微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)8-cmx-2011課件

1、點(diǎn)評革蘭氏染色效果較差，脫色時(shí)間控制不好。莢膜染色效果良好，黑色素染液涂片的厚度繪圖進(jìn)步較大，但菌體比例尚需注意圖片名稱需要規(guī)范且合理SJJM菌株光學(xué)顯微鏡圖（簡單染色） 放大倍數(shù)：1500倍解析：。存在的其他問題：細(xì)菌形態(tài)不規(guī)則，菌體有缺口，多種形態(tài)細(xì)菌混雜而未標(biāo)注。思考題1、莢膜染色，為什么不能熱固定？2、莢膜負(fù)染法，莢膜為何不著色而菌體著色？思考題可用什么方法證明革蘭氏染色是成功的？革蘭氏染色中，哪一個(gè)步驟可以省去而不影響最終結(jié)果？在什么情況下可以采用？革蘭氏染色哪一步最關(guān)鍵？ 酵母菌的形態(tài)觀察一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.觀察酵母的形態(tài)及出芽生殖方式2.學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死活細(xì)胞的鑒別方法背景知識(shí)宏觀

2、菌落特征：和細(xì)菌菌落極為相似，表面濕潤、粘稠，與培養(yǎng)基結(jié)合不緊密，易挑起。但比細(xì)菌菌落大而厚，顏色比較單一，大多乳白色、只有少數(shù)為紅色、黑色等，不同種類的菌落在形態(tài)、質(zhì)地和邊緣特征上均表現(xiàn)不同。菌落光滑或起皺，平整或突起，邊緣圓整或有不規(guī)則的毛狀物。菌落特征可作為酵母菌菌落鑒定的依據(jù)之一。（總之，酵母菌細(xì)胞較細(xì)菌細(xì)胞大10倍左右，表現(xiàn)在菌落形態(tài)上就有酵母菌的菌落直徑較大、菌落隆起明顯等特點(diǎn)）酵母菌的形態(tài)通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。酵母菌繁殖方式為無性繁殖和有性繁殖兩種。正常情況下以無性繁殖為主，無性繁殖主要方式是出芽方式，有的是分裂繁殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。

3、成熟的酵母菌細(xì)胞，先長出一個(gè)小芽，芽體細(xì)胞長到一定程度，脫離母細(xì)胞繼續(xù)生長，爾后形成新個(gè)體。有多邊出芽、兩端出芽、和三邊出芽。 二 染色原理 由于細(xì)胞個(gè)體大，采取涂片的方法制片有可能損傷細(xì)胞，一般通過美蘭染液水浸片法或水-碘液浸片法來觀察酵母形態(tài)和出芽生殖方式。美藍(lán)是一種無毒性的染料，是活體染料的一種，是堿性染料。它的特性是氧化態(tài)呈藍(lán)色，還原態(tài)呈無色。用美藍(lán)對酵母的活細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細(xì)胞是無色的、而死細(xì)胞或新陳代謝微弱的衰老細(xì)胞呈藍(lán)色和淡藍(lán)色，借此即可對酵母細(xì)胞進(jìn)行死活鑒定。 三

4、、實(shí)驗(yàn)材料 ：1.菌種 啤酒酵母2.染液 呂氏堿性美藍(lán)液3.器材及用具 接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸管、鑷子、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱。釀酒酵母菌細(xì)胞形態(tài)多為卵圓形，在高倍鏡下清晰可見，并可觀察到其細(xì)胞內(nèi)的液泡及顆粒狀內(nèi)含物，但觀察不到細(xì)胞核。芽殖的形態(tài)為：在較大的母細(xì)胞上生長著較小的子細(xì)胞，兩者間呈藕節(jié)狀連接。細(xì)胞呈無色的為活細(xì)胞，呈藍(lán)色的為死細(xì)胞或衰老的細(xì)胞。注意事項(xiàng)制備菌懸液時(shí)，不要?jiǎng)×彝磕?，以免破壞?xì)胞。水制片，染料或蒸餾水不宜過多或過少，否則在蓋上蓋玻片時(shí)，菌液容易溢出或產(chǎn)生氣泡，影響觀察。蓋玻片不宜平著放下，應(yīng)傾斜慢放，避免產(chǎn)生大量氣泡。注意區(qū)別出芽與酵母菌重疊的情況。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、圖示釀酒酵母菌的細(xì)胞、芽殖形態(tài)。對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行簡單分析、描述。記錄死、活細(xì)胞的大致比例P75。思考題：1. 在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的形態(tài)特征區(qū)別于一般細(xì)菌。2.呂氏堿性美藍(lán)染液濃度及作用時(shí)間的不同，對酵母菌死細(xì)胞數(shù)量計(jì)數(shù)有什么影響，試分析其原因。微生物細(xì)胞大小的測定一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)測微技術(shù)，測量酵母細(xì)胞的直徑（寬度）和長度。二.實(shí)驗(yàn)原理微生物細(xì)胞的大小是微生物重要的形態(tài)特征之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下來測量。光學(xué)顯微鏡中，用來測量細(xì)胞大小的工具有目鏡測微尺和鏡臺(tái)測微尺目鏡測微尺是一塊圓形玻片，在玻片中央把5mm長度刻成50等分，或把10 mm長度刻成100等分。測量時(shí)，將其放在接目鏡中

6、的隔板上(此處正好與物鏡放大的中間相重疊)來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于在顯微鏡不同的接目鏡和接物鏡系統(tǒng)下，放大倍數(shù)不同，目鏡測微尺每格所示長度隨顯微鏡放大倍數(shù)而變化。所以在使用前，須用鏡臺(tái)測微尺來校正目鏡測微尺。4倍10倍40倍10微米三.實(shí)驗(yàn)器材1.菌種酵母菌懸液2.器材目鏡測微尺、鏡臺(tái)測微尺、顯微鏡、蓋玻片、無菌滴管、雙層瓶、擦鏡紙等。四 實(shí)驗(yàn)步驟1.將目鏡測微尺裝入目鏡內(nèi)，刻度朝下，并將鏡臺(tái)測微尺置載物臺(tái)上。2.用低倍鏡觀察到鏡臺(tái)測微尺的刻度。3.換用高倍鏡測量，先用鏡臺(tái)測微尺標(biāo)定。計(jì)算出目鏡測微尺每格的長度。移動(dòng)鏡臺(tái)測微尺和轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡測微尺，使二者的刻度平行，并使兩尺的第一條線重

7、合。向右尋找另外相重合的直線，記錄兩重合刻度間目鏡測微尺和鏡臺(tái)測微尺的格數(shù)，由公式算出目鏡測微尺每格長度。五.實(shí)驗(yàn)報(bào)告將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄于，表中注意事項(xiàng)光線調(diào)節(jié)，不宜太亮，以免找不到臺(tái)尺菌體不同生長階段細(xì)胞大小變化大，以對數(shù)生長期的菌體材料為宜，直徑相對穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)完畢注意事項(xiàng)臺(tái)尺回收，交于老師；清理顯微鏡物鏡及臺(tái)面衛(wèi)生，顯微鏡按編號放回廚子 微生物的顯微直接計(jì)數(shù)一、目的要求了解血球計(jì)數(shù)板構(gòu)造和原理 學(xué)會(huì)用血球計(jì)數(shù)器測定酵母菌細(xì)胞數(shù)二、基本原理-計(jì)數(shù) 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái)，中間較寬的平臺(tái)被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺(tái)上各刻有

8、一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格框共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（0.1mm3），所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目。1 2 3 4不可用油鏡9個(gè)大格計(jì)數(shù)室寬1mm25中格16小格 16中格 25小格計(jì)數(shù)時(shí)，先數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，求得每個(gè)中方格的平均值，再乘以25或16，得出大方格的總菌數(shù)，再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。三、材料與器材1、材料 酵母菌2、器材 血球計(jì)數(shù)板、顯微鏡、蓋玻片、滴管等。四、操作步驟1 稀釋 將酵母菌液進(jìn)行適當(dāng)稀釋。2 鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。（清洗，晾干）3 加樣品將清潔干燥的血球

9、計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用干凈細(xì)口滴管將稀釋均勻的酵母菌液滴入（不宜過多或過少，從一側(cè)的溝槽慢慢滴入，讓其自然漫過計(jì)數(shù)室，至對側(cè)溝槽充滿菌液為止），靜置5-10min即可計(jì)數(shù)。4 顯微鏡計(jì)數(shù)先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡（40倍）進(jìn)行計(jì)數(shù)。（有的顯微鏡40倍物鏡不佳，屆時(shí)需要協(xié)調(diào)使用）5.清洗清洗計(jì)數(shù)板：用水柱沖洗血球計(jì)數(shù)板，晾干。鏡檢，確認(rèn)無殘留物。計(jì)數(shù)板干燥后裝回盒子，交回實(shí)驗(yàn)室老師，以備后用。清洗顯微鏡物鏡并整理好臺(tái)面衛(wèi)生。注意事項(xiàng):取樣時(shí)先要混勻菌液;加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生；加樣量適中；調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)(光圈調(diào)節(jié))；計(jì)數(shù)板上刻度精細(xì)，清洗勿用刷子或硬物，也不可用酒精燈火焰烘烤。對于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大