人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA試劑盒說明書

人型胱酸Hcy酶免分試盒用明廈門慧嘉生物科技有限公司本試劑僅供研究使用

目的：本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中同型半胱氨酸（）的含量。實(shí)原：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定本中人同型半胱氨酸（cy）水平。用純化的人同型半胱氨酸Hcy）體包被微孔，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入同型半胱氨酸HHRP標(biāo)的同型半胱氨酸H抗體結(jié)合，形成抗原標(biāo)體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底TMB顯TMBHRP酶催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。色的深淺和樣品中的同型半胱氨酸cy）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波測定吸度（OD值標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人同型半胱氨酸cy）濃度。試盒成試劑盒組成說明書封板膜密封袋酶標(biāo)包被板標(biāo)準(zhǔn)品18標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液酶標(biāo)試劑樣品稀釋液顯色劑A顯色劑B液終止液濃縮洗滌液

48配置12（）11×48×1瓶×1瓶3瓶3瓶3瓶3瓶3ml×1瓶（20ml×20倍）瓶

96孔12（）11×96×1瓶×1瓶66瓶66瓶6ml×1瓶（20ml×30倍）瓶

保存℃存℃存℃存℃存℃存℃存℃存℃存℃存樣處及求1.清室液自然凝固分離20分鐘左轉(zhuǎn)集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)次離心。2.漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選或檬酸鈉作為抗凝劑，混合鐘后，離心20分右轉(zhuǎn)收清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.液：用無菌管收集，離心20分左2000-3000收集上清，保存過程1

中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性成份時(shí)，用無菌管收集。離心20左右轉(zhuǎn)分收清。檢測細(xì)胞的成份時(shí)，用）細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右過復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（轉(zhuǎn)收上。存程如沉成，應(yīng)再次離心。5.織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱重量。加入一定量PBS。液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持溫度。加入一定量的工勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分左集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6.本采集后盡早進(jìn)行提取，取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放-℃存，但應(yīng)避免反復(fù)凍.7.能檢測含的樣品，因NaN3制辣根過氧化物酶的HRP性。操步：1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品第一、第二中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50然第一孔、第二孔中各取l別加到第三孔第四孔三分加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50混勻；然后在第三孔和第四孔中各取50，各加五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加準(zhǔn)品稀釋，勻；混勻后從第五、第六孔中各取別第七、第八孔，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50勻后從第七、第八孔中分別取50到、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50第九第孔中各取后各孔加樣量都為50濃度分別為12，8，2，12.加樣：分別設(shè)空白孔（空白照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同品孔標(biāo)包被板上待測樣品中先加樣品稀釋液40測樣品10品最終稀釋度為5倍將加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃育。4.配液：將（48T倍）濃洗液蒸水（48T20）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置后棄去，如此重復(fù)5次干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50除7.溫育：操作同。8.洗滌：操作同。9.顯色：每孔先加入顯色劑顯蕩37℃光顯色15鐘10.終止孔加終止液50應(yīng)此藍(lán)立黃11.測定空白空調(diào)零450nm波長序量孔吸度OD值測定加終止液后分鐘進(jìn)行。注事：1．試從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)室溫平衡鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存2．濃液可能會(huì)有結(jié)晶析出稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。2

3．各樣均應(yīng)使用加樣器，經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多推薦使用排槍加樣。4．請測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的值用稀釋液稀釋一定倍數(shù)倍后再測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（5．封只限一次性使用，以免交叉污染。6．底避光保存。7．嚴(yán)照說明書的操作進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為8．所品，洗滌液和各種廢物都應(yīng)按傳染物處理。9．本不同批號組分不得混。與英文說明書有異，以英說明書為準(zhǔn)。計(jì)：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與值算標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣的OD代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，乘以