XXXX年版藥典化學(xué)藥品檢測技術(shù)概述

1、化學(xué)藥品檢測技術(shù)概述2010.081主要內(nèi)容一、化學(xué)藥品常用檢測技術(shù)介紹；二、2010年版二部新增檢測技術(shù)介紹（總有機(jī)碳測定法）；三、化學(xué)藥品現(xiàn)代檢測技術(shù)介紹；四、化學(xué)藥品質(zhì)量控制展望 2化學(xué)藥品常用檢測技術(shù)介紹化學(xué)分析技術(shù)儀器分析技術(shù)生物檢定技術(shù)3化學(xué)分析技術(shù)的應(yīng)用藥品的物理常數(shù)測定物理常數(shù)系鑒定藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，根據(jù)藥品的特性或鑒定工作的需要，測定相關(guān)的物理常數(shù)。通常包括：相對密度、餾程（沸點）、熔點、凝點、黏度等。物理常數(shù)的測定，不僅對藥品具有鑒別意義，也反映該藥品的純雜程度。4重量分析 本法測得結(jié)果的精密度好、準(zhǔn)確度高，但操作較繁，耗時較長，僅在不能應(yīng)用容量分析法進(jìn)行化學(xué)原料藥的含量

2、測定時，方可考慮選用。容量分析容量（滴定）分析是化學(xué)分析中的一類重要的分析方法。此類分析方法是將一種已知濃度的液體即滴定溶液用滴定管（手動或自動）加到被測物質(zhì)的溶液中，直到所加滴定液和被測組分按化學(xué)計量反應(yīng)完全為止。5容量分析優(yōu)點：精密度和準(zhǔn)確度高，操作簡便，至今仍是組分單一原料藥含量測定的首選方法；快速經(jīng)濟(jì)、儀器簡單。缺點：專屬性不足，對組分較多的制劑，需較繁瑣的前處理，可損失一定的精密度和準(zhǔn)確度。6滴定分析應(yīng)符合以下條件：a、反應(yīng)應(yīng)朝一個方向完全進(jìn)行（99.9%）；b、反應(yīng)迅速，必要時通過加熱或加催化劑等方法加速反應(yīng)；c、共存物不得干擾測定，或能用適當(dāng)方法消除；d、確定等當(dāng)點的方法簡單靈敏

3、；e、標(biāo)化滴定液所用基準(zhǔn)物質(zhì)易得，且符合純度高、組分恒定且與化學(xué)式符合、性質(zhì)穩(wěn)定（標(biāo)化時無副反應(yīng)）等。7滴定分析分類根據(jù)化學(xué)反應(yīng)不同，分酸堿滴定、沉淀滴定、絡(luò)合滴定、氧化還原滴定；按滴定方式分直接滴定和剩余滴定（也稱回滴定、間接滴定）。8儀器分析技術(shù)的應(yīng)用光譜分析 吸收光譜分析：紫外可見、紅外、原子吸收、核磁共振；發(fā)射光譜分析：熒光、火焰、折光、旋光；應(yīng)用：含量、雜質(zhì)限量、物理常數(shù)測定。9紫外可見分光光度法 物質(zhì)對紫外輻射的吸收是由于分子中原子的外層電子躍遷所產(chǎn)生，因此，紫外吸收主要取決于分子的電子結(jié)構(gòu)，故紫外光譜又稱電子光譜。有機(jī)化合物分子結(jié)構(gòu)中如含有共軛體系、芳香環(huán)等發(fā)色基團(tuán)，均可在紫外區(qū)

4、（200400nm）或可見光區(qū)（400850nm）產(chǎn)生吸收。紫外-可見分光光度法是通過被測物質(zhì)在紫外光區(qū)的特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法?？捎糜阼b別、雜質(zhì)檢查和含量測定。10鑒別：對已知物質(zhì)定性可用吸收峰谷波長或吸光度比值作為鑒別方法；但因波長范圍較窄，吸收光譜較為簡單、平坦，曲線變化不大，用作鑒別的專屬性遠(yuǎn)不如紅外光吸收光譜。雜質(zhì)檢查：被測物質(zhì)本身在紫外光區(qū)無吸收，而其雜質(zhì)在紫外光區(qū)有相當(dāng)強(qiáng)度的吸收，或雜質(zhì)的吸收峰處被測物質(zhì)無吸收，用于檢查雜質(zhì)。 11應(yīng)用物理常數(shù)（吸收系數(shù)）的測定物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，及其在最大吸收波長處的吸收系數(shù)，是該物質(zhì)的物理常

5、數(shù)之一。用表示，即在指定波長時，光路長度為1cm，試樣濃度換算成1%（g/ml）時的吸光度，將其列入性狀項下的物理常數(shù)之中，不僅可用于考查原料藥的質(zhì)量，還可作為制劑含量測定中選用值的依據(jù)。12應(yīng)用溶出度、含量均勻度與含量測定由于儀器或操作等原因，在不同試驗室或不同儀器之間，對同一供試液測得的吸光度往往有較大偏差，其相對偏差約為0.5%1.5%，因此，對于原料藥的含量測定，本法非首選方法，但紫外-可見操作簡便、檢測靈敏，如輔料無干擾適用于制劑的含量測定、含量均勻度和溶出度。13（1）對照品比較法 按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測

6、成分規(guī)定量的100%10%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長處測定供試品溶液和對照品溶液的吸光度后，計算供試品中被測溶液的濃度。與對照品同時測定進(jìn)行比較，可改善由于儀器而引入的誤差，但所用對照品應(yīng)具有純度高、雜質(zhì)干擾少、制備方便和穩(wěn)定性好等條件。14吸收系數(shù)法 按各品種項下的方法配置供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，吸收系數(shù)宜在100以上，并注意儀器的校正和檢定。凡制劑的含量測定采用吸收系數(shù)計算的分光光度法，應(yīng)在原料藥的性狀項下增訂”吸收系數(shù)”。15比色法 供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強(qiáng)吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高

7、靈敏度，可加入適當(dāng)?shù)娘@色劑顯色后測定，這種方法稱之比色法。該法的顯色時影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品或標(biāo)準(zhǔn)品同時測定，并同時作空白試驗校正。比色法所用的空白，系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。16紅外分光光度法（IR法） 紅外光譜是分子的振動-轉(zhuǎn)動光譜，特振性強(qiáng)，用于鑒別組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥，是一種較為合適的方法，尤其適用于其他方法不易區(qū)分的同類藥物，如磺胺類、甾體激素類和半合成抗生素類藥品等。樣品的制備：氣體、液體和固體樣品均可利用紅外分光光度法進(jìn)行分析，測定時應(yīng)根據(jù)樣品情況選擇相應(yīng)的制備方法。17 一般有壓片法、糊法、

8、膜法、溶液法、氣體吸收池法；衰減全反射法（ATR） 一般采用與對照圖譜進(jìn)行比較（藥品紅外光譜集收載的品種），少數(shù)采用與對照品圖譜進(jìn)行比較。對于具有同質(zhì)異晶現(xiàn)象的藥品，應(yīng)選用有效晶型的圖譜。采用固體樣品制備法，如遇多晶型現(xiàn)象而使實測光譜與標(biāo)準(zhǔn)光譜有差異時，一般可按藥品紅外光譜集中所載重結(jié)晶處理法或與對照品平行處理后測定。但如對藥用晶型有規(guī)定時，則不能自行重結(jié)晶。18原子吸收分光光度法（縮寫為AA或AAS） 原子吸收法與紫外可見分光光度法在基本原理上是相同的都是基于物質(zhì)對紫外可見光的吸收而建立的方法。但是，它們的吸光物質(zhì)的狀態(tài)不同；原子吸收法是基于基態(tài)原子對光的吸收現(xiàn)象，而紫外可見分光光度法則是基

9、于溶液中的分子或離子對光的吸收，這是這兩種分析方法的根本區(qū)別。19原子分光光度法有如下優(yōu)點：一是靈敏度高，火焰法的絕對檢出限可達(dá)10-10g 數(shù)量級，石墨爐可達(dá)10-14g 數(shù)量級，適合痕量元素的分析；二是選擇性好，簡便快速，有些樣品不經(jīng)分離即可在同一溶液或固體中直接測定多種元素。測定一個元素一般只需幾分鐘。常用于含量測定和雜質(zhì)檢查、溶出度、釋放度等。一般不做鑒別。20與其他儀器分析方法相比較原子吸收法在中草藥和中成藥的無機(jī)微量元素的含量分析上有廣泛的應(yīng)用。幾乎所有的中草藥及中成藥都需經(jīng)過消化預(yù)處理，破壞消化掉有機(jī)組分，將含有的微量元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)化合物，然后制得適用于進(jìn)行原子吸收測定的溶液。這

10、在中藥毒害微量元素的控制方面有長足優(yōu)勢。21熒光分析法 根據(jù)某些物質(zhì)受紫外或可見光照射被激發(fā)后能發(fā)出較激發(fā)波長為長的熒光，而當(dāng)照射光源停止照射時，這種熒光也隨之消失。熒光光譜包括激發(fā)光譜和發(fā)射光譜，激發(fā)光譜是指不同激發(fā)波長的光引起物質(zhì)發(fā)射某一波長熒光的相對效率，即測定每一波長激發(fā)產(chǎn)生的熒光，以激發(fā)光的波長為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖，既得物質(zhì)的激發(fā)光譜，實際為該物質(zhì)的電子吸收光譜。發(fā)射光譜是指某一激發(fā)波長的光引起物質(zhì)發(fā)射不同波長熒光的相對效率，既保持激發(fā)光波長和強(qiáng)度不變，讓熒光物質(zhì)發(fā)生的熒光通過單色器，測量熒光的發(fā)射波長。22物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，可用作定性分析。但激發(fā)波長、強(qiáng)度、所

11、用溶劑等條件固定時，物質(zhì)在較稀的一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可用作定量分析（含量測定、溶出度、含量均勻度等）。根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特點，熒光分析法用于定量測定一般可分為：直接測定法、間接測定法，前者是用于自身能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)；后者用于本身不發(fā)熒光或者因熒光效率低只有極微弱的熒光，無法進(jìn)行直接測定的化合物，此類化合物有些可通過某類化學(xué)反應(yīng)將無熒光物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)檫m合于測定的熒光物質(zhì)，然后進(jìn)行間接測定。間接熒光測定法常用的化學(xué)反應(yīng)有（1）氧化還原反應(yīng)、（2）硫酸“感應(yīng)”熒光反應(yīng)（3）水解反應(yīng)（4）配位反應(yīng)（5）縮合反應(yīng)（6）熒光衍生物測定。23熒光衍生物測定較常用，即一些無熒

12、光或弱熒光的物質(zhì)，利用與某些熒光試劑反應(yīng)，生成熒光衍生物進(jìn)行測定。常用的熒光試劑有：熒光胺、丹酰氯、1,2-萘醌-4-磺酸鈉和鄰苯二甲醛。熒光測定時，要注意在低濃度溶液下進(jìn)行。通常熒光測定的樣品溶液濃度相當(dāng)于吸收分光光度法的1%10%。濃度太大的溶液會有“自熄滅”現(xiàn)象，這是由于被激發(fā)分子在發(fā)生熒光之前和未激發(fā)分子的碰撞，或由于熒光物質(zhì)的分子間締合而形成二聚體及多聚體的關(guān)系，這也是液態(tài)純物質(zhì)的熒光一般都不強(qiáng)的原因。24旋光測定旋光度：平面偏振光通過含有某些光學(xué)活性化合物的液體或溶液，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光的平面向左或右發(fā)生旋轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)的度數(shù)稱為旋光度。這種特性是由于物質(zhì)分子中含有不對稱元素（通常

13、為不對稱碳元素）所致。使偏振光向右旋轉(zhuǎn)者（順時針方向，朝光源觀測）稱為右旋物質(zhì)，常以“+”號表示；使偏振光向左旋轉(zhuǎn)者稱為左旋物質(zhì)，常以“”號表示。旋光度的影響因素：化合物特性、測定波長、偏振光通過的供試液濃度、液層的厚度以及測定時的溫度。25比旋度當(dāng)偏振光通過長1dm且每1ml中含有旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定波長與溫度下測得的旋光度稱為比旋度。以 t表示，t為測定時的溫度，為測定波長。除另有規(guī)定，測定溫度為20，采用鈉光譜的D線（589.3nm）。比旋度為光學(xué)物質(zhì)的物理常數(shù)，是反映手性化合物特性及其純度的主要指標(biāo)。應(yīng)用：鑒別（左炔諾孕酮片、左炔諾孕酮炔雌醚片等）、檢查純雜度（一般置于性狀項下，

14、如左旋多巴、左炔諾孕酮等）、含量測定（葡萄糖）26色譜法 紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、毛細(xì)管電泳、離子色譜等。薄層色譜 薄層色譜法按薄層色譜使用固定相的性質(zhì)及其分離機(jī)制可分為吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜法和分子排阻色譜法四種，其中吸附TLC法最常用，分配TLC法次之。在化學(xué)藥品分析中，常用于鑒別和雜質(zhì)檢查。27在有機(jī)雜質(zhì)檢查中，尤其是有關(guān)物質(zhì)的檢查，薄層色譜法是常用的方法之一。用于已知雜質(zhì)的檢查時，宜采用與限度量的已知雜質(zhì)對照品，同時展開，檢測比較；對于未知雜質(zhì)，可見供試品溶液稀釋后作為自身對照溶液，選用自身對照檢測時，要注意雜質(zhì)斑點與自身對照的顯色可比性。也可用熒光板，利用

15、熒光淬滅法檢測。28為了能反映雜質(zhì)已達(dá)到良好的分離，可規(guī)定系統(tǒng)適用性試驗的要求。系統(tǒng)適用性試驗包括檢測斑點的檢測靈敏度、比移值（Rf）和分離效能。分離效能 鑒別時，對照品與結(jié)構(gòu)相似物制成的混合溶液按規(guī)定方法展開后，應(yīng)顯示兩個清晰的斑點。雜質(zhì)檢查時，雜質(zhì)對照品主成分制成的混合溶液按規(guī)定方法展開后，應(yīng)顯示兩個清晰的斑點，或待測成分與相鄰的斑點應(yīng)清晰分離。29注意：（1）薄層板的活化與保存 在吸附TLC法中，無論自制還是市售的硅膠板，使用時均應(yīng)活化（11030分鐘）?；罨髴?yīng)立即置于有干燥劑的干燥器中保存，保存時間不宜過長，最好隨用隨活化。放入干燥箱中只是一種適用前的過渡。吸附TLC法中，薄層板需活

16、化，這是因為其吸附劑硅膠中的硅醇基吸附水分后活性降低，但使用硅膠G類的板層時注意，由于其粘合劑煅石膏在110烤2小時即失去活性，因此在板層活化和顯色時注意；而分配TLC法則不需干燥，殘留的水作固定相。（2）點樣環(huán)境 實驗環(huán)境的溫濕度對薄層分離效果有較大影響，宜保持試驗環(huán)境相對恒定，對溫濕度敏感的品種必須按規(guī)定嚴(yán)格控制環(huán)境的溫濕度。30液相色譜（略）氣相色譜（略）毛細(xì)管電泳法（略）離子色譜法（略）31生物檢定技術(shù)的應(yīng)用微生物限度檢查法無菌檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查發(fā)熱原檢查法抗生素微生物檢定法升壓物質(zhì)檢查法降壓物質(zhì)檢查法過敏反應(yīng)檢查法溶血與凝聚檢查法322010年版二部總有機(jī)碳檢測技術(shù)介紹（1）總有機(jī)

17、碳測定法介紹 原理：通過氧化待測樣品中的有機(jī)物，使之釋放出co2并產(chǎn)生電導(dǎo)響應(yīng)，通過薄膜電導(dǎo)率測定可得到水中有機(jī)碳總量33TOC測定的基本原理氧化第一步有機(jī)物第二步測定 CO234氧化技術(shù)高溫氧化加熱的過硫鹽氧化紫外線加過硫鹽氧化紫外線氧化紫外線加二氧化鈦氧化35高溫燃燒氧化高溫爐絲 空氣/O2+鉑（Pt)催化劑，在680950 優(yōu)點 缺點氧化效率高 催化劑易中毒，必須替換能氧化顆粒 必須使用試劑、載氣和酸用在清潔驗證較為合適 空白污染 檢測限高36加熱的過硫鹽氧化S2O8+加熱（90130）2SO4SO4+H2O SO4+OH 優(yōu)點 缺點氧化效率高 顆粒氧化會不完全無催化劑和燈管 會失去揮發(fā)

18、性化合物適用于清潔驗證 需化學(xué)試劑 和制藥用水 反應(yīng)器內(nèi)積累滯留物37紫外氧化H2O+hv（185nm）OH+H 優(yōu)點 缺點無試劑 對較高濃度的TOC氧化能力不足無催化劑中毒 （5ppm TOC)保養(yǎng)簡單 對顆粒物氧化會不完全適用于半導(dǎo)體工業(yè)和 需更換燈管 USP制藥用水 38紫外氧化有機(jī)物+hv（185nm）CO2+H2O H2O+ hv（185nm）OH+H OH+OrganicsCO2+H2O39紫外線加二氧化鈦氧化H2O+ hv（185nm）OH+HH2O+ hv（185nm，TiO2）OH+H 優(yōu)點 缺點無試劑 對較高濃度的TOC氧化能力不足保養(yǎng)簡單 （5ppm TOC)適用于半導(dǎo)體

19、工業(yè)和 對顆粒物氧化會不完全 USP制藥用水 需更換燈管 催化劑中毒40紫外線加過硫鹽氧化S2O8+加熱（90130）2SO4SO4+H2O SO4+OH 優(yōu)點 缺點無論TOC在高濃度還是 對顆粒物氧化會不完全 低濃度氧化效率高 用化學(xué)試劑 保養(yǎng)簡單 需要更換燈管 適用于清潔驗證和USP 制藥用水41CO2檢測技術(shù)非分散紅外探測直接電導(dǎo)率探測薄膜電導(dǎo)率探測42非色散紅外(NDIR)探測 氣室檢測器CO2入氣口CO2出氣口43直接電導(dǎo)率檢測44直接電導(dǎo)檢測的最大優(yōu)點：靈敏度極高 最大缺點：各類離子的干攏 H3PO3 H+ +H2PO4- 有機(jī)物 CO2 +H2O H2CO3 H+ + HCO3-

20、 各類有機(jī)物氧化分解而生成各式離子，都產(chǎn)生電導(dǎo)響應(yīng) HCl H+ + Cl- HNO3 H+ + NO3- H2SO4 2H+ + SO42-UVR-ClR- NR- SR- P45期望值 所測值%TOC (ppb)TOC (ppb) 誤差二氯甲烷101801,700三氯甲烷104754,650溴二氯甲烷102232,130氯二溴甲烷102482,380三溴甲烷103022,9201,1,1, - 三氯乙烷1003,4563,3561,2,3,- 三氯丙烷1002,8762,776半胱氨酸1001,2781,178直接電導(dǎo)率在線TOC方法的 “假正” 現(xiàn)象46薄膜電導(dǎo)率檢測 - 選擇性膜技術(shù)4

21、7薄膜電導(dǎo)率檢測優(yōu)點可測去離子水和非去離子水靈敏度高，選擇性和精確度好多用性在線和非在線校準(zhǔn)穩(wěn)定適用于清潔驗證和USP 制藥用水 被美國試驗材料學(xué)會（ASTM）認(rèn)可缺點測非去離子水需用試劑比直接電導(dǎo)率檢測器多一些可移部件48用途：檢查制藥用水中有機(jī)碳總量，用以間接控制水中的有機(jī)物含量。也被用于制水系統(tǒng)的流程控制，如監(jiān)控凈化和輸水等單元操作的效能。有機(jī)物的來源：一般來自水源、供水系統(tǒng)（包括凈化、貯存和輸送系統(tǒng)）以及水系統(tǒng)中菌膜的生長。492010年版總有機(jī)碳測定附錄方法介紹對儀器的一般要求：（1）總有機(jī)碳測定技術(shù)應(yīng)能區(qū)分無機(jī)碳（溶于水中的二氧化碳和碳酸氫鹽分解所產(chǎn)生的二氧化碳）與有機(jī)碳（有機(jī)物被

22、氧化產(chǎn)生的二氧化碳），并能排除無機(jī)碳對有機(jī)碳測定的干擾。（2）應(yīng)滿足系統(tǒng)適用性試驗的要求。（3）應(yīng)有足夠的檢測靈敏度（最低檢出限為每升含碳等于或小于0.05mg/l)50總有機(jī)碳檢查用水應(yīng)采用每升含總有機(jī)碳低于0.10mg，電導(dǎo)率低于1.0uS/cm（25）的高純水。所用總有機(jī)碳檢查用水與制備對照品溶液及系統(tǒng)適用性試驗用水應(yīng)是同一容器所盛之水。51系統(tǒng)適用性試驗取總有機(jī)碳檢查用水（w）、蔗糖對照品溶液（s）和1，4-對苯醌對照品溶液（ss）分別進(jìn)樣，依次記錄儀器總有機(jī)碳響應(yīng)值。按下式計算，以百分?jǐn)?shù)表示的響應(yīng)效率應(yīng)為85115。 52化學(xué)藥品現(xiàn)代檢測技術(shù)介紹現(xiàn)代色譜法 手性HPLC拆分法： 由于

23、D-型和L-型對映體的物理性質(zhì)完全相同，難以在普通固定相上分離，只能在手性固定相上才能獲得拆分；如果利用對映體分子中的反應(yīng)基團(tuán)與某一光學(xué)純試劑反應(yīng)形成了非對映光學(xué)異構(gòu)體混合物，其物理性質(zhì)就有較大的差異，因而在普通固定相上實現(xiàn)分離.因此，手性HPLC 拆分法通常分為直接法和間接法兩大類.對映體混合物以手性試劑作柱前衍生，形成非對映體異構(gòu)體對，然后以常規(guī)固定相分離，稱為間接法，也稱手性衍生試劑法；未作上述處理，使用手性流動相或手性固定相拆分者即是直接法.其共同特點是，均以現(xiàn)代HPLC 技術(shù)為基礎(chǔ)，并引入不對稱中心；不同的是間接法是將其引入分子內(nèi)，而手性固定相和手性流動相則引入分子間.引入手性環(huán)境使

24、對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異是手性HPLC進(jìn)行光學(xué)異構(gòu)體拆分的基礎(chǔ).53毛細(xì)管電泳分析法毛細(xì)管電泳（capillary electrophoresis，CE）是以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場為驅(qū)動力，依據(jù)樣品中，各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的電泳分離分析方法，是20 世紀(jì)80 年代初發(fā)展起來的一種高效、快速的分離分析技術(shù).HPCE 是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物.與HPLC 相比，均為液相分離技術(shù)，都有多種分離模式，且儀器操作可自動化；但分離機(jī)制不同.在很大程度上，HPCE 和HPLC互為補(bǔ)充. 毛細(xì)管電泳分析法的主要分離模式有：毛細(xì)管區(qū)帶電泳（毛細(xì)管電泳

25、中最基本、應(yīng)用最廣泛的一種分離模式）；膠束電動毛細(xì)管色譜、毛細(xì)管凝膠電泳和毛細(xì)管等電聚焦等. 54現(xiàn)代波譜法 在藥物的研制及質(zhì)量控制過程中紫外光譜法、紅外光譜法、熒光光譜法、質(zhì)譜法、近紅外分光光度法、核磁共振光譜分析法、X 射線粉末衍射法等技術(shù)被廣泛應(yīng)用.55近紅外分光光度法（near-infrared spectrophotometry ，NIRS）近紅外分光光度法是一種用于鑒定有機(jī)物質(zhì)十分有用的技術(shù).近紅外光譜是中紅外光譜（2500nm25000nm）中C-H，N-H，O-H 和S-H 的共振吸收，具有高信息量.波長范圍為780nm2500nm. NIRS 不僅可用于藥物及其制劑的鑒別，還

26、可用于檢查和含量測定.56NIRS 分析技術(shù)主要有投射測定法、漫投射測定法和反射測定法3 種.投射測定法一般用于液體樣品的溶液中固體的分析，透射光強(qiáng)度與物質(zhì)量間的關(guān)系符合比爾定律；漫投射測定法用于試樣中含有光散射物質(zhì)的分析，光在穿透分析樣品時，除了吸收外還有多次的散射，在這個過程中比爾定律不適用；反射測定法是近紅外光照射到樣品表面后，根據(jù)樣品表面狀態(tài)和結(jié)構(gòu)的不同，光線可以有規(guī)則的反射、漫射和透反射，這種方法常用于粗糙和粉末狀態(tài)樣品的測定.其中漫反射測定法常用于固體樣品的分析，透反射測定法一般用于液體和溶液中固體或混懸液中固體樣品的分析.57NIRS 分析法的特點有樣品無需與處理；所需樣品少；分

27、析速度快；靈敏度高；運(yùn)用范圍廣；便于在線分析和控制等特點.NIRS 在藥物的鑒別、純度檢查和含量測定中被廣泛應(yīng)用.58核磁共振光譜分析法核磁共振光譜（nuclear magnetic resonance spectrometry ，NMRS）是利用原子核的物理性質(zhì)，采用當(dāng)代最先進(jìn)的電子學(xué)和計算機(jī)技術(shù)，用于各種分子物理和化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究.隨著NMR 儀器靈敏度、分辨率、動態(tài)范圍等方面技術(shù)的提高，NMRS 分析法在藥學(xué)研究中的應(yīng)用迅速擴(kuò)大.NMR 可檢測的核素有很多，如1H、13C、15N、19F、23Na、31P 等.但由于大多數(shù)藥物都含有質(zhì)子，因此最常用的是1H-NMR，其光譜中的化學(xué)位移、峰面

28、積、偶合常數(shù)、弛豫時間均是解析化合物結(jié)構(gòu)的重要參數(shù)，而峰面積和峰高更直接與被測組分的含量呈正比. 基于超導(dǎo)強(qiáng)磁場的多脈沖FT-NMR 技術(shù)，尤其是二維NMR（2D-NMR）技術(shù)的開發(fā)應(yīng)用，不但顯著提高了檢測靈敏度，而且使1H -NMR 譜與13C -NMR 譜互相構(gòu)聯(lián)，建立了不依賴任何經(jīng)驗規(guī)則預(yù)測的方法，對分子骨架、構(gòu)型及構(gòu)象等獲得直接確鑿的分析方法，已在各類有機(jī)化合物的分子結(jié)構(gòu)測定中得到了廣泛地應(yīng)用. 59 X 射線粉末衍射法X 射線是倫琴在1895 年發(fā)現(xiàn)的，又曾稱為倫琴射線.本質(zhì)上是波長很短的電磁波，一般認(rèn)為波長為0.01nm1nm，較紫外線還短.作為波，就可以產(chǎn)生衍射.所謂衍射，就是繞

29、過障礙物邊緣向前傳播的現(xiàn)象.當(dāng)X 射線射到晶格排列整齊的晶體上，僅僅在某些方向有光線反射，這就是X 射線的衍射.衍射均可由X 射線衍射儀進(jìn)行測定.應(yīng)用：晶型的測定60聯(lián)用技術(shù)液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（簡稱LC-MS）聯(lián)用技術(shù)是20 世紀(jì)90 年代發(fā)展成熟的分析技術(shù)，它集HPLC 的高分離能力與MS 的高靈敏度、極強(qiáng)的結(jié)構(gòu)解析能力、高度的專屬性和通用性、分析速度快于一體，已成為藥品質(zhì)量控制、體內(nèi)藥物和藥物代謝研究中其他方法所不能取代的有效工具.與GC-MS 聯(lián)用技術(shù)相比，LC-MS 聯(lián)用技術(shù)分析前樣品處理簡單，一般不要求水解，或者衍生化，可以直接用于藥物及其代謝物的同時分離和鑒定.但是LC-MS

30、仍存在明顯不足，主要有：由于離子化問題，對部分化學(xué)成分的響應(yīng)差，不能分析所有結(jié)構(gòu)類型的化合物；對色譜流動相的組成有限制，不宜使用非揮發(fā)性緩沖鹽，揮發(fā)性緩沖鹽的濃度也應(yīng)控制在10 mmol/L 以下，在一定程度上降低了LC-MS 的應(yīng)用范圍；所提供的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息尚不足以徹底解決化合物的鑒定問題，尤其對闡明化合物的基團(tuán)連接位置和立體構(gòu)型等缺乏證據(jù).61液相色譜-核磁共振聯(lián)用技術(shù)LC-MS 已成為復(fù)雜體系中各化合物結(jié)構(gòu)分析的重要方法，而MS 無法完全解決位置異構(gòu)、立體異構(gòu)等化學(xué)結(jié)構(gòu)問題.隨著LC 與NMR 聯(lián)用技術(shù)所需硬件和軟件方面的長足進(jìn)展，上世紀(jì)90 年代后期LC-NMR聯(lián)用分析技術(shù)已進(jìn)入了實用

31、階段，正在成為藥物雜質(zhì)鑒定、藥物體內(nèi)外代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)鑒定、天然產(chǎn)物化學(xué)篩選等研究領(lǐng)域最具價值的分析技術(shù)之一.62方法特點：NMR 是迄今為止功能強(qiáng)大的結(jié)構(gòu)研究手段，可以徹底解決多數(shù)有機(jī)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)問題，而且NMR 對所有含檢測核的化合物均有響應(yīng)，具有極大的通用性.與LC 聯(lián)用時要求達(dá)到良好的色譜分離，但對色譜條件要求不高，使用普通色譜柱，一般建議仍使用重水，其余使用甲醇、乙腈、四氫呋喃等有機(jī)溶劑，也可以向流動相中加入酸、堿和各種緩沖鹽及離子對試劑等，因而該聯(lián)用技術(shù)具有廣泛的適用范圍.該方法的不足是：靈敏度低；要求達(dá)到良好的色譜分離，使復(fù)雜體系的分析存在難度；溶劑峰抑制技術(shù)會損失附近的樣品信號，影響結(jié)構(gòu)的準(zhǔn)確解析.63氣相色譜-紅外光譜聯(lián)用技術(shù)最早在1964 年采用兩臺紅外分光度計分別記錄一個色譜餾分的高波數(shù)段和低波數(shù)段光譜，從氣相色譜柱流出的餾分直接進(jìn)入紅外檢測池，不需進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移，也無需終止氣相色譜儀的操作.然而由于色散型分光光度計掃描速度太慢，靈敏度低，當(dāng)時并未迅速發(fā)展.直到快速掃描型傅立葉變換紅外（FTIR）儀的出現(xiàn)，