HPLC測(cè)定水中苯酚類化合物課件

高效液相色譜法

測(cè)定水中苯酚類化合物

指導(dǎo)教師：趙建軍一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1、初步掌握高效液相色譜儀的基本原理和使用方法。2、了解反相液相色譜法分離非極性與弱極性化合物的基本原理。3、掌握反相液相色譜法分離苯酚類化合物的試驗(yàn)條件。4、對(duì)水中苯酚類化合物進(jìn)行定性和定量分析。二、實(shí)驗(yàn)原理1、反相液相色譜法是指流動(dòng)相極性大于固定相極性的分離體系。分離機(jī)理：基于被分離組分與固定相疏水作用力的差別。2、定性分析：在相同色譜條件下，任何物質(zhì)都有一確定的保留值（保留時(shí)間或保留體積）。在了解樣品來源、性質(zhì)的情況下，在相同的色譜條件下，待測(cè)組分與標(biāo)樣的保留值相一致，就可以初步認(rèn)定為待測(cè)組分與標(biāo)樣是同一物質(zhì)。3、定量分析：(外標(biāo)法)標(biāo)準(zhǔn)品：測(cè)得保留時(shí)間或積分面積。待測(cè)樣品：測(cè)得保留時(shí)間或積分面積。

通過計(jì)算得到待測(cè)樣品的濃度。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

高效液相色譜儀試劑：鄰苯二酚、對(duì)苯二酚、間苯二酚，甲醇（色譜純）定性標(biāo)準(zhǔn)溶液：鄰苯二酚，對(duì)苯二酚，間苯二酚，含量均為100μgml-1單標(biāo)水溶液定量標(biāo)準(zhǔn)溶液：含鄰苯二酚，對(duì)苯二酚，間苯二酚各適量，置于50ml容量瓶中，用二次蒸餾水定容，得到質(zhì)量濃度分別為100μgml-1和200μgml-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。2、具體步驟1)用20%甲醇清洗進(jìn)樣針2)進(jìn)樣針吸取對(duì)本二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)得保留時(shí)間吸光度（t1，A1）3)進(jìn)樣針吸取鄰本二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)得保留時(shí)間吸光度（t2，A2）4)進(jìn)樣針吸取樣品溶液，測(cè)得3個(gè)峰值的保留時(shí)間，吸光度（t1’、t2’tx’A1’Ax’A2’）5)計(jì)算鄰本二酚、對(duì)苯二酚的濃度1．工作準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)室級(jí)別：溫度：

相對(duì)濕度：

流動(dòng)相的確認(rèn)：是否過濾和脫氣？樣品確認(rèn)2．高效液相色譜柱的確認(rèn)

色譜柱型號(hào)：

。色譜柱連接是否完好

；有無漏液現(xiàn)象。3、實(shí)驗(yàn)條件：檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)nm

流速：ml/min、柱壓力Mpa柱溫：0C附Ⅱ：（預(yù)習(xí)）實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式4．檢測(cè)過程

(

1)、洗柱、平衡柱流動(dòng)相：

流速：

（ml/min）時(shí)間：

（min）(2)、上樣上樣量：

μl流速：

(ml/min)樣品采集時(shí)間

（min）(3)、淋洗（或洗脫）流動(dòng)相：

流速：

（ml/min）時(shí)間：

（min）(4)、封柱流動(dòng)相：

流速：

（ml/min）時(shí)間：

（min）5.判定1判定標(biāo)準(zhǔn)：2判定結(jié)果：

檢品批號(hào)檢測(cè)結(jié)果：

6.實(shí)驗(yàn)后檢查1梯度控制器是否切斷電源

2紫外-可見光檢測(cè)器是否切斷電源

3電腦是否切斷電源

4高壓液相色譜泵是否切斷電源

5使用后玻璃器皿、工作