌去除游離的酶標記抗體（抗原）后，加入底物顯色，定性或定量分析有色產(chǎn)物確定待測物的存在與含量的檢測技術。63免疫球蛋白宣講2.酶聯(lián)吸附免疫分析（enzyme-linked immun1）雙抗體夾心法方法：用已知抗體包被，加入待檢樣品，再加酶標抗體，加底物顯色應用： 二價或二價以上的較大分子抗原測定 如乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等64免疫球蛋白宣講1）雙抗體夾心法64免疫球蛋白宣講65免疫球蛋白宣講65免疫球蛋白宣講獲得待分析物的未標定抗體將特異性抗體與固相載體連接形成固相抗體 洗滌除去未結合的抗體及雜質(zhì) 加入封閉蛋白溶液以封閉載體表面殘留的蛋白結合位點洗滌并除去未結合的

28、封閉蛋白加受檢標本（抗原）形成固相抗體抗原復合物 洗滌除去其他未結合的物質(zhì) 加酶標抗體生成抗體待測抗原酶標記抗體的復合物 徹底洗滌未結合的 酶標抗體 加底物進行酶催化反應 根據(jù)顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量測定66免疫球蛋白宣講獲得待分析物的未標定抗體將特異性抗體與固相洗滌除去未結合的加2）間接法方法：利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相上抗原結合的受檢抗體應用： 常用于HCV抗體、HIV抗體和梅毒螺旋體抗體等的測定67免疫球蛋白宣講2）間接法67免疫球蛋白宣講68免疫球蛋白宣講68免疫球蛋白宣講包被反應加入待測抗體或抗原和酶標抗原或抗體123）競爭法方法：用已知抗體包被，加入待測血清，再加

29、酶標抗原，酶標抗原與待檢物競爭與包被物結合。加底物顯色。 應用：用于只有一個抗原決定簇的小分子半抗原（藥物、激素等）69免疫球蛋白宣講包被反應123）競爭法方法：用已知抗體包被，加入待測血清，70免疫球蛋白宣講70免疫球蛋白宣講ELISA試劑盒71免疫球蛋白宣講ELISA試劑盒71免疫球蛋白宣講72免疫球蛋白宣講72免疫球蛋白宣講（三）膠體金免疫快速檢測法1.雙抗體夾心法-大分子抗原 73免疫球蛋白宣講（三）膠體金免疫快速檢測法1.雙抗體夾心法-大分子抗原 7374免疫球蛋白宣講74免疫球蛋白宣講75免疫球蛋白宣講75免疫球蛋白宣講樣本加到S區(qū)，進入B區(qū)和B區(qū)的金標抗體發(fā)生免疫反應，再層析到T

30、線位置時，如果樣本中含有待測抗原，則T線不顯色或顯色很淡，C線顯色，這樣得到的是陽性結果。當待測樣本中不含抗原時，再層析到T線位置時，則T線顯色，C線也顯色，得到陰性結果SBTCD2.競爭抑制法76免疫球蛋白宣講樣本加到S區(qū)，進入B區(qū)和B區(qū)的金標抗體發(fā)生免疫反應，再層析到 能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量，常用于檢測多種病毒的抗體或抗原，如抗HIV抗體的檢測。（四）免疫印跡法77免疫球蛋白宣講 第五節(jié) 抗體生成技術整體水平抗體生成技術細胞工程抗體生成技術 基因工程抗體生成技術多克隆抗體（抗血清）單克隆抗體嵌合抗體、改形抗體組合抗體庫技術 噬菌體抗體庫技術 Ig基因轉基因小鼠抗體真核表達

31、技術78免疫球蛋白宣講第五節(jié) 抗體生成技術整體水平抗體生成技術細胞工程抗體生成技術一、多克隆抗體（polyclonal antibody） 給動物接種抗原所獲得的免疫血清或抗血清是多種抗體的混合物, 它是由多種抗原決定簇刺激多株B細胞增殖分化所產(chǎn)生的, 稱為多克隆抗體.存在問題特異性差, 用于免疫學檢測容易出現(xiàn)交叉反應 79免疫球蛋白宣講一、多克隆抗體（polyclonal antibody）79傳統(tǒng)抗血清抗 原免 疫所有抗體混合123412341234脾 臟淋巴結B 細胞制備過程80免疫球蛋白宣講傳統(tǒng)抗血清抗 原免 疫所有抗體混合123412341234脾 傳統(tǒng)抗血清的交叉反應專一性反應沒有

32、反應交叉反應+-? 1 2 3 Ag A x y z Ag B 1 2 0 Ag A12312312381免疫球蛋白宣講 傳統(tǒng)抗血清的交叉反應專一性反應沒有反應交叉反應+-? 1 二、單克隆抗體（monoclonal antibody） 通過B細胞雜交瘤技術, 獲得特異性針對某一種抗原決定簇的細胞克隆，產(chǎn)生均一性的抗體.82免疫球蛋白宣講 二、單克隆抗體（monoclonal antibody）8可生產(chǎn)有用抗體的 淋巴細胞 若與 癌細胞融合，則形成穩(wěn)定而可培養(yǎng)的細胞株。癌細胞可培養(yǎng)生長漿細胞B cell可分泌抗體融合瘤HybridomaYYYYYYYYYYYYYYYYYY細胞融合兩組染色體混在

33、一起也可以培養(yǎng)生長產(chǎn)生專一性抗體一個 B cell 只產(chǎn)生一種抗體83免疫球蛋白宣講可生產(chǎn)有用抗體的 淋巴細胞 若與 癌細胞融合，則形成穩(wěn)定而可 抗體-a-b-c-d-a -b -c -d抗原決定基BALB/cabbcd傳統(tǒng)抗體 (抗血清) 是所有抗體的混和 脾臟產(chǎn)生各種 B 細胞免疫前要先把抗原作成乳劑免疫 抗原采血后可得傳統(tǒng)抗血清已建立之小鼠骨髓癌細胞株由脾臟收集 B 細胞免疫后的脾臟約在兩月內(nèi)注射五到八次Ag X制備過程84免疫球蛋白宣講 抗體-a-b-c-d-a -b -d細胞融合-a-b-c-dAgXAgXELISAHATPEG Cell fusion融合瘤細胞ddabcdabcd+

34、-X-d-c-b-a+-dNS-1骨髓癌細胞B cell脾細胞分株培養(yǎng)篩選單抗傳統(tǒng)抗體 (抗血清)試驗專一性對抗原的反應無法分辨完全不同d舊有抗原d新的抗原85免疫球蛋白宣講-d細胞融合-a-b-c-dAgAgELISAHATPEG 免疫球蛋白宣講培訓課件 McAb 在治療中存在的問題（障礙）：1.McAb均是鼠源性抗體，應用于人體內(nèi)可產(chǎn)生人抗鼠抗體（HAMA），加速了排斥反應。2.完整的抗體分子的相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體組織，達不到有效的治療濃度。解決問題的方法或途徑基因工程技術 87免疫球蛋白宣講 McAb 在治療中存在的問題（障礙）：87免疫球蛋白宣講三、基因工程抗體(Geneti

35、c engineering antibody) 根據(jù)研究者的意圖，采用基因工程方法，在基因水平對免疫球蛋白基因進行切割、拼接或修飾后導入受體細胞進行表達，產(chǎn)生新型抗體。 主要包括 嵌合抗體、單鏈抗體、人源化抗體、雙價抗體和雙特異性抗體等。88免疫球蛋白宣講三、基因工程抗體(Genetic engineering 1 人一鼠嵌合抗體(Chimeric Antibodies) 人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體。89免疫球蛋白宣講1 人一鼠嵌合抗體(Chimeric Antibodies)2人源化抗體(humanized antibody 把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)，所得到的抗體稱CDR移植抗體或改型抗體，也就是人源化抗體。 90免疫球蛋白宣講2人源化抗體(humanized antibody 小分子抗體包括Fab、Fv或ScFv、單域抗體及最小識別單位等幾種。 3 小分子抗體 (1)Fab 由完整的輕鏈和Fd組成，大小為完整分子的1/3。 91免疫球蛋白宣講 小分子抗體包括Fab、Fv或ScFv、單域抗體及最小識別 Fv、ScFv的大