肝炎病毒及其檢驗(yàn)

關(guān)于肝炎病毒及其檢驗(yàn)第1頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

肝炎病毒（hepatitisviruses，HV）是指以侵害肝臟為主引起病毒性肝炎的一組病原體。目前公認(rèn)的肝炎病毒至少有5種，即甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）和戊型肝炎病毒（HEV）。

近年還發(fā)現(xiàn)一些與人類肝炎相關(guān)的病毒，如GB病毒-C/庚型肝炎病毒（GBV-C/HGV）和輸血傳播性病毒（TTV）病毒，但由于致病性不清，均未被最后確定和命名。

此外，還有一些病毒如黃熱病毒、CMV、EBV、風(fēng)疹病毒等雖也可引起肝炎，但不列入肝炎病毒范圍之內(nèi)。第2頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五屬于不同的科family和屬genus第3頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第4頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第一節(jié)甲型肝炎病毒

甲型肝炎病毒（hepatitisAvirus，HAV）首先是Feinstone于1973年應(yīng)用免疫電鏡技術(shù)在急性期肝炎患者糞便中發(fā)現(xiàn)的。

1982年國際病毒命名委員會(huì)將其分類為小RNA病毒科腸道病毒屬72型。近年又被單列為腸道病毒科的嗜肝RNA病毒屬（heparnavirus）。

第5頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五世界各地HAV流行狀況

流行情況地區(qū)平均發(fā)病年齡(歲)主要傳播途徑很高非洲、南美部分地區(qū)、中東部分地區(qū)和東南亞部分地區(qū)<5日常生活接觸傳播經(jīng)食物和水傳播高度巴西亞馬遜河盆地、中國和拉丁美洲5～14日常生活接觸傳播暴發(fā)/經(jīng)食物和水傳播中度歐洲東部和南部、中東部分地區(qū)5～24日常生活接觸傳播暴發(fā)/經(jīng)食物和水傳播低度澳大利亞、美國和西歐5～40同源暴發(fā)很低北歐和日本>20高流行區(qū)旅行由非同源暴露而感染第6頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第7頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五1、形態(tài)與結(jié)構(gòu)

一、生物學(xué)性狀球形顆粒，無包膜衣殼:20面體立體對(duì)稱，由

VP1～VP4等4種多肽組成，其中VP1是主要的衣殼蛋白?；蚪M:線狀+ssRNA，穩(wěn)定性高。第8頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五2、血清型至今，世界各地HAV只發(fā)現(xiàn)一個(gè)血清型。第9頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五3、易感動(dòng)物和細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物模型黑猩猩、狨猴及獼猴等靈長類動(dòng)物易感，且可傳代。細(xì)胞培養(yǎng)

HAV生長緩慢，接種后約需4周才可檢出抗原HAV可用非洲綠猴腎細(xì)胞、人胚腎細(xì)胞、傳代猴腎細(xì)胞(Vero、BSC-1、FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍體成纖維細(xì)胞和人肝癌細(xì)胞株(PLC／PRF／5)等。第10頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五4、抵抗力

較一般腸道病毒抵抗力強(qiáng)

在淡水、海水、污水、泥沙毛蚶等水產(chǎn)品中存活數(shù)天至數(shù)月。

HAV易通過食物和水在人群中傳播

第11頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

溫度

60℃可存活4h80℃5min完全滅活

100℃1min完全滅活

4℃其抗原性和組織培養(yǎng)活性可保持1年

-20℃可存活多年并保持傳染性第12頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五化學(xué)消毒劑3%福爾馬林5min均可滅活

70%乙醇3min部分滅活不耐受冷凍干燥，對(duì)紫外線敏感第13頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五鑒于HAV有相當(dāng)大的抵抗力，因此對(duì)肝炎患者及其排泄物處理應(yīng)特別小心。第14頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五1、傳染源與傳播途徑傳染源：多為患者和隱性感染者?；颊邼摲诤笃诩凹毙云诘难汉图S便均有傳染性。傳播途徑：主要通過糞-口途徑傳播經(jīng)食物傳播經(jīng)食用受污染的貝殼類水產(chǎn)品經(jīng)產(chǎn)、供、銷環(huán)節(jié)污染的食物經(jīng)水傳播衛(wèi)生條件差的國家和地區(qū)特點(diǎn)發(fā)病者多飲用同一水源，病例分布與供水范圍一致日常生活接觸傳播

二、致病性與免疫性第15頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五致病機(jī)制HAV主要侵犯兒童和青年，且多為隱性感染:HAV口小腸淋巴結(jié)內(nèi)增殖血（病毒血癥）肝細(xì)胞內(nèi)增殖致?。ǔ霈F(xiàn)臨床癥狀）。2、致病性與免疫性第16頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五免疫性感染后可產(chǎn)生持久免疫力。早期：IgM；同時(shí)，從糞便中檢出sIgA抗體?；謴?fù)期：IgG，并可持續(xù)多年；特異細(xì)胞免疫應(yīng)答。第17頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

(一)病毒檢測：潛伏期末期和急性期早期，取糞便用免疫電鏡檢測HAV顆粒；用放射免疫(RIA)或酶免疫(EIA)法檢測HAV的抗原。

(二)血清學(xué)檢查：檢測抗HAV常用RIA和EIA法。檢測抗HAVIgM有助于早期診斷；測抗HAVIgG有助于流行病學(xué)調(diào)查；測糞便中抗HAVIgA也有助于診斷。

(三)病毒核酸檢測：應(yīng)用cDNA-RNA分子雜交技術(shù)及PCR技術(shù)檢測HAV的RNA，方法特異、敏感。三、微生物學(xué)檢查法第18頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

HAV感染后以隱性感染和無黃疽型病例占多數(shù)。預(yù)防：一般性預(yù)防：搞好衛(wèi)生。特異性預(yù)防：我國使用減毒甲型肝炎活疫苗(H2

株和L1株)；國外已生產(chǎn)滅活疫苗，

HAV基因工程疫苗正在研制中。治療：甲型肝炎為自限性疾病，經(jīng)治療可痊愈，不轉(zhuǎn)慢性亦不留后遺癥。四、防治原則第19頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第二節(jié)乙型肝炎病毒

乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）屬嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）。HBV是乙型肝炎病原體，主要經(jīng)輸血、注射、性行為和母嬰傳播。起病徐緩，部分患者可轉(zhuǎn)為慢性，少數(shù)還可導(dǎo)致肝硬化和肝癌。第20頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBV感染的分布第21頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

①小球形顆粒：直徑22nm，成分HBsAg，不含HBVDNA和DNA聚合酶，無感染性；②管形顆粒：直徑22nm，長度在50～700nm之間，成分HBsAg

；③大球形顆粒：即Dane顆粒，直徑42nm，具有感染性的完整病毒顆粒。一、生物學(xué)性狀1、形態(tài)與結(jié)構(gòu)第22頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五乙肝病毒的三種顆粒小球形顆粒大球形顆粒（Dane顆粒）管形顆粒第23頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五完整的HBV顆粒亦稱Dane顆粒，具有雙層核衣殼結(jié)構(gòu)，由內(nèi)向外分為分為三部分：核心：DNA和DNA多聚酶。內(nèi)衣殼：為HBcAg，在酶和去垢劑作用下可暴露HBeAg

。外殼（包膜）：厚7nm。雙層脂質(zhì)蛋白質(zhì)：含有HBsAg、PreS1和PreS2第24頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五核心蛋白HBcAgHBsAgS蛋白第25頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

2、HBV基因結(jié)構(gòu)

HBVDNA是由長鏈L(負(fù)鏈)和短鏈S(正鏈)組成的不完全雙鏈環(huán)狀DNA，短鏈的長度相當(dāng)于長鏈的50%～85%。

HBVDNA長鏈載有病毒蛋白質(zhì)的全部密碼，有4個(gè)開放讀碼框架(ORF)，分別稱為S、C、P和X區(qū)，能編碼全部已知的HBV蛋白。第26頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第27頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五3、病毒蛋白

外殼蛋白：幫助HBV吸附至肝細(xì)胞受體，具有抗原性。在病毒繁殖和復(fù)制過程中發(fā)揮重要作用。能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。第28頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

HBsAg最早出現(xiàn)的血清學(xué)標(biāo)志之一是HBV感染的基本標(biāo)志

HBsAg陽性見于乙肝的潛伏期、急性期慢性乙肝病毒攜帶與HBV感染有關(guān)的肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌注意HBsAg陰性并不能完全排除HBV感染(S基因突變或低水平表達(dá))第29頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBsAb：特異性中和抗體、保護(hù)性抗體HBsAb陽性可見于乙型肝炎恢復(fù)期，在HBsAg消失后間隔一定時(shí)間HBsAb出現(xiàn)隱性感染的健康人，自身產(chǎn)生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效價(jià)免疫球蛋白(HBIG)后，產(chǎn)生的主動(dòng)或被動(dòng)免疫第30頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五3、病毒蛋白

核殼蛋白HBcAg:C基因編碼，結(jié)構(gòu)蛋白，具有較強(qiáng)的免疫原性。僅存在感染的細(xì)胞中。HBeAg:前C基因編碼，非結(jié)構(gòu)蛋白，可溶性蛋白，使HBV逃避宿主機(jī)體的免疫清除，得以在攜帶者體內(nèi)長期存在。可被分泌到血清中。第31頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBcAg

不能從血清中直接檢出

Dane顆粒經(jīng)去垢劑處理HBcAg釋放檢測HBcAb

非中和抗體、分IgM和IgG

主要見于慢性感染和既往感染HBcAbIgM

通常在出現(xiàn)癥狀時(shí)即可檢出，一般持續(xù)約6個(gè)月，提示HBV復(fù)制，是急性感染的重要指標(biāo)，也是慢性活動(dòng)性肝炎的重要標(biāo)志HBcAbIgG

在抗-HBcIgM下降及消失后出現(xiàn)，可伴隨感染者終生存在第32頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBeAg：幾乎與HBsAg平行出現(xiàn)，HBeAg可作為HBV復(fù)制及血清具有傳染性的標(biāo)志；

HBeAb陽性主要見于HBsAg陽性的患者；急性乙型肝炎進(jìn)入恢復(fù)期時(shí)HBeAg消失，HBeAb陽性；但HBeAb亦見于攜帶者及慢性乙型肝炎血清中。第33頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五檢測HBV抗原、抗體檢測的項(xiàng)目主要是HBsAg和HBsAb、HBeAg和HBeAb、以及HBcAb（俗稱的‘兩對(duì)半’），必要時(shí)也可檢測PHSA、PreS1和PreS2的抗原和抗體。上述各項(xiàng)檢查組成一套乙型肝炎病毒抗原抗體檢測系統(tǒng)(HBV血清標(biāo)志)。

第34頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測結(jié)果分析HBsAgHBeAgHBsAbHBeAbHBcAb結(jié)果分析+----HBV感染或無癥狀攜帶者++---急性或慢性乙型肝炎，或無癥狀攜帶者++--+急性或慢性乙型肝炎（傳染性強(qiáng)，“大三陽”）+--++急性感染趨向恢復(fù)（“小三陽”）--+++既往感染恢復(fù)期--++-既往感染恢復(fù)期----+既往感染--+--既往感染或接種過疫苗第35頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五4、血清HBVDNA檢測

核酸分子雜交及PCR技術(shù)檢測HBVDNA可用于乙型肝炎的診斷及流行病學(xué)調(diào)查。常用斑點(diǎn)雜交法將特異的HBVDNA探針與患者血清進(jìn)行雜交檢測血清中HBVDNA，方法敏感、特異，能測出0.1-1pg核酸。用PCR技術(shù)檢測患者血清中HBVDNA,在臨床上也已用于輔助診斷，特別是定量PCR能測出DNA拷貝數(shù)量，可做為藥物療效的考核指標(biāo)。第36頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五動(dòng)物模型與細(xì)胞培養(yǎng)：黑猩猩是研究HBV的最佳動(dòng)物模型。動(dòng)物模型：樹鼩、土撥鼠、地松鼠。

HBV尚不能在細(xì)胞培養(yǎng)中分離培養(yǎng)，目前采用病毒DNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系第37頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五乙肝防治第38頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五臨床特點(diǎn)1.潛伏期：2～6個(gè)月急性感染

慢性乙型肝炎肝硬化肝癌

死亡慢性攜帶者

痊愈肝硬化痊愈

死亡

靜止性肝硬化

2.臨床類型：第39頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五抵抗力：

HBV對(duì)外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，對(duì)低溫、干燥、紫外線均有耐受性。自然條件下，可以停留在一些物體表面一周而不失去感染性。60℃10小時(shí)、100℃10分鐘：感染性消失不被70%乙醇滅活煮沸30分鐘、121℃高壓20分鐘，可滅活第40頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBV進(jìn)入血液的主要途徑：

①母嬰垂直傳播：我國現(xiàn)有HBsAg陽性者約1.4億人，其中85%通過母嬰傳播。垂直傳播是我國乙型肝炎蔓延和高發(fā)的主要原因。也有少數(shù)為父嬰傳播者。母嬰傳播主要是通過產(chǎn)道感染或?qū)m內(nèi)感染。

②血液或血制品傳播：被HBV污染的血制品如白蛋白、血小板或血液輸給受血者，多數(shù)會(huì)發(fā)生輸血后肝炎，另外血液透析、腎透析時(shí)也會(huì)感染HBV。

③醫(yī)源性傳播：被HBV污染的醫(yī)療器械（如手術(shù)刀、牙鉆、內(nèi)窺鏡、腹腔鏡等）均可傳播HBV。

④家庭內(nèi)密切接觸：主要指性接觸、日常生活密切接觸（如同用一個(gè)牙刷、毛巾、茶杯和碗筷），均有受HBV感染的可能。HBV可通過破損粘膜進(jìn)入密切接觸者的體內(nèi)。

⑤公共場所、理發(fā)店、美容院等容易被HBV污染，如浴池、剃刀等均可傳染HBV。

第41頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五防治原則控制傳染源，切斷傳播途徑人工自動(dòng)免疫：疫苗（血源性、基因工程)人工被動(dòng)免疫：高效價(jià)人血清球蛋白（HBIg）第42頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五防治原則

基因工程疫苗（優(yōu)點(diǎn)）效果出現(xiàn)抗-HBs的陽性率80.3%-96.2%第43頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五BeclonedYeastInlargefermentersHBsAgproteinvaccineFirst

recombinantantigenvaccine

HepatitisBvaccineHBsAgPurifiedinduceProtectiveantibodies第44頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五IfyouhaveneverhadhepatitisB,

youcanget3shots...

...andgetlonglastingprotection.321HepatitisBcanbeprevented!第45頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五6monthsoldHepatitisBVaccineBabyShotsforHepatitisBifthemotherhasHepatitisB1-2monthsoldHepatitisBVaccine+BirthH-BIGHepatitisBVaccine第46頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五2008-5-19第一個(gè)WORLDHEPATITISDAYAmInumber12?全球每12人中就有一個(gè)是乙肝或丙肝病毒攜帶者第47頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五嬰幼兒感染幅度下降過半成人無乙肝抗體（15-59歲）第48頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五乙肝抗病毒治療1、干擾素（普通干擾素、長效干擾素）該類藥物的優(yōu)點(diǎn)是有固定療程、不產(chǎn)生病毒耐藥、HBeAg,HBsAg血清轉(zhuǎn)換率高且應(yīng)答持久、具有調(diào)節(jié)免疫和抗病毒雙重功效；缺點(diǎn)：需皮下注射、價(jià)格較高、不良反應(yīng)較多等第49頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五乙肝抗病毒治療2、核苷（酸）類似物這類藥物的優(yōu)點(diǎn)是：三性“有效性、易行性、安全性”，但是也有療程不固定、易發(fā)生病毒耐藥、停藥后易復(fù)發(fā)等的缺點(diǎn)。拉米夫定，阿德福韋酯，替比夫定，恩替卡韋，替諾福韋酯，克拉夫定等。第50頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第三節(jié)丙型肝炎病毒

丙型肝炎病毒（HepatitisCvirus，HCV）引起丙型肝炎。

HCV主要經(jīng)血或血制品傳播，目前占輸血后肝炎的80%～90%。在我國丙型肝炎流行率為2.1%。其臨床和流行病學(xué)特點(diǎn)類似乙型肝炎，但癥狀較輕，演變?yōu)槁哉叨嘁?，部分患者可發(fā)展為肝硬化或肝癌。

第51頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

一、生物學(xué)性狀HCV屬于黃病毒科（flaviviridae）丙型肝炎病毒屬。其生物學(xué)性狀及基因結(jié)構(gòu)與黃病毒相似。

HCV呈球形，其直徑約為30nm～60nm，外有脂蛋白包膜。

第52頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

核酸為+ssRNA。

5′端UTR核酸序列保守性強(qiáng)，病毒株間差異小，可用于診斷。包膜蛋白區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白1區(qū)基因易變異，包膜蛋白抗原性變異，不被抗體識(shí)別，病毒持續(xù)存在，易發(fā)展成慢性；

第53頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

至今HCV的細(xì)胞培養(yǎng)尚未成功。黑猩猩是HCV唯一易感動(dòng)物。

HCV對(duì)一般理化消毒劑敏感，對(duì)氯仿、乙醚等有機(jī)溶劑敏感，紫外線照射、100℃5min、20%次氯酸、福爾馬林(1∶1000)均可使HCV失活。第54頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

HCV主要通過輸血或血制品、注射和母嬰傳播。潛伏期為2～26w，平均7.4w，但由輸血或血制品引起的丙型肝炎潛伏期較短，大多數(shù)在輸血后5～12w發(fā)病。大多數(shù)患者不出現(xiàn)癥狀或癥狀較輕，多為無黃疽型，50%的患者演變?yōu)槁愿窝?，部分發(fā)展為肝硬變，甚至原發(fā)性肝癌。關(guān)于HCV感染的慢性化機(jī)制，目前認(rèn)為HCV并不直接引起肝細(xì)胞損害，而主要是通過免疫病理損傷和細(xì)胞凋亡導(dǎo)致肝細(xì)胞破壞。二、致病性和免疫性第55頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

HCV感染后：抗HCVIgM：出現(xiàn)較早，持續(xù)時(shí)間短；抗HCVIgG：出現(xiàn)較遲。這些抗體在抗HCV感染中有何實(shí)際意義，是否具有保護(hù)作用，目前尚不十分清楚。第56頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

預(yù)防主要通過檢測抗HCV或HCVRNA篩選獻(xiàn)血員來降低輸血后丙型肝炎的發(fā)病率。其他預(yù)防措施同HBV。目前還無特異性防治對(duì)策，一般治療原則與乙型肝炎相同。三、防治原則第57頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五第四節(jié)丁型肝炎病毒

丁型肝炎病毒（hepatitisDvirus，HDV），曾稱δ肝炎病毒（hepatitisδvirus），是丁型肝炎的病原體。通過黑猩猩實(shí)驗(yàn)感染證明它是一種缺陷病毒，必須在HBV或其它嗜肝DNA病毒輔助下才能復(fù)制，因此其致病必須同時(shí)有HBV感染，病情較單純感染HBV的患者嚴(yán)重。

第58頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五HBs抗原RNAd抗原丁型肝炎病毒()第59頁，共66頁，2022年，5月20日，21點(diǎn)15分，星期五

HDV為直徑35nm～37nm的球形顆粒，核心含有環(huán)狀-ssRNA和HDV抗原(δ抗原)。HDV表面為HBV包膜，主要含有HBsAg。HDV不能獨(dú)立復(fù)制，須在HBV或其他嗜肝DNA病毒輔助下才能增殖。

HDVRNA可編碼

H