基因工程試卷及答案

一、名詞解釋1、基因治療：是將目的基因放進(jìn)特定載體中導(dǎo)入靶細(xì)胞或組織，通過替換或補(bǔ)償引起疾病的基因，或者關(guān)閉或抑制異常表達(dá)的基因來克服疾病的治療方法。2、反義核酸：是指能與特定 mRNA精確互補(bǔ)、特異阻斷其翻譯的 RNA或DNA分子。3、反義DNA：也稱反義寡核苷酸或反義脫氧寡核苷酸，是一種人工合成的、能與 mRNA互補(bǔ)的、用于抑制翻譯的短小反義核酸分子。4、同尾酶：指切割 DNA可產(chǎn)生相同的黏性末端的限制酶5、轉(zhuǎn)導(dǎo)：指以噬菌體為載體，在細(xì)菌之間轉(zhuǎn)移 DNA的過程，有時也指在真核細(xì)胞之間通過逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移和獲得細(xì)胞DNA的過程。6、ａ-互補(bǔ)：指半乳糖苷酶的兩個無活性片段組合而成為功能完整的酶的過程。7、轉(zhuǎn)化：指將質(zhì)?；蚱渌庠?DNA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細(xì)胞，并使其獲得新的表型的過程。8、基因克?。和ㄟ^體外重組技術(shù)，將一段目的 DNA經(jīng)切割、連接插入適當(dāng)載體，并導(dǎo)入受體細(xì)胞，擴(kuò)增形成大量子代分子的過程。9、核酶：是一類具有催化活性的 RNA分子，具有核苷酸水解活性，可特異性剪切 RNA分子，相當(dāng)于 RNA酶。10、位點(diǎn)偏愛：某些限制酶對同一底物中的有些位點(diǎn)表現(xiàn)出偏愛性切割，即對不同位置的同一識別序列表現(xiàn)出不同的切割效率，這種現(xiàn)象稱作為位點(diǎn)偏愛。二、選擇在(B)誘導(dǎo)下，目的蛋白與lacZ就會以融合蛋白的形式表達(dá)出來。A.dNTP C.DMSO（A）可使表達(dá)蛋白避免被細(xì)胞內(nèi)蛋白降解，或使表達(dá)的蛋白正確折疊，從而達(dá)到維護(hù)目的蛋白的目的。A.分泌表達(dá)載體 融合表達(dá)載體 C. 組氨酸標(biāo)簽表達(dá)載體 D.內(nèi)含肽表達(dá)載體的瓊脂糖凝膠電泳方向為（ B）A. 正極向負(fù)極 B. 負(fù)極向正極 C濃度高向濃度低. D. 濃度低向濃度高4.影響脈沖場凝膠電泳電泳分辨率的最關(guān)鍵因素是（ D ）A.電場強(qiáng)度 B. 緩沖液濃度 C. 溫度 D.脈沖時間控制潛在RNA酶活性最重要的是（C）A.使用 RNA酶抑制劑 B.實(shí)驗用具 C.細(xì)致謹(jǐn)慎的操作 D.溫度控制6.酵母基因表達(dá)系統(tǒng)的宿主不具有以下哪一條件 (B)A.安全無毒 B.載體 DNA轉(zhuǎn)化頻率低 C. 發(fā)酵周期短 D.蛋白質(zhì)分泌能力好7. 釀酒酵母的附加體形表達(dá)載體有（ D）的缺點(diǎn)A.蛋白分泌能力差 B.無終止子 C.不能獨(dú)立復(fù)制 D.無選擇壓力時不穩(wěn)定（C）不能用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)來生產(chǎn)。A.胰島素 B. 干擾素 D. 賽若金9.中國學(xué)者從人臍血白細(xì)胞中獲得的（ B）基因已用于我國第一個基因工程干擾素的生產(chǎn)。A.胰島素 B. 干擾素ａ-1b下列哪項不屬于反義核酸藥物(D)A.反義DNA B. 核酶 C. 肽核酸答案：BABDCBDCBD型限制與修飾系統(tǒng)的酶分子是（ B）A.內(nèi)切酶與甲基化酶分子在一起 B. 三亞基雙功能酶C.二亞基雙功能酶 D. 四亞基雙功能酶12.限制性內(nèi)切酶的命名遵循的一定原則（ D）A．種名 B. 菌株號 C. 屬名 D. 種名，菌株號或生物型13.大腸桿菌 DNA聚合酶I 型5’→3’外切核酸酶活性的反應(yīng)底物是（ C）A.單鏈DNA及引物 ’突出的雙鏈 DNAC.雙鏈DNA或DNA:RNA雜交體 D. 帶3’—OH的雙鏈DNA或單鏈DNA14．提高酶連接效率的方法（ C）A.加大酶量20倍 B. 降低溫度C.加大平頭末端的底物濃度 D. 降低平頭末端的底物濃度堿性磷酸酶CIAP指（D）A.細(xì)菌和蝦的細(xì)菌堿性磷酸酶 B. 蝦堿性磷酸酶C.細(xì)菌堿性磷酸酶 D. 牛小腸堿性磷酸酶為了突出3’末端可采用的方法（A）A．T4—DNAPOL切平，然后平頭連接 補(bǔ)平，然后平頭連接C．S1核酸酶切平，然后平頭連接 補(bǔ)平，或 S1核酸酶切平能使X—gal變藍(lán)的條件是（C）A.有α—片段 B. α—受體片段C.同時具有α—片段和α—受體片段 D. 同時具有β—片段和β受體片段18.當(dāng)基因組 DNA長度為野生型入噬菌體基因組多少時，不會明顯影響存活能力（ C）％~90％ ％~78％ ％~105％ ％以上19質(zhì)粒PSC101帶有何種抗性基因（ B）A.卡那霉素抗性基因 B. 四環(huán)素抗性基因 C. 青霉素抗性基因 D. 鏈霉素抗性基因20.宿主為rec+，可在噬菌體溶源性細(xì)菌中鑒別重組合非重組入噬菌體的條件為（ C）game 基因存在 game 基因缺失，無 chi位點(diǎn)game 基因缺失或替換，且有 chi位點(diǎn) game 基因存在且無 chi位點(diǎn)三、判斷1.酶切反應(yīng)的反應(yīng)溫度大多數(shù)為 37℃ 對連接酶只連接雙鏈 DNA分子，不需要ATP。 錯3.同一質(zhì)粒盡管分子量不同，不同的構(gòu)型電泳遷移率不同，其中 ocDNA最快，scDNA最慢。錯4．酵母 DNA的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法操作簡便，容易掌握，但轉(zhuǎn)化率不穩(wěn)定，成本較高。錯同尾酶的黏性末端互相結(jié)合后形成的新位點(diǎn)，一般不能再被原來的酶識別。對6.在藍(lán)白斑篩選中，只有同時存在 α—片段和α—受體片段才能使 X—gal變藍(lán)。對7.基因組大小分左臂，中段，右臂三部分。 對基因的表達(dá)抑制λ噬菌體進(jìn)入溶源狀態(tài)。 錯位點(diǎn)是一段與重組事件相關(guān)聯(lián)的 10bpDNA序列，它激活以 rec為媒介的交換反應(yīng)。 錯的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗中， RNA分析是在變性的條件下進(jìn)行的，常用的變性劑為乙醛。錯四、簡答一簡述載體應(yīng)具備的特征 P391在宿主細(xì)胞內(nèi)必須能夠自主復(fù)制（具備復(fù)制原點(diǎn)） ；2必須具備合適的酶切位點(diǎn)，供外源 DNA片段插入，同時不影響其復(fù)制；有一定的選擇標(biāo)記，用于篩選；最好有較高的拷貝數(shù)，便于載體的制備。二簡述構(gòu)建質(zhì)粒載體的基本策略和構(gòu)建過程P43（一）基本策略能在受體細(xì)胞內(nèi)有效的復(fù)制；必須含有允許外源DNA片段克隆的位點(diǎn)，切盡可能的多；含有供選擇克隆子的標(biāo)記基因；載體DNA分子盡可能小。（二） 構(gòu)建過程1選擇合適的出發(fā)質(zhì)粒（親本質(zhì)粒） ；正確獲得構(gòu)建質(zhì)?？寺≥d體的元件；選擇合適的選擇標(biāo)記基因；在能達(dá)到預(yù)期目的的前提下，過程力求簡單。三大腸桿菌表達(dá)載體的表達(dá)形式和優(yōu)缺點(diǎn) P87包涵體蛋白，沒有生物學(xué)活性、易于分離純化、不會被細(xì)胞內(nèi)蛋白的降解作用、不會傷害宿主細(xì)胞；2融合蛋白，穩(wěn)定性大大增加、較高效率、易于分離純化、一般受體蛋白位于N端外源蛋白位于表面；3分泌型外源蛋白，更易于分離純化、需在N端加入信號肽序列、減少外源蛋白在細(xì)胞內(nèi)被蛋白酶降解的概率。四簡述能夠發(fā)展成基因表達(dá)系統(tǒng)的宿主應(yīng)具備的條件P279安全無毒，不致??；遺傳背景清楚，容易進(jìn)行遺傳操作；構(gòu)建的載體DNA容易進(jìn)入，轉(zhuǎn)化頻率較高；發(fā)酵周期短，培養(yǎng)條件簡單，容易進(jìn)行高密度發(fā)酵；蛋白質(zhì)分泌能力良好；有類似高等真核生物的蛋白質(zhì)翻譯后的修飾功能。五酵母基因工程的優(yōu)點(diǎn)（至少 5點(diǎn)）P2751酵母是真核生物，大多具有較高的安全性，如釀酒酵母可作為單細(xì)胞蛋白直接添加于飼料中 ;酵母繁殖速度快，能夠向細(xì)菌一樣在廉價的培養(yǎng)基上高密度培養(yǎng)，因此能大規(guī)模生產(chǎn)，具有降低基因工程產(chǎn)品成本的潛力；將原核生物中已知的分子和基因操作技術(shù)與真核生物中復(fù)雜的轉(zhuǎn)譯后修飾能力相結(jié)合，能方便的用于外源基因的操作；作為真核生物，提供了翻譯后加工和分泌的環(huán)境，使得產(chǎn)物與天然蛋白一樣或類似；不會形成不溶性的重組蛋白包涵體易于進(jìn)行分離提純。五、論述裂解提取法大腸桿菌質(zhì)粒 DNA的過程和幾種純化質(zhì)粒的方法 P101