植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配制實驗設(shè)計課件

姓名：鄭傳益學(xué)號：1101410722QQ：1410928287植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基配制實驗設(shè)計概要母液配制及注意事項培養(yǎng)基配制及注意事項武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作MS培養(yǎng)基營養(yǎng)成分較多，而且一些成分用量很小。為便于配制，可以分類擴(kuò)倍制備濃縮母液，使得配制MS時快捷方便、成分需求量更為準(zhǔn)確。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作母液配制母液配制中注意：(1)NH4NO3、KNO3此兩種藥品為易爆品，取用時一定要輕拿輕放，保存在陰涼處。(2)EDTA-Na2、CoC12、2，4-D此三種藥品為致癌物，配制時要帶膠皮手套，或兩層塑料手套。(3)定容原則：在母液配制時部分需要加熱促進(jìn)溶解，定容一定要等到常溫下進(jìn)行。母液配制母液配置要求1.按照《MS培養(yǎng)基成分表》中成分準(zhǔn)備試劑。2.母液劃分分組依據(jù)：a.根據(jù)元素需求量劃分并配制等倍濃縮液混勻便于取用b.母液中各物質(zhì)不能因反應(yīng)而產(chǎn)生沉淀。其中，Ca2+與SO42-混合會產(chǎn)生CaSO4沉淀；在鉬酸鹽中，銨、堿金屬、鎂和鉈鹽溶于水,其他都不溶于水。3.母液擴(kuò)大倍數(shù)依據(jù)：由于所配制母液在未使用情況下需要放置在4℃下保存，所以要求在該溫度下不能飽和析出，以免影響使用。各物質(zhì)的溶解度詳細(xì)參考各物質(zhì)的溶解度曲線。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作母液配制大量元素母液I配制各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大10倍用天平稱取，各種化學(xué)藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應(yīng)注意先后順序。后用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。倒入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。*母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作母液配制母液類別化合物培養(yǎng)基濃度(mg/L)母液擴(kuò)大倍數(shù)1升母液中藥品稱取量(mg)每升培養(yǎng)基取母液的量(ml)I大量元素MgSO4.7H2O37010倍3700100KNO3190019000KH2PO41701700NH4.NO3165016500CaCl2.2H2O4404400表1武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作注意事項：在溶解CaCl2·2H2O

時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易暴沸，操作時要先等水溫溫和后加入母液配制微量元素母液II配制各成分按照表2用適量蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為1000倍的微量元素母液。倒入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作母液配制Fe元素母液III配制目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。各成分按照表3分別用適量蒸餾水將FeSO4和Na2-EDTA加熱溶解后混合，再一邊加熱一邊不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20-30min)，調(diào)pH值至5.5，室溫放置冷卻后，用蒸餾水定容到1000ml的容量瓶中，即為200倍的Fe元素母液。倒入棕色細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽后再冷藏。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作母液配制有機(jī)物母液IV配制培養(yǎng)基中的有機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1000mL，注意稱量時用電子分析天平。

注意事項：由于維生素母液營養(yǎng)豐富，因此貯藏時極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時間。武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作培養(yǎng)基配制武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作量筒、移液管、燒杯、蔗糖、瓊脂、天平、電熱爐、玻璃棒、鐵架臺、錐形漏斗（帶橡膠管）、搪瓷杯、PH試紙、培養(yǎng)皿培養(yǎng)基配制準(zhǔn)備：注意事項：1.培養(yǎng)基熔化后要趁熱定容，否則培養(yǎng)基低溫瓊脂將凝固，造成營養(yǎng)成分濃度不均。2.對PH要求較嚴(yán)的目標(biāo)培養(yǎng)物，調(diào)解pH時最好用電子pH計，以保證精確度。pH試紙的誤差較大，要小心調(diào)節(jié)?？梢詫H調(diào)到比最適值小約0.2，因為培養(yǎng)基在滅菌后，pH將變大。培養(yǎng)基配制武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作1.根據(jù)配方要求，用量筒或移液管從各母液中分別取出所需用量，放入同一燒杯中并將稱取好的蔗糖和瓊脂放在一邊備用；2.將稱取好的瓊脂加入盛有加熱后的（沸騰后停止加熱）蒸餾水約300ml的搪瓷杯中溶解，并不斷攪拌，直至溶液呈透明狀；3.將1.燒杯中的試劑和蔗糖加入至溶解好的瓊脂溶液中，邊加熱邊攪拌，定容至1000mL；4.調(diào)節(jié)PH；5.分裝標(biāo)記后封裝滅菌。操作步驟武漢生物工程學(xué)院植物細(xì)胞工程學(xué)——鄭傳益制作結(jié)語參考資料來源于：小木蟲

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